Кетуксимаб, панитумумаб зэрэг зорилтот эмүүдийг бүдүүн гэдэсний хорт хавдрыг эмчлэх үр дүнтэй эм болгон эмнэлгүүдэд өргөн ашигладаг. Эмнэлзүйн мэдээллээс харахад KRAS мутацитай өвчтөнүүд энэхүү моноклональ эсрэгбиеийн эмэнд мэдэгдэхүйц нөлөө үзүүлэхгүй бөгөөд зөвхөн зэрлэг төрлийн өвчтөнүүдэд л ашиг тустай байдаг. Тиймээс KRAS генийн мутацийн статусыг эмнэлзүйн хувьд эмчилгээний чухал маркер гэж үздэг бөгөөд энэ нь бүдүүн гэдэсний хорт хавдрын прогноз, эмчилгээний үр дүнтэй хүчтэй хамааралтай байдаг. 2009 оны Үндэсний Хавдрын Цогц Сүлжээний (NCCN) Бүдүүн гэдэсний хорт хавдрын эмнэлзүйн удирдамжид үсэрхийлсэн бүдүүн гэдэсний хорт хавдартай бүх өвчтөн KRAS генийн мутацийн төлөвийг илрүүлэх ёстой бөгөөд зөвхөн KRAS зэрлэг төрлийн EGFR зорилтот эмчилгээг авахыг зөвлөж байна. Мөн онд Америкийн Клиникийн Онкологийн Нийгэмлэг (ASCO) нь хавдрын зорилтот эмчилгээний молекулын маркертай ижил эмнэлзүйн эмчилгээний зөвлөмжийг гаргасан нь түүний чухал ач холбогдлыг харуулж байна. Одоогийн байдлаар KRAS генетикийн шинжилгээг эмнэлзүйн хувьд өргөн хүрээнд хийж байна. Бид голчлон эмнэлзүйн сонголтод ашиглах зорилгоор дотоодын KRAS генийн мутацийг илрүүлэх аргуудыг үнэлдэг.
1. Шулуун гэдэсний хорт хавдрын KRAS генийн мутацийн эерэг түвшин
Шулуун гэдэсний хорт хавдрын үед KRAS генийн мутацийн түвшин 35-45% хүртэл өндөр байдаг ба өндөр эрсдэлтэй мутацийн талбар нь 12-р эксон дээр 13, 2-р кодон байдаг бөгөөд 61, 146 гэх мэт ховор тохиолддог. сайт. KRAS генийн мутацийг илрүүлэх олон арга байдаг бөгөөд үүнд шууд дараалал, өндөр нарийвчлалтай хайлах муруйн шинжилгээ (HRM), пиросеквенц, тоон ПГУ, мутацийн олшруулалтын блок систем (amplinc atio) nrefractorymutation систем (ARMS), хязгаарлалтын фрагментийн урт полиморфизм (RFLP), полимеразын гинжин урвал-нэг хэлхээтэй конформацийн полиморфизмын шинжилгээ (ПГУ-синглстранд конфомац полиморфизм (ПГУ-SSCP), доод денатурацийн температурт ПГУ (COLD-PCR) -т хамтарсан олшруулалт ба өндөр үзүүлэлттэй шингэн хроматографийн шинжилгээ гэх мэт.
2. KRAS мутацийг илрүүлэх аргын үнэлгээ
1. Шууд дарааллын арга: Энэ нь KRAS генийн мутацийг илрүүлэх хамгийн сонгодог арга бөгөөд генийн мутацийг илрүүлэх алтан стандарт юм. Дидекси дарааллын зарчим дээр суурилсан шууд дарааллын арга нь үндсэн оргил газрын зураг хэлбэрээр генийн дарааллын өөрчлөлтийг хамгийн зөн совингоор харуулж чадна. Илрүүлэх төрөл нь илүү өргөн цар хүрээтэй бөгөөд энэ нь мутацийг илрүүлэх хамгийн эртний арга юм. Шинэ үеийн дарааллын платформууд гарч ирсэн хэдий ч гадаад дотоодын эрдэмтэд шууд дарааллын үр дүнг шинэ аргын найдвартай байдлыг хэмжих, тодорхойлох масштаб болгон ашигладаг. Гао Жинг нар. Шулуун гэдэсний хорт хавдартай 966 өвчтөнд KRAS ба BRAF генийн мутацийг илрүүлэх шууд дарааллыг хэрэглэв. Энэ нь мөн KRAS генийн мутацийн талаархи судалгаанд дурдсан хамгийн том дотоод сорьц бүхий анализ юм. Линг Юн болон бусад хүмүүс шууд дарааллын арга нь мутацийн төрлийг тодруулж болох генийн мутацийн байдлыг ойлгоход хамгийн шууд бөгөөд үр дүнтэй илрүүлэх арга бөгөөд ялангуяа үл мэдэгдэх мутацийг илрүүлэх арга гэж үздэг. Энэ аргын мэдрэмж харьцангуй доогуур байгаа боловч хавдрын эсийг баяжуулах микродиссекцион гэх мэт аргаар сайжруулж болно. Шууд дарааллын аргыг дотоодын бусад судалгааны бүлгүүдэд KRAS-ийн илүү том түүврийн хэмжээг илрүүлэхэд мөн хэрэглэсэн болно. Гэсэн хэдий ч мэдрэмж бага байх нь шууд дарааллын хамгийн том сул тал юм. Хятадад мэдээлсэн үр дүнгээс харахад мутацийг шууд дарааллаар илрүүлэх түвшин бага биш байна. Лю Сяожин нар. Шууд дараалал ба пептидийн нуклейн хүчлийн хавчаарыг ПГУ (ПНА-ПГУ) -тай харьцуулж үзэхэд KRAS генийн мутацийн 43 тохиолдлыг шууд дарааллаар илрүүлжээ. Эдгээр мутациас гадна PNA-PCR-ийг шууд дарааллаар илрүүлсэн. Зэрлэг төрлөөс арван мутаци илэрсэн бөгөөд зэрлэг төрлийн өвчтөнүүдийг ПГУ-аар тодорхойлох, мутант өвчтнүүдийг тодорхойлох шууд дарааллын аргаар санал дэвшүүлэв. Qiu Tian нар. Шулуун гэдэсний хорт хавдрын 131 сорьцыг флюресцент ПГУ-ын оновчтой олигонуклеотидын сорьцын арга ба шууд дарааллын аргаар илрүүлж, KRAS генийн мутацийн эерэг түвшин 41.2% (54/131) ба 40.5% (53/131)). Bai Dongyu мөн янз бүрийн аргыг илрүүлэх мэдрэмжийн талаар ярилцав. Шулуун гэдэсний хорт хавдраар өвчилсөн 200 өвчтнөөс 63 нь RT-qPCR мутацигаар илэрсэн бөгөөд мутацийг илрүүлэх түвшин 31.5%; 169 дээжийг мутацийн 50 тохиолдлыг шууд дарааллаар амжилттай дараалалд оруулав, мутацийг илрүүлэх түвшин 29.6%. Шууд дарааллын арга нь KRAS-ийн генийн мутацийн статусыг үнэн зөв, бодитой, тусгайлан илрүүлж чаддаг боловч техникийн өндөр шаардлага, үйл ажиллагааны нарийн төвөгтэй байдал, хөндлөн бохирдол үүсгэх, үр дүнг тайлбарлахад цаг хугацаа их шаарддаг. тодорхой. Ихэнхдээ дарааллын тоног төхөөрөмж байдаггүй бөгөөд сорьцыг холбогдох компанид туршилтанд оруулах шаардлагатай байдаг бөгөөд энэ нь удаан хугацаа шаарддаг бөгөөд өндөр өртөгтэй тул хязгаарлалт ихтэй байдаг.
Пиросеквенцийн арга:
Пиросеквенцийн арга нь KRAS генийн мутацийг илрүүлэхэд дэс дарааллын мэдрэмж, илрүүлэх өртөг, тайлагнах цаг хугацааны хувьд илүү тохиромжтой арга юм. Энэ аргын давталт нь илүү дээр юм. Авсан оргил газрын зургийн дагуу Тодорхой талбайн мутацийн давтамжийн тоон судалгаа, өөр өөр талбайн мутацийн давтамжийг харьцуулах нь нэг харахад тодорхой байна. Сүүлийн жилүүдэд Ogino et al., Hutchins et al. Шулуун гэдэсний хорт хавдрын том дээжтэй өвчтөнүүдэд KRAS мутацийг туршиж үзэхийн тулд пиросекуензийн технологийг ашигла. Үр дүнгээс харахад пиросеквенц хийх технологи нь өвчтөнүүдийг зорилтот эмчилгээнд хамруулах хүчирхэг хэрэгсэл юм. Хавдрын молекулын оношлогоо нь өргөн хэрэглээний хэтийн төлөвтэй байдаг. Дотоодын эрдэмтэд пиросеквенц хийх технологийг ашиглан бүдүүн гэдэсний хорт хавдрын KRAS мутацийг эмнэлзүйн хувьд нарийвчлалтай, найдвартай илрүүлсэн. Энэ арга нь илүү өвөрмөц, өндөр мэдрэмжтэй байдаг. SundstrÖm нар. Эмнэлзүйн хэрэглээнд аллелийн өвөрмөц ПГУ ба пиросеквизинг харьцуулж үзэхэд KRAS мутацийн бүдүүн шулуун гэдэсний хорт хавдрын 314 тохиолдлын үед пиросеквенцийн онцлог шинж чанар нь аллелынхоос илүү байгааг тогтоожээ. ПГУ, хавдрын эсийн агууламж багатай эдэд сайн мэдрэмжтэй байдаг. Хавдрын эсийн эзлэх хувийг 1.25% -иас 2.5% хүртэл шингэлнэ. Пиросеквекц нь мутацийн дохиог илрүүлж чаддаг. Дээжинд агуулагдах мутант аллелийн хамгийн бага агууламжийг 20% -д хүргэх шаардлагатай бол Sanger дарааллаар илрүүлэх боломжтой бол HRM аргаар 10% хүрэхэд илрүүлж болох бөгөөд пиросеквенцийн хувьд зөвхөн мутацийг 5% -аар илрүүлэх боломжтой. Аллель. Бид шулуун гэдэсний хорт хавдартай 717 өвчтөнд KRAS мутацийг илрүүлэх зорилгоор пиросекуингинг ашиглан KRAS мутацийн давтамж 40.9% байгааг тогтоожээ. Кодоны мутацийн түвшин 12%, кодоны 30.1 мутацийн түвшин 13%, 9.8 кодоны мутацийн түвшин 61% байв. Туршилт хийхээс өмнө хавдрын өндөр агууламж бүхий эдийг гар аргаар бичил хувааж баяжуулж, үр дүнг илүү найдвартай болгосон. Энэ арга нь мэдрэмж, өвөрмөц чанар сайтай бөгөөд эмнэлзүйн практикт боловсруулахад хялбар байдаг. Пиросеквенцийн сул тал бол илрүүлэх өндөр өртөг бөгөөд дээжийг дараалалд оруулахад нэг судалтай ДНХ бэлтгэх үйл явц нь төвөгтэй байдаг. Ирээдүйд пиросеквенцийг давхар судалтай ПГУ-ын бүтээгдэхүүнийг шууд илрүүлэх технологийг боловсруулахад зориулж болох бөгөөд ингэснээр үйл ажиллагааг ихээхэн хөнгөвчлөх болно. Эмнэлзүйн туршилтыг цогцоор нь сурталчлахын тулд дарааллын зардлыг үр дүнтэй бууруулах.
3. ARMS арга:
Энэхүү технологи нь зэрлэг болон мутант генүүдийг ялгах праймерыг ашигладаг
ich-ийг 1980-аад оны үед мэдээлж байсан. Энэ аргын хамгийн том давуу тал нь 1.0% хүртэл мэдрэмтгий чанар бөгөөд 1.0% -иас доош дээжээс мутант генийг илрүүлэх чадвартай байдаг. Загварын хувьд зорилтот бүтээгдэхүүний уртыг хамгийн их хэмжээгээр богиносгож болох бөгөөд парафин агуулсан эдийн сорьцоос гаргаж авсан ДНХ-ийн дийлэнх хэсэг нь хэсэгчилсэн байдаг тул үнэн зөв илрүүлэлтийн үр дүнд хүрч чадахгүй байна. Энэхүү технологи нь бодит цаг хугацааны ПГУ-ын платформыг нэгтгэн олшруулалтын явцад хаалттай хоолойн ажиллагааг хангаж өгдөг. Үйл ажиллагаа нь энгийн бөгөөд бүтээгдэхүүнийг дараахь боловсруулалт шаарддаггүй бөгөөд энэ нь олшруулсан бүтээгдэхүүний бохирдлоос хамгийн их хэмжээгээр зайлсхийх боломжтой юм. Өнөөгийн байдлаар хилэнцэт хорхойн датчик ба олшруулалтын блокийн мутацийн системийг хослуулсан хилэнцэт хорхой-ARMS аргыг дэлхийд илүү түгээмэл ашиглаж байна. Хоёр технологийн хослол нь хоёр талын мэдрэмж, өвөрмөц байдлыг дээд зэргээр нэмэгдүүлэх боломжтой. Гао Жие нар. Шулуун гэдэсний хорт хавдартай 167 өвчтөний KRAS генийн мутацийн байдлыг илрүүлэхийн тулд энэ аргыг ашигласан нь энэ арга нь найдвартай бөгөөд үнэн зөв болохыг харуулж байна. Ван Хуй нар. Формальдегид бэхэлсэн ба парафин агуулсан эдүүдийн 151 тохиолдлын KRAS мутацийг илрүүлэхэд ARMS-ийг ашигласан. АНУ-д FDA-аас KRAS-ийн эмнэлзүйн шинжилгээнд хамрагдсан COBAS иж бүрдэл (Roche) болон Европын Холбооны In Vitro Diagnostics (CE-IVD) -ээр баталгаажуулсан Therascreen RGQ иж бүрдэл (Qiagen) бүгд ARMS зарчмыг ашигладаг. Нийтлэг аргуудын дотроос ARMS арга нь хамгийн мэдрэмтгий бөгөөд өртөг нь харьцангуй боломжийн байдаг. Тиймээс KRAS генийг дотоод болон гадаадад илрүүлэх эмнэлзүйн илрүүлэлтийн нэлээд хэсэг нь ARMS аргыг ашиглаж байгаа боловч энэ арга нь ПГУ-ын технологид суурилсан тул түүний дутагдал нь зөвхөн мэдэгдэж буй сайтын мутацийг илрүүлэх боломжтой юм.
4. Бодит хугацааны флюресцентын тоон ПГУ-ын арга:
Энэ нь Ct утгаар мутацийг тодорхойлох ПГУ-д суурилсан илрүүлэх арга юм. Энэ нь хүчтэй өвөрмөц чанар, өндөр мэдрэмжтэй, тоо хэмжээг үнэн зөв тодорхойлох, ашиглахад хялбар, бүрэн хаалттай урвал зэрэг давуу талуудтай. Олон туршилтын бүлгүүд бүдүүн гэдэсний хорт хавдрын KRAS мутацийг илрүүлэхийн тулд энэ аргыг хэрэглэсэн. Шууд дараалал тогтоох аргатай харьцуулахад тоон ПГУ нь мэдрэмжийн хувьд илүү давуу талтай байдаг. Энэ хоёр аргыг харьцуулсан ихэнх эрдэмтэд тоон ПГУ-ыг илүү мэдрэмтгий гэж үздэг. Лю Вэй нар. Бүдүүн гэдэсний хорт хавдрын 280 тохиолдлын KRAS генийн мутац, 94 KRAS генийн мутацийн илрүүлэлтийн үр дүнд нарийвчилсан дүн шинжилгээ хийх хоёр аргыг ашигласан бөгөөд эерэг хувь нь 33.57% (94/280), үүнээс бодит цагийн флюресценцийн тоон үзүүлэлт. ПГУ эерэг гарсан 91 тохиолдлын мэдрэмж 96.8% (91/94). Зэрлэг төрлийн генийн дараалал тогтоох 186 тохиолдлын 184 нь бодит цагийн тоон ПГУ-аар сөрөг гарсан бөгөөд өвөрмөц чанар нь 98.9% (184/186). Бодит цагийн флюресценцийн тоон ПГУ-ын арга ба генийн шууд дараалал тогтоох аргын хоорондох давхцлын түвшин 98.2% байв. Илрүүлэх хоёр аргын хувьд мутацийн талбай тус бүрийн эерэг ба сөрөг давхцлын хувь 90%-иас дээш, дөрвөн цэгийн давхцал 100%-д хүрсэн байна. Хоёр аргын илрүүлэлтийн үр дүн нь маш нийцтэй байсан нь флюресцент тоон ПГУ-ыг харуулж байна. Энэ нь мутацийг илрүүлэх илүү найдвартай арга юм. Гэсэн хэдий ч ПГУ-д суурилсан аргууд нь мэдэгдэж буй мутацийн төрлүүд дээр тулгуурлан праймер, датчикийг зохион бүтээх шаардлагатай байдаг тул бүх боломжит мутацийг илрүүлэх боломжгүй бөгөөд зөвхөн тодорхой газруудыг илрүүлэх боломжтой. Хэрэв тодорхой газар нь иж бүрдэл илрүүлэх мужид ороогүй бол мутаци үнэхээр байсан ч иж бүрдэлийн үр дүн сөрөг хэвээр байна. Нэмж дурдахад тоон ПГУ-ын мэдрэмж өндөр байгаа хэдий ч хуурамч эерэг үр дүн байгаа эсэхийг ДНХ-ийн дараалал тогтоох технологи, эсвэл KRAS мутацийн байдал болон зорилтот бүлгийн үр нөлөөний хоорондын хамаарлыг батлахын тулд том хэмжээний дээж бүхий ретроспектив болон хэтийн эмнэлзүйн туршилтуудыг хийх шаардлагатай хэвээр байна. эм . Тиймээс мутаци илрүүлэх өндөр мэдрэмжийг сохроор хийж болохгүй, харин илрүүлэх өвөрмөц байдал, нарийвчлалыг үл тоомсорлож болохгүй. Өөр өөр лабораторийн нөхцөлд сорьц дахь мутацийг илрүүлэх оновчтой арга нь өөр байж болно. Мутацийн өндөр хувьтай сорьцын хувьд Sanger дарааллын арга нь генийн мутацыг илрүүлэх өндөр нарийвчлалтай байдаг бол мутацийн бага хувьтай сорьцын хувьд Sanger дарааллын арга нь худал сөрөг гарч болзошгүй ба флюресцент ПГУ-ыг техникийн платформ болгон илрүүлэх арга өндөр мэдрэмжээр тодорхойлогддог.
5. Хүний нөөцийн арга:
Энэ бол сүүлийн жилүүдэд түгээмэл хэрэглэгддэг ген илрүүлэх аргуудын нэг юм. Бохирдуулахгүйн тулд энгийн, хурдан, мэдрэмтгий, дан хоолойтой давуу талтай. Лю Лицин болон бусад хүмүүс эмнэлзүйн шинжилгээнд ашиглах боломжийг судлахын тулд HRM аргыг ашиглан шулуун гэдэсний хорт хавдартай 64 өвчтөнд KRAS генийн мутацийг илрүүлж, дараа нь шууд дараалал ашиглан үр дүнг баталгаажуулав. HRM ба шууд дарааллын үр дүн тогтвортой байна. Шууд дэс дараалалтай харьцуулбал KRAS генийн мутацийг HRM-ээр илрүүлэх нь энгийн бөгөөд үнэн зөв бөгөөд энэ нь эмнэлзүйн шинжилгээ хийхэд тохиромжтой найдвартай арга болохыг харуулж байна. Чен Жихонг нар HRM аргыг ашиглан KRAS мутант плазмидын янз бүрийн харьцааг агуулсан холимог цуврал дээжийг туршиж, тэдний мэдрэмжийг үнэлэв. Холимог дээжинд плазмидын мутацийн эзлэх хувь 10%, мэдрэг чанар 10% -д хүрсэн болохыг тогтоожээ. Дараа нь энэ аргыг бүдүүн гэдэсний хорт хавдрын 60 ширхэг дээжинд KRAS генийн мутацийг илрүүлэхэд ашигласан болно. Шууд дарааллын аргатай харьцуулахад HRM аргын мэдрэмж 100%, өвөрмөц чанар 96% (43/45) байв. HRM аргын сул тал нь тодорхой мутацийн төрлийг нарийвчлан өгөх боломжгүй бөгөөд аль кодон нь мутацлагдсан болохыг харуулж байна. Хэрэв хайлах муруй дээр хэвийн бус байдал илэрвэл мутацийн төрлийг тодорхойлох дарааллын арга хэрэгтэй. Harlé судалгааны бүлэг флюресцент ПГУ, АРМС ба HRM аргуудыг харьцуулахын тулд бүдүүн шулуун гэдэсний хорт хавдрын 156 тохиолдлыг ашигласан. Үр дүнгээс харахад дээрх гурван арга нь эмнэлзүйн шинжилгээнд тохиромжтой боловч HRM-ийн найдвартай байдал бусад хоёр аргын адил сайн биш байна.
6. Бусад аргууд:
Дээр дурдсан аргуудаас гадна бусад илрүүлэх аргууд нь хэрэглээний хувьд давуу ба сул талуудтай байдаг, тухайлбал ПГУ-SSCP, өндөр үзүүлэлттэй шингэний хроматографи, флюресцент ПГУ-ын оновчтой олигонуклеотидын датчикийн арга, Үүрлэсэн ПГУ ба АРМ хослолын арга, COLD-PCR арга гэх мэт Өндөр үзүүлэлттэй шингэний хроматографи нь өвөрмөц шинж чанартай байдаг боловч дээж авах хэрэгцээ их байдаг; ПГУ-SSCP нь хямд, хэмнэлттэй боловч үйл ажиллагаа нь төвөгтэй байдаг; флюресцент ПГУ-д суурилсан мутацийг тодорхойлох технологи нь хүчтэй өвөрмөц чанар, өндөр мэдрэмжтэй, тоон үзүүлэлттэй, хялбар ажиллагаатай, бүрэн хаалттай урвал болон бусад давуу талуудтай боловч бүгд мэдэгдэж буй мутацийн төрөлд нийцүүлэн праймер, зонд хийх шаардлагатай тул зөвхөн тодорхой газрууд байж болно. илэрсэн бөгөөд боломжтой бүх мутацийг илрүүлэх боломжгүй юм.
3. Дүгнэлт
Дүгнэж хэлэхэд өөр өөр лабораторийн мутацийн цэгүүд ба илрүүлэх аргууд жигд бус тул шинжилгээнд хамрагдсан хавдрын сорьцын хэмжээ, ДНХ-ийн ялгаруулалтын чанар жигд бус байгаа тул лабораторийн хооронд том, жижиг туршилтын үр дүн гарч ирэв Ялгаа, стандартчилал KRAS генийн мутацийг илрүүлэх нь янз бүрийн улс орнуудын анхаарлын төвд байгаа эмнэлзүйн илрүүлэлтийн асуудал болжээ. Одоогийн байдлаар KRAS генийн мутацийг илрүүлэх олон арга байдаг. Өндөрөөс бага хүртэлх мэдрэмж нь ARMS, пиросеквенц, HRM, бодит цагийн тоон ПГУ, шууд дараалал юм. Эмнэлзүйн бодит байдлаас харахад бага мэдрэмж нь эмнэлзүйн эмчилгээнд тохиромжгүй боловч хэт мэдрэмтгий аргууд нь илрүүлэлтийн өвөрмөц чанарыг бууруулж улмаар шаардлагагүй хуурамч эерэг үр дүн гарч өвчтөний дараагийн эмийн горимд нөлөөлж болзошгүй юм. Дээрх талуудыг харгалзан FDA-ийн баталсан аргатай хослуулан ARMS аргыг санал болгож байна. Мэдээжийн хэрэг зах зээлийн үүднээс авч үзвэл молекулын оношлогоо намайг онцлох ёсгүй
thods, гэхдээ эцсийн зөв үр дүнд анхаарлаа төвлөрүүл. Янз бүрийн лабораториуд бодит нөхцөл байдлын дагуу туршилтын зохих аргыг хэрэглэж болно, гэхдээ зөвхөн операторын ур чадвар сайтай, чанарын дотоод хяналтын системтэй байж болно. Өнөөгийн дотоодын лабораторийн орчны нөхцөлд лабораторийн шинжилгээний чанарыг найдвартай хангахын тулд стандартын шаардлага хангасан ПГУ-ын лабораторид шинжилгээ хийж, дотоод, гадаадын өрөө хоорондын чанарын хяналтын үйл ажиллагаанд оролцох шаардлагатай байна. Тогтвортой үр дүнг хангахын тулд стандартчилсан менежмент нь зайлшгүй нөхцөл юм. Хятад улсад KRAS генийн эмнэлзүйн шинжилгээг нэгдмэл болгох, стандартчилах, янз бүрийн хэрэгцээнд нийцүүлэн стандартчилагдсан, стандартчилагдсан туршилтын хөтөлбөрийг бий болгох зайлшгүй шаардлагатай байгаа бөгөөд энэ хөтөлбөрийг BRAF, PIK23450_3CA, EGFR болон эмнэлзүйн молекулын эмгэг судлалын шинжилгээг дэмжих бусад генүүд.
