სამიზნე მედიკამენტები, როგორიცაა ცეტუქსიმაბი და პანიტუმუმაბი, ფართოდ გამოიყენება კლინიკაში, როგორც ეფექტური თერაპიული საშუალებები კოლორექტალური კიბოსთვის. კლინიკური მონაცემები აჩვენებს, რომ KRAS მუტაციის მქონე პაციენტებს არ აქვთ მნიშვნელოვანი გავლენა ამ მონოკლონური ანტისხეულების პრეპარატზე და მხოლოდ ველური ტიპის პაციენტებს შეუძლიათ ისარგებლონ მისგან. ამრიგად, KRAS გენის მუტაციის სტატუსი კლინიკურად განიხილება, როგორც მნიშვნელოვანი თერაპიული მარკერი, რომელსაც აქვს ძლიერი კორელაცია კოლორექტალური კიბოს პროგნოზთან და სამკურნალო ეფექტთან. 2009 წლის კიბოს ყოვლისმომცველი ქსელი (NCCN) კოლორექტალური კიბოს კლინიკური პრაქტიკის გაიდლაინები ადგენს, რომ მეტასტაზური კოლორექტალური კიბოს მქონე ყველა პაციენტმა უნდა გამოავლინოს KRAS გენის მუტაციის სტატუსი და მხოლოდ KRAS ველური ტიპისაა რეკომენდებული EGFR მიზნობრივი თერაპიის მისაღებად. იმავე წელს, კლინიკური ონკოლოგიის ამერიკულმა საზოგადოებამ (ASCO) ასევე გამოსცა იგივე კლინიკური მკურნალობის რეკომენდაციები, როგორც მოლეკულური მარკერი სიმსივნის მიზნობრივი თერაპიისთვის, რაც აჩვენებს მის მნიშვნელოვან სახელმძღვანელო მნიშვნელობას. ამჟამად KRAS გენეტიკური ტესტირება ფართოდ არის ჩატარებული კლინიკურად. ჩვენ ძირითადად ვაფასებთ შიდა KRAS გენის მუტაციის გამოვლენის მეთოდებს კლინიკურ შერჩევაში მითითებისთვის.
1. სწორი ნაწლავის კიბოს KRAS გენის მუტაციის დადებითი მაჩვენებელი
მსხვილი ნაწლავის კიბოს დროს, KRAS გენის მუტაციის სიჩქარე 35% -დან 45% -მდეა, ხოლო მაღალი რისკის მუტაციის ადგილი არის 12 და 13 კოდონები ეგზონ 2-ზე, და ჯერ კიდევ არსებობს იშვიათი, მაგალითად 61 და 146. მუტაცია საიტი არსებობს მრავალი გამოვლენის მეთოდი KRAS გენის მუტაციებისთვის, მათ შორის პირდაპირი თანმიმდევრობა, მაღალი რეზოლუციის დნობის მრუდის ანალიზი (HRM), პიროსკევიზაცია, რაოდენობრივი PCR, მუტაციის გამაძლიერებელი ბლოკი სისტემა (amplinc atio) ნრეფრაქტორიმუტაციის სისტემა (ARMS), ფრაგმენტის სიგრძის პოლიმორფიზმი (RFLP), პოლიმერაზული ჯაჭვური რეაქციის ერთჯაჭვიანი კონფორმაციის პოლიმორფიზმის ანალიზი (PCR-singlestrand confomation polymorphism (PCR-SSCP), თანადამტკიცება ქვედა დენატურაციის ტემპერატურაზე PCR (COLD-PCR) და მაღალი ხარისხის თხევადი ქრომატოგრაფიის ანალიზი და ა.შ.
2. KRAS მუტაციის გამოვლენის მეთოდების შეფასება
1. პირდაპირი თანმიმდევრობის მეთოდი: ეს არის ყველაზე კლასიკური მეთოდი KRAS გენური მუტაციების გამოვლენისთვის და ის ასევე წარმოადგენს ოქროს სტანდარტს გენური მუტაციების გამოვლენისთვის. პირდაპირი თანმიმდევრობის მეთოდი, რომელიც ეფუძნება დიდეოქსიის თანმიმდევრობის პრინციპს, შეიძლება ინტუიციურად აჩვენოს გენური თანმიმდევრობის შეცვლა ბაზის პიკური რუქის სახით. გამოვლენის ტიპი უფრო ყოვლისმომცველია და ის ასევე არის ყველაზე ადრეული გამოყენებული მუტაციის გამოვლენის მეთოდი. ახალი თაობის თანმიმდევრობის პლატფორმების გაჩენის მიუხედავად, მკვლევარები შინ და საზღვარგარეთ კვლავ იყენებენ პირდაპირი თანმიმდევრობის შედეგებს, როგორც მასშტაბის გაზომვა და განსაზღვრავს ახალი მეთოდის სანდოობას. გაო ჯინგი და სხვ. გამოყენებულია პირდაპირი თანმიმდევრობა KRAS და BRAF გენის მუტაციების გამოვლენაზე კოლორექტალური კიბოთი დაავადებული 966 პაციენტში. ეს არის ასევე KRAS გენის მუტაციის ანალიზი ლიტერატურაში დაფიქსირებული ყველაზე დიდი შიდა ნიმუშით. ლინგ იუნი და სხვები თვლიან, რომ პირდაპირი თანმიმდევრობის მეთოდი არის თითოეული გენის მუტაციის სტატუსის გასაგებად ყველაზე პირდაპირი და ეფექტური გამოვლენის მეთოდი, რომელსაც შეუძლია გაარკვიოს მუტაციის ტიპი, განსაკუთრებით უცნობი მუტაციების გამოვლენისთვის. მიუხედავად იმისა, რომ ამ მეთოდის მგრძნობელობა შედარებით დაბალია, ის შეიძლება გაუმჯობესდეს ისეთი მეთოდებით, როგორიცაა მიკროდისექცია, სიმსივნური უჯრედების გასამდიდრებლად. პირდაპირი მიმდევრობის მეთოდი ასევე იქნა გამოყენებული KRAS- ის უფრო დიდი ზომის ნიმუშების გამოვლენაზე სხვა შიდა კვლევით ჯგუფებში. ამასთან, დაბალი მგრძნობელობა პირდაპირი თანმიმდევრობის ყველაზე დიდი მინუსია. ჩინეთში მიღებული შედეგების მიხედვით თუ ვიმსჯელებთ, მუტაციის გამოვლენის სიჩქარე პირდაპირი თანმიმდევრობით არ არის დაბალი. Liu Xiaojing და სხვები. შედარებულია პირდაპირი მიმდევრობისა და პეპტიდის ნუკლეინის მჟავის დამჭერი PCR (PNA-PCR) და აღმოჩნდა, რომ KRAS გენის მუტაციების 43 შემთხვევა დაფიქსირდა პირდაპირი თანმიმდევრობით. ამ მუტაციების გარდა, PNA-PCR გამოვლინდა პირდაპირი თანმიმდევრობითაც. ათი მუტაცია იქნა აღმოჩენილი ველური ტიპისა და გაკეთდა წინადადებები ველური ტიპის პაციენტების დასადგენად PCR– ით და პირდაპირი თანმიმდევრობის მეთოდით, მუტანტური პაციენტების დასადგენად. Qiu Tian და სხვები. აღმოჩენილია კოლორექტალური კიბოს 131 ეგზემპლარი ფლუორესცენტული PCR– ოპტიმიზირებული ოლიგონუკლეოტიდის გამოკვლევის მეთოდით და პირდაპირი თანმიმდევრობის მეთოდით და KRAS– ის გენის მუტაციების დადებითი მაჩვენებლები იყო 41.2% (54/131) და 40.5% (53/131). ბაი დონგიუმ ასევე განიხილა სხვადასხვა მეთოდების გამოვლენის მგრძნობელობა. მსხვილი ნაწლავის კიბოს 200 პაციენტიდან 63 გამოვლინდა RT-qPCR მუტაციით, ხოლო მუტაციის გამოვლენის მაჩვენებელი 31.5% იყო; 169 ნიმუშმა წარმატებით დაალაგა მუტაციის 50 შემთხვევის პირდაპირი თანმიმდევრობა, მუტაციის გამოვლენის სიჩქარე 29.6%. მიუხედავად იმისა, რომ პირდაპირი თანმიმდევრობის მეთოდით შესაძლებელია ზუსტად, ობიექტურად და კონკრეტულად დაფიქსირდეს KRAS გენის მუტაციის სტატუსი, მისი ნაკლოვანებები, როგორიცაა მაღალი ტექნიკური მოთხოვნები, ოპერაციის რთული პროცედურები, ადვილია ჯვარედინი დაბინძურება და შედეგების შრომატევადი და შრომატევადი ინტერპრეტაცია. აშკარაა. ხშირად არ არსებობს თანმიმდევრობის მოწყობილობა და ნიმუში უნდა გადაეგზავნოს შესაბამის კომპანიას ტესტირებისთვის, რასაც დიდი დრო სჭირდება და აქვს მაღალი ღირებულება, ამიტომ მას დიდი შეზღუდვები აქვს.
პიროსკევირების მეთოდი:
პიროსკევიზაციის მეთოდი ასევე უფრო მოსახერხებელი მეთოდია KRAS გენის მუტაციის გამოვლენისთვის თანმიმდევრობის მგრძნობელობის, გამოვლენის ღირებულებისა და მოხსენების დროის მიხედვით. ამ მეთოდის განმეორებადობა უკეთესია. მიღებული პიკის რუქის მიხედვით, ერთი შეხედვით ნათელია გარკვეული ადგილის მუტაციის სიხშირის რაოდენობრივი შესწავლა და შედარება სხვადასხვა საიტის მუტაციის სიხშირეებს შორის. ბოლო წლებში ოგინო და სხვები, ჰატჩინსი და სხვ. გამოიყენეთ პიროსექვირების ტექნოლოგია KRAS მუტაციების შესამოწმებლად პაციენტებში მსხვილი ნაწლავის კიბოს დიდი ნიმუშებით. შედეგები მიუთითებს, რომ პიროსეკვენციის ტექნოლოგია მძლავრი იარაღია მიზანმიმართული თერაპიისთვის პაციენტების სკრინინგისთვის. სიმსივნის მოლეკულურ დიაგნოზს გამოყენების ფართო პერსპექტივა აქვს. ადგილობრივმა მეცნიერებმა ასევე გამოიყენეს პიროსექვირების ტექნოლოგია კოლორექტალური კიბოს KRAS მუტაციების კლინიკური დასადგენად, კარგი სიზუსტით და საიმედოობით. ამ მეთოდს აქვს უკეთესი სპეციფიკა და უფრო მაღალი მგრძნობელობა. სანდსტრომი და სხვები. კლინიკურ გამოყენებებში შედარებულია ალელის სპეციფიკური PCR და პიროსეკუცირება და აღმოჩნდა, რომ 314 შემთხვევაში KRAS მუტაცია მსხვილი ნაწლავის კიბოთი დაავადებულ პაციენტებში, პიროსელექციის სპეციფიკა ალელებთან შედარებით უფრო მაღალი იყო. PCR და აქვს კარგი მგრძნობელობა ქსოვილების მიმართ სიმსივნური უჯრედების დაბალი შემცველობით. განზავდეს სიმსივნური უჯრედების წილი 1.25% -დან 2.5% -მდე. პიროსკევიზაციას კვლავ შეუძლია დაადგინოს მუტაციის სიგნალები. როდესაც სანგერის თანმიმდევრობით გამოვლენის მიზნით, ნიმუშში მუტანტის ალელების მინიმალური შემცველობა 20% -ს უნდა მიაღწიოს, მისი დაფიქსირება HRM მეთოდით შესაძლებელია, როდესაც 10% -ს მიაღწევს, ხოლო პიროსეკუცირებისთვის მხოლოდ მუტაციების დაფიქსირებაა 5%. ალელები. ჩვენ ვიყენეთ პიროსკუდიფიკაცია KRAS მუტაციების დასადგენად 717 პაციენტში კოლორექტალური სიმსივნით და დავადგინეთ, რომ KRAS მუტაციების სიხშირე 40.9% იყო. კოდონის 12 მუტაციის სიჩქარე 30.1% იყო, კოდონ 13 მუტაციის სიჩქარე 9.8%, ხოლო კოდონის 61 მუტაციის სიჩქარე 1.0%. ტესტირების დაწყებამდე ჩვენ გავამდიდრეთ ქსოვილები სიმსივნის მაღალი შემცველობით ხელით მიკროდისექციით, რაც შედეგებს უფრო საიმედოდ აქცევს. მეთოდს აქვს კარგი მგრძნობელობა და სპეციფიკა და მისი შემუშავება ადვილია კლინიკურ პრაქტიკაში. პიროსკევიზაციის უარყოფითი მხარეა გამოვლენის მაღალი ღირებულება, ხოლო სინჯოების თანმიმდევრობით ერთჯაჭვიანი დნმ-ის მომზადების პროცესი რთულია. მომავალში, პიროსეკუცირება შეიძლება დაეთმოს ორმაგი ბოჭკოვანი PCR პროდუქტების პირდაპირი გამოვლენის ტექნოლოგიის შემუშავებას, რაც მნიშვნელოვნად გაამარტივებს ოპერაციას. და ეფექტურად შეამციროთ თანმიმდევრობის ღირებულება კლინიკური ტესტირების ყოვლისმომცველი პოპულარიზაციის მისაღწევად.
3. იარაღის მეთოდი:
ეს ტექნოლოგია იყენებს პრაიმერებს, რათა განასხვაოს ველური ტიპის და მუტანტის გენები
ეს უკვე ცნობილია ჯერ კიდევ 1980-იან წლებში. ამ მეთოდის ყველაზე დიდი უპირატესობა ის არის, რომ მას აქვს მგრძნობელობა 1.0% -მდე და შეუძლია აღმოაჩინოს მუტანტის გენები 1.0% -იან ნიმუშებში. დიზაინის მიხედვით, სამიზნე პროდუქტის სიგრძე შეიძლება მაქსიმალურად შემცირდეს და პრობლემა, რომ ზუსტი გამოვლენის შედეგები ვერ მიიღება, რადგან პარაფინში ჩასმული ქსოვილის ნიმუშიდან მოპოვებული დნმ-ის უმეტესობა ფრაგმენტულია. ეს ტექნოლოგია აერთიანებს PCR პლატფორმას რეალურ დროში, რათა მიაღწიოს დახურულ მილსადენის მუშაობას გამაძლიერებლის დროს. ოპერაცია მარტივია და არ საჭიროებს პროდუქტის შემდგომი დამუშავებას, რამაც შეიძლება მაქსიმალურად აირიდოს გაძლიერებული პროდუქტის დაბინძურება. დღეისათვის მსოფლიოში უფრო ხშირად გამოიყენება მორიელის-ARMS მეთოდი, რომელიც აერთიანებს მორიელის ზონდს და გამაძლიერებელი ბლოკის მუტაციის სისტემას. ორი ტექნოლოგიის კომბინაციამ შეიძლება მაქსიმალურად გაზარდოს ორივე მხარის მგრძნობელობა და სპეციფიკა. გაო ჯი და სხვ. გამოიყენეს ეს მეთოდი KRAS გენის მუტაციის სტატუსის დასადგენად 167 პაციენტში მსხვილი ნაწლავის კიბოთი, რაც მიგვანიშნებს იმაზე, რომ ეს მეთოდი სანდო და ზუსტია. ვანგ ჰუი და სხვ. ასევე გამოიყენეს ARMS KRAS მუტაციების დასადგენად ფორმალდეჰიდით ფიქსირებული და პარაფინის მქონე ქსოვილების 151 შემთხვევაში. შეერთებულ შტატებში COBAS ნაკრები (Roche) დამტკიცებულია FDA– ს მიერ KRAS– ის კლინიკური გამოკვლევისთვის და Therascreen RGQ ნაკრები (Qiagen) ევროკავშირის ინ ვიტრო დიაგნოსტიკის (CE-IVD) მიერ დამოწმებული ყველა იყენებს ARMS პრინციპს. საერთო მეთოდებს შორის, ARMS მეთოდი ყველაზე მგრძნობიარეა და ღირებულება შედარებით გონივრულია. ამიტომ, KRAS– ის გენების კლინიკური გამოვლენის დიდი ნაწილი სამშობლოსა და საზღვარგარეთ იყენებს ARMS მეთოდს, მაგრამ იმის გამო, რომ მეთოდი ემყარება PCR ტექნოლოგიას, მისი ნაკლი არის მხოლოდ მისი ცნობილი უბნების მუტაციების გამოვლენა.
4. რეალურ დროში ფლუორესცენტული რაოდენობრივი PCR მეთოდი:
ეს არის PCR-ზე დაფუძნებული გამოვლენის მეთოდი, რათა დადგინდეს მუტაცია Ct მნიშვნელობით. მას აქვს ძლიერი სპეციფიკის, მაღალი მგრძნობელობის, ზუსტი რაოდენობრივი განსაზღვრის, მარტივი მუშაობის და სრულად დახურული რეაქციის უპირატესობები. ბევრმა ექსპერიმენტულმა ჯგუფმა მიიღო ეს მეთოდი კოლორექტალური კიბოს დროს KRAS მუტაციების გამოსავლენად. პირდაპირი თანმიმდევრობის მეთოდთან შედარებით, რაოდენობრივი PCR უფრო მეტ უპირატესობას იკავებს მგრძნობელობაში. მეცნიერთა უმეტესობა, რომლებიც ადარებენ ამ ორ მეთოდს, თვლის, რომ რაოდენობრივი PCR უფრო მგრძნობიარეა. ლიუ ვეი და სხვ. გამოიყენა ორი მეთოდი კოლორექტალური კიბოს 280 შემთხვევის KRAS გენის მუტაციის, 94 შემთხვევის KRAS გენის თანმიმდევრობის მუტაციების გამოვლენის შედეგების დეტალური ანალიზისთვის, დადებითი მაჩვენებელი იყო 33.57% (94/280), რომელთაგან რეალურ დროში ფლუორესცენციის რაოდენობრივი PCR იყო დადებითი 91 შემთხვევას ჰქონდა მგრძნობელობა 96.8% (91/94). ველური ტიპის გენის თანმიმდევრობის 186 შემთხვევიდან, 184 იყო უარყოფითი რეალურ დროში რაოდენობრივი PCR-ით, სპეციფიკურობით 98.9% (184/186). რეალურ დროში ფლუორესცენციის რაოდენობრივი PCR მეთოდსა და პირდაპირი გენის თანმიმდევრობის მეთოდს შორის დამთხვევა იყო 98.2%. გამოვლენის ორ მეთოდში, თითოეული მუტაციის ადგილის დადებითი და უარყოფითი დამთხვევა იყო 90%-ზე მეტი, ხოლო ოთხი ადგილის დამთხვევა 100%-ს აღწევდა. ორი მეთოდის გამოვლენის შედეგები იყო უაღრესად თანმიმდევრული, რაც მიუთითებს ფლუორესცენტურ რაოდენობრივ PCR-ზე. ეს უფრო საიმედო მეთოდია მუტაციის გამოვლენისთვის. თუმცა, PCR-ზე დაფუძნებულ მეთოდებს სჭირდებათ პრაიმერებისა და ზონდების შემუშავება, რომლებიც დაფუძნებულია მუტაციის ცნობილ ტიპებზე, ამიტომ ყველა შესაძლო მუტაცია ვერ იქნება გამოვლენილი და შესაძლებელია მხოლოდ კონკრეტული ადგილების აღმოჩენა. თუ გარკვეული საიტი არ შედის ნაკრების გამოვლენის დიაპაზონში, თუნდაც რეალურად იყოს მუტაცია, ნაკრების შედეგი მაინც უარყოფითია. გარდა ამისა, მიუხედავად იმისა, რომ რაოდენობრივი PCR-ის მგრძნობელობა მაღალია, არის თუ არა ცრუ პოზიტიური ფაქტორები, ჯერ კიდევ უნდა გადამოწმდეს დნმ-ის თანმიმდევრობის ტექნოლოგიით, ან რეტროსპექტული და პერსპექტიული კლინიკური ექსპერიმენტებით დიდი ზომის ნიმუშებით, რათა დაადასტუროს კორელაცია KRAS მუტაციის სტატუსსა და მიზანმიმართული ეფექტურობას შორის. ნარკოტიკები. ამიტომ, მუტაციის გამოვლენის მაღალი მგრძნობელობა არ უნდა იყოს ბრმად მიმართული, ხოლო გამოვლენის სპეციფიკა და სიზუსტე უნდა იყოს იგნორირებული. სხვადასხვა ლაბორატორიულ პირობებში, ნიმუშებში მუტაციის გამოვლენის ოპტიმალური მეთოდი ასევე შეიძლება განსხვავებული იყოს. მუტაციების უფრო მაღალი პროპორციის მქონე ნიმუშებისთვის Sanger-ის თანმიმდევრობის მეთოდს აქვს უფრო მაღალი სიზუსტე გენის მუტაციების გამოვლენისას, ხოლო ნიმუშებისთვის მუტაციების დაბალი პროპორციით, Sanger-ის თანმიმდევრობის მეთოდით შეიძლება მოხდეს ცრუ ნეგატივები და აღმოჩენის მეთოდი ფლუორესცენტური PCR-ის გამოყენებით, როგორც ტექნიკური პლატფორმა. შეიძლება ხასიათდებოდეს მაღალი მგრძნობელობით.
5. HRM მეთოდი:
ეს ბოლო წლების გენის გამოვლენის ერთ – ერთი ყველაზე ხშირად გამოყენებული მეთოდია. მას აქვს მარტივი, სწრაფი, მგრძნობიარე და ერთჯერადი მილის უპირატესობები, რათა თავიდან აიცილოს დაბინძურება. კლინიკურ ტესტირებაში მისი გამოყენების მიზანშეწონილობის შესასწავლად, ლიუ ლიკინმა და სხვებმა გამოიყენეს HRM მეთოდი KRAS გენის მუტაციების დასადგენად 64 პაციენტში კოლორექტალური კიბოთი და შემდეგ გამოიყენეს პირდაპირი თანმიმდევრობა შედეგების დასაზუსტებლად. HRM და პირდაპირი თანმიმდევრობის შედეგები თანმიმდევრულია. პირდაპირი თანმიმდევრობასთან შედარებით, HRM– ს მიერ KRAS– ის გენის მუტაციების გამოვლენა მარტივია და ზუსტი, რაც მიანიშნებს, რომ ის არის საიმედო მეთოდი, რომელიც შესაფერისია კლინიკური ტესტირებისთვის. ჩენ ჟიჰონგი და სხვები. გამოიყენეს HRM მეთოდი შერეული ნიმუშების სერიის შესამოწმებლად, რომლებიც შეიცავს KRAS მუტანტის პლაზმიდების სხვადასხვა პროპორციას, მათი მგრძნობელობის შესაფასებლად. აღმოჩნდა, რომ შერეულ ნიმუშებში პლაზმიდის მუტაციების წილი იყო 10%, ხოლო მგრძნობელობამ 10% -ს მიაღწია. ამის შემდეგ, მეთოდი გამოყენებული იქნა KRAS გენის მუტაციების დასადგენად კოლორექტალური კიბოს ქსოვილის 60 ნიმუშში. პირდაპირი თანმიმდევრობის მეთოდთან შედარებით, HRM მეთოდის მგრძნობელობა იყო 100%, ხოლო სპეციფიკა - 96% (43/45). HRM მეთოდის მინუსი ის არის, რომ შეუძლებელია კონკრეტული მუტაციის ტიპის ზუსტად განსაზღვრა და რომელი კოდონის მუტაციაა შესაძლებელი. თუ დნობის მრუდზე აღმოჩენილია ანომალია, საჭიროა თანმიმდევრობის მეთოდი მუტაციის ტიპის დასადგენად. ჰარლის სამეცნიერო ჯგუფმა გამოიყენა კოლორექტალური კიბოს ქსოვილის 156 შემთხვევა ფლუორესცენტული PCR, ARMS და HRM მეთოდების შედარებისთვის. შედეგები ცხადყოფს, რომ მიუხედავად იმისა, რომ სამი მეთოდი შესაფერისია კლინიკური ტესტირებისთვის, HRM- ის საიმედოობა არ არის ისეთივე კარგი, როგორც დანარჩენი ორი მეთოდი.
6. სხვა მეთოდები:
ზემოთ ხსენებული მეთოდების გარდა, გამოვლენის სხვა მეთოდებს აქვთ საკუთარი დადებითი და უარყოფითი მხარეები გამოყენებისას, როგორიცაა PCR-SSCP, მაღალი ხარისხის თხევადი ქრომატოგრაფია, ფლუორესცენტული PCR ოპტიმიზირებული ოლიგონუკლეოტიდის გამოკვლევის მეთოდი, ჩასმული PCR მეთოდი და ARMS კომბინაცია, COLD-PCR მეთოდი და ა.შ. მაღალი ხარისხის თხევად ქრომატოგრაფიას აქვს ძლიერი სპეციფიკა, მაგრამ მოთხოვნა ნიმუშებზე დიდია; PCR-SSCP არის დაბალი ღირებულება და ეკონომიური, მაგრამ ოპერაცია რთულია; მუტაციის გამოვლენის ტექნოლოგიას, რომელიც ეფუძნება ფლუორესცენტულ PCR– ს, აქვს ძლიერი სპეციფიკა, მაღალი მგრძნობელობა და ზუსტი რაოდენობრივი, მარტივი მოქმედება, სრულად დაბლოკილი რეაქცია და სხვა უპირატესობები, მაგრამ ყველა საჭიროებს პრაიმერების და ზონდების შექმნას მუტაციის ცნობილი ტიპების შესაბამისად, ამიტომ მხოლოდ კონკრეტული ადგილები შეიძლება იყოს გამოვლენილია და ყველა შესაძლო მუტაციის დადგენა შეუძლებელია.
3. რეზიუმე
შეჯამება, რადგან სხვადასხვა ლაბორატორიებში მუტაციის ადგილები და გამოვლენის მეთოდები არ არის ერთგვაროვანი, სიმსივნის ნიმუშების ზომა და დნმ-ის ექსტრაქციის ხარისხი ასევე არათანაბარია, რის შედეგადაც ლაბორატორიებს შორის არსებობს დიდი ან მცირე ექსპერიმენტული შედეგები. განსხვავებები, სტანდარტიზაცია KRAS– ის გენური მუტაციის გამოვლენა კლინიკური გამოვლენის საგანი გახდა სხვადასხვა ქვეყანაში. დღეისათვის არსებობს მრავალი მეთოდი KRAS გენის მუტაციების დასადგენად. მგრძნობელობა მაღალიდან დაბალზე არის ARMS, პიროსეკვირება, HRM, რეალურ დროში რაოდენობრივი PCR და პირდაპირი თანმიმდევრობა. კლინიკური რეალობიდან გამომდინარე, დაბალი მგრძნობელობა არ უწყობს ხელს კლინიკურ მკურნალობას, მაგრამ ზედმეტად მგრძნობიარე მეთოდები გამოვლენის სპეციფიკის დაქვეითებას გამოიწვევს და ზედმეტი ცრუ დადებითი შედეგები შეიძლება მოხდეს და გავლენა მოახდინოს პაციენტის შემდგომ მედიკამენტურ რეჟიმზე. ზემოთ მოცემული ასპექტების გათვალისწინებით, FDA– ს მიერ დამტკიცებულ მეთოდთან ერთად, რეკომენდებულია ARMS მეთოდი. რა თქმა უნდა, ბაზრის თვალსაზრისით, მოლეკულური დიაგნოსტიკა ჩემზე ხაზგასმას არ უნდა აკეთებდეს
მეთოდები, მაგრამ ფოკუსირება საბოლოო სწორ შედეგებზე. სხვადასხვა ლაბორატორიებს შეუძლიათ მიიღონ შესაბამისი ტესტირების მეთოდები ფაქტობრივი სიტუაციის მიხედვით, მაგრამ მხოლოდ იმ შემთხვევაში, თუ მათ აქვთ კარგი ოპერატორის კვალიფიკაცია და შიდა ხარისხის კონტროლის სისტემები. ამჟამინდელი შიდა ლაბორატორიული გარემო პირობების მიხედვით, აუცილებელია ტესტირების ჩატარება სტანდარტიზებულ PCR ლაბორატორიაში და მონაწილეობა შიდა და საერთაშორისო ოთახთაშორისი ხარისხის კონტროლის ღონისძიებებში, რათა უზრუნველყოს საიმედო ლაბორატორიული ტესტირების ხარისხი. სტანდარტიზებული მენეჯმენტი აუცილებელი პირობაა მუდმივი შედეგების უზრუნველსაყოფად. ჩინეთში გადაუდებელი აუცილებლობაა KRAS გენის კლინიკური ტესტირების გაერთიანება და სტანდარტიზაცია და სტანდარტიზებული და სტანდარტიზებული ტესტირების პროგრამის გენერირება სხვადასხვა საჭიროებების მიხედვით და ეს პროგრამა შეიძლება გაფართოვდეს BRAF, PIK23450_3CA, EGFR და გამოვლენაზე. სხვა გენები, რომლებიც ხელს უწყობენ კლინიკურ მოლეკულური პათოლოგიის ტესტირებას.
