Թիրախային դեղամիջոցները, ինչպիսիք են ցետուկսիմաբը և պանիտումումաբը, լայնորեն օգտագործվում են կլինիկայում որպես արդյունավետ թերապևտիկ դեղամիջոցներ կոլոռեկտալ քաղցկեղի համար: Կլինիկական տվյալները ցույց են տալիս, որ KRAS մուտացիաներով հիվանդները էական ազդեցություն չունեն այս մոնոկլոնալ հակամարմինների դեղամիջոցի վրա, և միայն վայրի տիպի հիվանդները կարող են օգտվել դրանից: Հետևաբար, KRAS գենի մուտացիայի կարգավիճակը կլինիկորեն դիտվում է որպես կարևոր թերապևտիկ մարկեր, որն ամուր կապ ունի կոլոռեկտալ քաղցկեղի կանխատեսման և բուժման ազդեցության հետ: 2009թ.-ի Քաղցկեղի համապարփակ ցանցի (NCCN) Կոլոռեկտալ քաղցկեղի կլինիկական պրակտիկայի ուղեցույցը սահմանում է, որ մետաստատիկ կոլոռեկտալ քաղցկեղով բոլոր հիվանդները պետք է հայտնաբերեն KRAS գենի մուտացիայի կարգավիճակը, և միայն KRAS-ի վայրի տիպը խորհուրդ է տրվում ստանալ EGFR նպատակային թերապիա: Նույն թվականին Կլինիկական Ուռուցքաբանության Ամերիկյան Միությունը (ASCO) թողարկեց նաև կլինիկական բուժման նույն առաջարկությունները՝ որպես ուռուցքի թիրախային թերապիայի մոլեկուլային մարկեր, ինչը ցույց է տալիս դրա կարևոր ուղղորդող նշանակությունը: Ներկայումս KRAS-ի գենետիկական թեստավորումը կլինիկորեն լայնորեն իրականացվել է: Մենք հիմնականում գնահատում ենք ներքին KRAS գենի մուտացիայի հայտնաբերման մեթոդները կլինիկական ընտրության մեջ հղում կատարելու համար:
1. Աղիքային քաղցկեղի KRAS գենի մուտացիայի դրական տեմպը
Գունավոր աղիքի քաղցկեղի դեպքում KRAS գենի մուտացիայի մակարդակը 35% -ից 45% է, իսկ բարձր ռիսկի ենթարկվող մուտացիայի տեղը `էկզոն 12-ի 13 և 2 կոդոններն են, և դեռ կան հազվագյուտներ, ինչպիսիք են 61-ը և 146-ը: կայք Գոյություն ունեն KRAS գենի մուտացիաների հայտնաբերման բազմաթիվ մեթոդներ, ներառյալ ուղղակի հաջորդականացումը, բարձր լուծաչափի հալման կորի վերլուծությունը (HRM), պիրոսեկվացումը, քանակական PCR- ը, մուտացիայի ուժեղացման բլոկային համակարգը (amplinc atio) նեֆրակտորիտորման համակարգ (ARMS), սահմանափակման հատվածի երկարության պոլիմորֆիզմը (RFLP), պոլիմերազային շղթայական ռեակցիայի ՝ միաշղթան կոնֆորմացիոն պոլիմորֆիզմի վերլուծություն (PCR-singlestrand կոնֆոմացիայի պոլիմորֆիզմ (PCR-SSCP), զուգահեռ ուժեղացում ցածր denaturation ջերմաստիճանի PCR (COLD-PCR) և բարձր արդյունավետության հեղուկ քրոմատագրության վերլուծություն և այլն:
2. KRAS մուտացիայի հայտնաբերման մեթոդների գնահատում
1. Ուղղակի հաջորդականացման մեթոդ. Դա KRAS գենի մուտացիաների հայտնաբերման ամեն դասական մեթոդն է և այն նաև գենային մուտացիաների հայտնաբերման ոսկե ստանդարտ է: Դիդեդոքսի հաջորդականության սկզբունքի վրա հիմնված ուղղակի հաջորդականության մեթոդը առավել ինտուիտիվ կերպով կարող է ցույց տալ գեների հաջորդականության փոփոխությունը բազային գագաթնակետային քարտեզի տեսքով: Հայտնաբերման տեսակն ավելի ընդգրկուն է, և այն նաև կիրառվում է մուտացիայի հայտնաբերման ամենավաղ մեթոդը: Չնայած նոր սերնդի հաջորդականության պլատֆորմների ի հայտ գալուն, հայրենիքում և արտերկրում գիտնականները դեռ օգտագործում են ուղղակի հաջորդականության արդյունքները ՝ որպես նոր մեթոդի հուսալիությունը չափելու և որոշելու սանդղակ: Գաո ingզին և այլք: Կիրառել է ուղիղ աղիքի քաղցկեղով 966 հիվանդների KRAS և BRAF գեների մուտացիաների հայտնաբերման ուղղակի հաջորդականություն: Սա նաև KRAS գենի մուտացիայի վերլուծությունն է գրականության մեջ գրանցված ամենամեծ տնային նմուշով: Ling Yun- ը և մյուսները կարծում են, որ ուղղակի հաջորդականացման մեթոդը յուրաքանչյուր գենի մուտացիայի կարգավիճակը հասկանալու ամենաուղղակի և ամենաարդյունավետ մեթոդն է, որը կարող է հստակեցնել մուտացիայի տեսակը, հատկապես անհայտ մուտացիաների հայտնաբերման համար: Չնայած այս մեթոդի զգայունությունը համեմատաբար ցածր է, այն կարող է բարելավվել ուռուցքային բջիջները հարստացնելու համար միկրոդիսեկցիայի միջոցով: Ուղղակի հաջորդականացման մեթոդը կիրառվել է նաև KRAS- ի `ընտանեկան այլ հետազոտական խմբերում ավելի մեծ նմուշների չափսերի հայտնաբերման համար: Այնուամենայնիվ, ցածր զգայունությունը ուղղակի հաջորդականացման ամենամեծ թերությունն է: Դատելով Չինաստանում զեկուցված արդյունքներից ՝ ուղղակի հաջորդականությամբ ըստ մուտացիայի հայտնաբերման մակարդակը ցածր չէ: Լյու Սյաոժին և այլք: Համեմատելով ուղղակի հաջորդականությունը և պեպտիդ նուկլեինաթթվի սեղմիչը PCR (PNA-PCR) և գտան, որ KRAS գենի մուտացիաների 43 դեպք հայտնաբերվել է ուղղակի հաջորդականությամբ: Բացի այս մուտացիաներից, PNA-PCR- ն հայտնաբերվել է նաև ուղղակի հաջորդականությամբ: Վայրի տիպի մեջ հայտնաբերվել է տաս մուտացիա, և առաջարկություններ են արվել պարզել վայրի տիպի հիվանդներին PCR- ով և մուտանտի հիվանդներին որոշելու ուղղակի հաջորդականության մեթոդով: Qiu Tian et al. Հայտնաբերել կոլոռեկտալ քաղցկեղի 131 նմուշ ՝ ցերեկային լույսի PCR օպտիմիզացված օլիգոնուկլեոտիդային զոնդի մեթոդով և ուղղակի հաջորդականացման մեթոդով, և KRAS գենի մուտացիաների դրական տեմպերը կազմել են 41.2% (54/131) և 40.5% (53/131): Բայ Դոնգյուն քննարկել է նաև տարբեր մեթոդների հայտնաբերման զգայունությունը: Կոլորեկտալ քաղցկեղով հիվանդ 200 հիվանդներից 63-ը հայտնաբերվել են RT-qPCR մուտացիաների միջոցով, իսկ մուտացիայի հայտնաբերման մակարդակը կազմել է 31.5%; 169 նմուշ հաջողությամբ հաջորդականացվել է մուտացիայի 50 դեպքերի ուղղակի հաջորդականությամբ, մուտացիայի հայտնաբերման տեմպը ՝ 29.6%: Չնայած ուղղակի հաջորդականացման մեթոդը կարող է ճշգրիտ, օբյեկտիվ և հատուկ հայտնաբերել KRAS գենի մուտացիայի կարգավիճակը, դրա թերությունները, ինչպիսիք են բարձր տեխնիկական պահանջները, բարդ գործողությունների ընթացակարգերը, հեշտ է առաջացնել խաչաձեւ աղտոտում և արդյունքների ժամանակատար և աշխատատար մեկնաբանություն, ակնհայտ Հաճախ հաջորդականության սարքավորումներ չկան, և նմուշը պետք է ուղարկվի համապատասխան ընկերություն փորձարկման համար, ինչը երկար ժամանակ է պահանջում և մեծ ծախսեր ունի, ուստի այն մեծ սահմանափակումներ ունի:
Պիրոսեկրացման մեթոդը.
Պիրոսեկվենսացման մեթոդը նաև առավել հարմար մեթոդ է KRAS գենի մուտացիայի հայտնաբերման համար `ըստ հաջորդականության զգայունության, հայտնաբերման արժեքի և հաշվետվության ժամանակի: Այս մեթոդի կրկնվողությունն ավելի լավ է: Ըստ ստացված գագաթնակետի քարտեզի ՝ Որոշակի տեղանքի մուտացիայի հաճախականության քանակական ուսումնասիրությունը և տարբեր տեղերի մուտացիայի հաճախականությունների համեմատությունը պարզ են մի հայացքից: Վերջին տարիներին Ogino et al., Hutchins et al. Օգտագործել են պիրոսեկվենսացման տեխնոլոգիա ՝ աղիքային աղիքի քաղցկեղի մեծ նմուշներ ունեցող հիվանդների KRAS մուտացիաները ստուգելու համար: Արդյունքները ցույց են տալիս, որ պիրոսեկվենսացման տեխնոլոգիան հզոր գործիք է նպատակային թերապիայի համար հիվանդների հետազոտման համար: Ուռուցքի մոլեկուլային ախտորոշումը կիրառման լայն հեռանկարներ ունի: Ներքին գիտնականները նաև օգտագործել են պիրոսեկվենսացման տեխնոլոգիա ՝ աղիքային քաղցկեղի KRAS մուտացիաները կլինիկորեն հայտնաբերելու համար ՝ լավ ճշգրտությամբ և հուսալիությամբ: Այս մեթոդն ունի ավելի լավ առանձնահատկություն և բարձր զգայունություն: SundstrÖm et al. Կլինիկական դիմումներում համեմատելով ալելին հատուկ PCR- ի և պիրոսեկվենսացիայի հետ, պարզվեց, որ աղիքային քաղցկեղով հիվանդների մոտ KRAS մուտացիաների 314 դեպքերում պիրոսեկվենսացիայի առանձնահատկությունը գերազանցում է ալելներինը: PCR և լավ զգայունություն ունի ուռուցքային բջիջների ցածր պարունակությամբ հյուսվածքների նկատմամբ: Նոսրացնել ուռուցքային բջիջների համամասնությունը `1.25% -ից 2.5%: Պիրոսեկվենսացումը դեռ կարող է հայտնաբերել մուտացիայի ազդանշաններ: Երբ Sanger- ի հաջորդականությամբ հայտնաբերելու համար նմուշում մուտանտի ալելների նվազագույն պարունակությունը պետք է հասնի 20% -ի, այն կարող է հայտնաբերվել HRM մեթոդով, երբ այն հասնում է 10% -ի, իսկ պիրոսեկվենսացման դեպքում միայն մուտացիաները կարող են հայտնաբերվել 5% -ով: Ալելներ Մենք օգտագործեցինք պիրոսեկվենսացիա ՝ հայտնաբերելու համար ԿՌԱՍ մուտացիաներ աղիքային աղիքի քաղցկեղով 717 հիվանդների մոտ և պարզեցինք, որ KRAS մուտացիաների հաճախականությունը կազմում էր 40.9%: 12 կոդոնի մուտացիայի արագությունը 30.1% էր, 13 կոդոնի մուտացիայի տեմպը ՝ 9.8%, իսկ 61 կոդոնի մուտացիայի արագությունը ՝ 1.0%: Մենք փորձարկումից առաջ հարստացրել ենք ուռուցքի ավելի բարձր պարունակությամբ հյուսվածքները ձեռքի միկրոդիզեկցիայի միջոցով ՝ արդյունքն ավելի հուսալի դարձնելով: Մեթոդը ունի լավ զգայունություն և առանձնահատկություն, և հեշտ է մշակել կլինիկական պրակտիկայում: Պիրոսեկվենսացիայի անբավարարությունը հայտնաբերման բարձր գինն է, և նմուշների հաջորդականության համար մեկ շղթայի ԴՆԹ պատրաստելու գործընթացը ծանր է: Ապագայում պիրոսեկվենսացումը կարող է նվիրված լինել երկլար PCR արտադրանքի ուղղակի հայտնաբերման տեխնոլոգիայի մշակմանը, ինչը մեծապես կպարզեցնի աշխատանքը: Եվ արդյունավետորեն նվազեցնելու հաջորդականության գինը `կլինիկական փորձարկումների համապարփակ խթանմանը հասնելու համար:
3. MSենքի մեթոդ.
Այս տեխնոլոգիան օգտագործում է այբբենարան `վայրի տիպի և մուտանտի գեները տարբերելու համար
ich- ը հաղորդվել է դեռ 1980-ականներին: Այս մեթոդի ամենամեծ առավելությունն այն է, որ այն ունի զգայունություն մինչև 1.0% և կարող է հայտնաբերել մուտանտի գեներ մինչև 1.0% նմուշներում: Ձևավորման մեջ թիրախային արտադրանքի երկարությունը կարող է առավելագույն չափով կրճատվել, և այն խնդիրը, որ ճշգրիտ հայտնաբերման արդյունքներ չեն կարող ձեռք բերել, քանի որ պարաֆինով պարունակվող հյուսվածքի նմուշից արդյունահանվող ԴՆԹ-ի մեծ մասը մասնատված է: Այս տեխնոլոգիան համատեղում է իրական ժամանակի PCR պլատֆորմը ՝ ուժեղացման ընթացքում փակ խողովակի շահագործման հասնելու համար: Գործողությունը պարզ է և չի պահանջում արտադրանքի հետմշակման գործընթաց, ինչը կարող է առավելագույն չափով խուսափել ուժեղացված արտադրանքի աղտոտումից: Ներկայումս աշխարհում ավելի հաճախ օգտագործվում է կարիճ-ARMS մեթոդը, որը միավորում է կարիճի զոնդը և ուժեղացման բլոկի մուտացիայի համակարգը: Երկու տեխնոլոգիաների համադրությունը կարող է առավելագույնի հասցնել երկու կողմերի զգայունությունն ու առանձնահատկությունը: Gao Jie et al. Օգտագործել է այս մեթոդը ՝ աղիքային աղիքի քաղցկեղով 167 հիվանդների մոտ KRAS գենի մուտացիայի կարգավիճակը հայտնաբերելու համար, ինչը ենթադրում է, որ այս մեթոդը հուսալի և ճշգրիտ է: Վանգ Հուի և այլք: Օգտագործեց նաև ARMS- ը KRAS- ի մուտացիաները հայտնաբերելու համար ֆորմալդեհիդով ամրացված և պարաֆինով ներկված հյուսվածքների 151 դեպքերում: Միացյալ Նահանգներում COBAS հավաքածուն (Roche), որը հաստատվել է FDA- ի կողմից KRAS- ի կլինիկական փորձարկման համար, և Therascreen RGQ հավաքածուն (Qiagen), որը վավերացված է Եվրամիության In vitro ախտորոշման (CE-IVD) կողմից, բոլորը օգտագործում են ARMS սկզբունքը: Ընդհանուր մեթոդների շարքում ARMS մեթոդը ամենազգայունն է և ծախսը համեմատաբար ողջամիտ: Հետևաբար, KRAS գեների կլինիկական հայտնաբերման մեծ մասը տանը և արտերկրում օգտագործում է ARMS մեթոդը, բայց քանի որ մեթոդը հիմնված է PCR տեխնոլոգիայի վրա, դրա թերությունն այն է, որ այն կարող է հայտնաբերվել միայն Հայտնի տեղանքի մուտացիաներ:
4. Իրական ժամանակի լյումինեսցիայի քանակական PCR մեթոդը.
Այն PCR-ի վրա հիմնված հայտնաբերման մեթոդ է՝ մուտացիան Ct արժեքով որոշելու համար: Այն ունի ուժեղ յուրահատկության, բարձր զգայունության, ճշգրիտ քանակականացման, հեշտ շահագործման և լիովին փակ ռեակցիայի առավելությունները: Շատ փորձարարական խմբեր որդեգրել են այս մեթոդը կոլոռեկտալ քաղցկեղի KRAS մուտացիաների հայտնաբերման համար: Համեմատած ուղղակի հաջորդականության մեթոդի հետ, քանակական PCR-ն ավելի մեծ առավելություն է զբաղեցնում զգայունության մեջ: Երկու մեթոդները համեմատող գիտնականներից շատերը կարծում են, որ քանակական PCR-ն ավելի զգայուն է: Liu Wei et al. Կոլոռեկտալ քաղցկեղի KRAS գենային մուտացիաների 280 դեպքի, KRAS գենի հաջորդականության մուտացիաների 94 դեպքի հայտնաբերման արդյունքների մանրամասն վերլուծության համար օգտագործվել է երկու մեթոդ, դրական ցուցանիշը կազմել է 33.57% (94/280), որոնցից իրական ժամանակի ֆլյուորեսցենտային քանակական PCR-ը դրական էր 91 դեպք ունեցել է 96.8% զգայունություն (91/94): Վայրի տիպի գեների հաջորդականության 186 դեպքերից 184-ը բացասական են եղել իրական ժամանակի քանակական PCR-ով, 98.9% յուրահատկությամբ (184/186): Իրական ժամանակի ֆլուորեսցենտային քանակական PCR մեթոդի և ուղղակի գեների հաջորդականության մեթոդի միջև համընկնումը կազմել է 98.2%: Հայտնաբերման երկու մեթոդներում յուրաքանչյուր մուտացիայի տեղամասի դրական և բացասական համընկնման գործակիցները եղել են 90%-ից բարձր, իսկ չորս տեղամասերի համընկնման մակարդակը հասել է 100%-ի: Երկու մեթոդների հայտնաբերման արդյունքները խիստ համահունչ էին, ինչը ցույց է տալիս լյումինեսցենտային քանակական PCR-ն: Այն մուտացիաների հայտնաբերման ավելի հուսալի մեթոդ է: Այնուամենայնիվ, PCR-ի վրա հիմնված մեթոդները պետք է նախագծեն պրայմերներ և զոնդեր՝ հիմնված մուտացիայի հայտնի տեսակների վրա, այնպես որ բոլոր հնարավոր մուտացիաները չեն կարող հայտնաբերվել, և կարող են հայտնաբերվել միայն հատուկ տեղամասեր: Եթե որոշակի կայք ներառված չէ հավաքածուի հայտնաբերման տիրույթում, նույնիսկ եթե իրականում կա մուտացիա, փաթեթի արդյունքը դեռ բացասական է: Բացի այդ, թեև քանակական PCR-ի զգայունությունը բարձր է, այնուամենայնիվ, արդյոք կան կեղծ դրականներ, դեռևս պետք է ստուգվի ԴՆԹ-ի հաջորդականության տեխնոլոգիայով, կամ հետադարձ և հեռանկարային կլինիկական փորձարկումներով մեծ նմուշի չափերով՝ հաստատելու KRAS մուտացիայի կարգավիճակի և թիրախային արդյունավետության միջև հարաբերակցությունը: թմրանյութեր. Հետևաբար, մուտացիաների հայտնաբերման բարձր զգայունությունը չպետք է կուրորեն հետապնդվի, մինչդեռ հայտնաբերման առանձնահատկությունն ու ճշգրտությունը պետք է անտեսվեն: Տարբեր լաբորատոր պայմաններում, նմուշներում մուտացիաների հայտնաբերման օպտիմալ մեթոդը կարող է նաև տարբեր լինել: Մուտացիաների ավելի մեծ համամասնությամբ նմուշների համար Sanger հաջորդականացման մեթոդն ավելի բարձր ճշգրտություն ունի գենային մուտացիաների հայտնաբերման հարցում, մինչդեռ մուտացիաների ավելի ցածր համամասնություն ունեցող նմուշների դեպքում կարող են առաջանալ կեղծ բացասականներ, իսկ հայտնաբերման մեթոդը՝ օգտագործելով լյումինեսցենտային PCR որպես տեխնիկական հարթակ: կարող է բնութագրվել բարձր զգայունությամբ:
5. ՄՌԿ մեթոդ.
Դա վերջին տարիներին առավել հաճախ օգտագործվող գեների հայտնաբերման մեթոդներից մեկն է: Այն ունի պարզ, արագ, զգայուն և մեկ խողովակի առավելությունները `աղտոտումից խուսափելու համար: Կլինիկական փորձարկումներում դրա օգտագործման իրագործելիությունը պարզելու համար, Liu Liqin- ը և ուրիշներ օգտագործել են HRM մեթոդը `հայտնաբերելու համար ԿՌԱՍ-ի գենի մուտացիան աղիքային աղիքի քաղցկեղով 64 հիվանդների մոտ, ապա արդյունքները ստուգելու համար օգտագործեցին ուղղակի հաջորդականություն: Պարզվել է, որ ՄՌԿ և ուղղակի հաջորդականության արդյունքները համահունչ են: Ուղղակի հաջորդականության հետ համեմատած ՝ HRM- ի կողմից KRAS գենի մուտացիաների հայտնաբերումը պարզ և ճշգրիտ է, ինչը ենթադրում է, որ այն հուսալի մեթոդ է, որը հարմար է կլինիկական փորձարկումների համար: Չեն ihիհոնգը և այլք: Օգտագործելով HRM մեթոդը `փորձարկելու համար մի շարք խառը նմուշներ, որոնք պարունակում են KRAS մուտանտի պլազմիդների տարբեր համամասնություններ` դրանց զգայունությունը գնահատելու համար: Պարզվել է, որ խառը նմուշներում պլազմիդային մուտացիաների համամասնությունը կազմում է 10%, իսկ զգայունությունը հասնում է 10% -ի: Դրանից հետո մեթոդը օգտագործվել է հայտնաբերելու համար ԿՌԱՍ գեների մուտացիան գունավոր աղիքի քաղցկեղի 60 նմուշներում: Ուղղակի հաջորդականության մեթոդի համեմատ `HRM մեթոդի զգայունությունը 100% էր, իսկ առանձնահատկությունը` 96% (43/45): HRM մեթոդի անբարենպաստությունն այն է, որ անհնար է ճշգրիտ ներկայացնել կոնկրետ մուտացիայի տեսակը և որը կոդոն է մուտացիայի ենթարկված: Եթե հալման կորի վրա հայտնաբերվել է աննորմալություն, անհրաժեշտ է հաջորդականության մեթոդ ՝ մուտացիայի տեսակը որոշելու համար: Harlé հետազոտական խումբն օգտագործել է աղիքային քաղցկեղի հյուսվածքի 156 դեպք ՝ համեմատելու լյումինեսցենտային PCR, ARMS և HRM մեթոդները: Արդյունքները ենթադրում են, որ չնայած երեք մեթոդները հարմար են կլինիկական փորձարկումների համար, ՄՌԿ-ի հուսալիությունը այնքան լավ չէ, որքան մյուս երկու մեթոդները:
6. Այլ մեթոդներ.
Բացի վերոհիշյալ մեթոդներից, հայտնաբերման այլ մեթոդներ կիրառման մեջ ունեն իրենց առավելություններն ու թերությունները, ինչպիսիք են PCR-SSCP, բարձր արդյունավետությամբ հեղուկ քրոմատագրությունը, ցերեկային լույսի PCR օպտիմիզացված օլիգոնուկլեոտիդային զոնդի մեթոդը, տեղադրված PCR- ի և ARMS- ի զուգակցման եղանակը, COLD-PCR մեթոդը և այլն: Բարձր արդյունավետության հեղուկ քրոմատագրությունն ունի ուժեղ առանձնահատկություն, բայց նմուշների պահանջարկը մեծ է. PCR-SSCP- ն ցածր գնով և տնտեսական է, բայց գործողությունը բարդ է. լյումինեսցենտային PCR- ի վրա հիմնված մուտացիայի հայտնաբերման տեխնոլոգիան ունի ուժեղ յուրահատկություն, բարձր զգայունություն և ճշգրիտ քանակական, դյուրին շահագործում, լիովին արգելափակված ռեակցիա և այլ առավելություններ, բայց բոլորն էլ պետք է նախագծանախշեր և զոնդեր նախագծեն ըստ հայտնի մուտացիայի տեսակի, այնպես որ կարող են լինել միայն հատուկ կայքեր: հայտնաբերվել է, և հնարավոր բոլոր մուտացիաները հնարավոր չէ հայտնաբերել:
3. Ամփոփում
Ամփոփելով, քանի որ մուտացիայի տեղերը և տարբեր լաբորատորիաներում հայտնաբերման մեթոդները միատեսակ չեն, վերլուծված ուռուցքի նմուշների չափը և ԴՆԹ-ի արդյունահանման որակը նույնպես անհավասար են, ինչը հանգեցնում է մեծ կամ փոքր փորձարարական արդյունքների գոյությանը լաբորատորիաների միջև: Տարբերությունները, ստանդարտացումը KRAS գենի մուտացիայի հայտնաբերումը դարձել է կլինիկական հայտնաբերման խնդիր, որը մտահոգիչ է տարբեր երկրներում: Ներկայումս կան բազմաթիվ մեթոդներ KRAS գենի մուտացիաները հայտնաբերելու համար: Highգայունությունը բարձրից ցածր է ARMS- ը, պիրոսեկվենսացումը, HRM- ն, իրական ժամանակում քանակական PCR- ն և ուղղակի հաջորդականությունը: Կլինիկական իրականությունից ցածր զգայունությունը չի նպաստում կլինիկական բուժմանը, բայց չափազանց զգայուն մեթոդները կհանգեցնեն հայտնաբերման առանձնահատկության անկմանը, և անհարկի կեղծ դրական արդյունքներ կարող են առաջանալ և ազդել հիվանդի հետագա դեղորայքի ռեժիմի վրա: Հաշվի առնելով վերը նշված ասպեկտները, զուգորդված FDA- ի կողմից հաստատված մեթոդի հետ, առաջարկվում է ARMS մեթոդը: Իհարկե, շուկայական տեսանկյունից, մոլեկուլային ախտորոշումը չպետք է ընդգծի ինձ
մեթոդներ, բայց կենտրոնանալ վերջնական ճիշտ արդյունքների վրա: Տարբեր լաբորատորիաներ կարող են կիրառել փորձարկման համապատասխան մեթոդներ՝ ըստ փաստացի իրավիճակի, բայց միայն այն դեպքում, եթե ունեն լավ օպերատորի որակավորում և որակի ներքին վերահսկման համակարգեր: Ներկայիս ներքին լաբորատոր միջավայրի պայմաններում անհրաժեշտ է թեստավորում իրականացնել ստանդարտացված PCR լաբորատորիայում և մասնակցել ներքին և միջազգային միջսենյակային որակի վերահսկման աշխատանքներին` ապահովելու լաբորատոր փորձարկման հուսալի որակ: Ստանդարտացված կառավարումն անհրաժեշտ պայման է մշտական արդյունքներ ապահովելու համար: Չինաստանում հրատապ անհրաժեշտություն կա միավորելու և ստանդարտացնելու KRAS գենի կլինիկական թեստավորումը, ինչպես նաև ստեղծելու ստանդարտացված և ստանդարտացված թեստավորման ծրագիր՝ ըստ տարբեր կարիքների, և այս ծրագիրը կարող է տարածվել BRAF, PIK23450_3CA, EGFR և հայտնաբերման վրա: այլ գեներ՝ խթանելու կլինիկական մոլեկուլային պաթոլոգիայի փորձարկումը:
