Targeting drugs such as cetuximab and panitumumab have been widely used in clinic as effective therapeutic drugs for colorectal cancer. Clinical data show that patients with KRAS mutations have no significant effect on this monoclonal antibody drug, and only wild-type patients can benefit from it. Therefore, the KRAS gene mutation status is clinically regarded as an important therapeutic marker, which has a strong correlation with the prognosis and treatment effect of colorectal cancer. The 2009 National Cancer Comprehensive Network (NCCN) Colorectal Cancer Clinical Practice Guidelines stipulates that all patients with metastatic colorectal cancer must detect KRAS gene mutation status, and only KRAS wild type is recommended to receive EGFR targeted therapy. In the same year, the American Society of Clinical Oncology (ASCO) also issued the same clinical treatment recommendations as a molecular marker for tumor targeted therapy, which shows its important guiding significance. At present, KRAS genetic testing has been widely carried out clinically. We mainly evaluate the domestic KRAS gene mutation detection methods for reference in clinical selection.
1. कोलोरेक्टल कैंसर में केआरएएस जीन उत्परिवर्तन की सकारात्मक दर
कोलोरेक्टल कैंसर में, केआरएएस जीन की उत्परिवर्तन दर 35% से 45% तक होती है, और उच्च जोखिम उत्परिवर्तन साइट एक्सॉन 12 पर कोडन 13 और 2 है, और अभी भी 61 और 146 जैसे दुर्लभ उत्परिवर्तन साइट हैं। केआरएएस जीन उत्परिवर्तन के लिए कई पहचान विधियां हैं, जिनमें प्रत्यक्ष अनुक्रमण, उच्च रिज़ॉल्यूशन मेल्टिंग कर्व विश्लेषण (एचआरएम), पायरोसेक्वेंसिंग, मात्रात्मक पीसीआर, उत्परिवर्तन प्रवर्धन ब्लॉक सिस्टम (एम्प्लिनक एटीओ) एनरेफ्रैक्टरीम्यूटेशन सिस्टम (एआरएमएस), प्रतिबंध खंड लंबाई बहुरूपता (आरएफएलपी), पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन-सिंगल-स्ट्रैंड कंफॉर्मेशन पॉलीमोर्फिज्म विश्लेषण (पीसीआर-सिंगलस्ट्रैंड कन्फोमेशन पॉलीमोर्फिज्म (पीसीआर-एसएससीपी), कम पर सह-प्रवर्धन शामिल हैं। विकृतीकरण तापमान पीसीआर (सीओएलडी-पीसीआर) और उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी विश्लेषण, आदि।
2. केआरएएस उत्परिवर्तन का पता लगाने के तरीकों का मूल्यांकन
1. प्रत्यक्ष अनुक्रमण विधि: यह केआरएएस जीन उत्परिवर्तन का पता लगाने के लिए सबसे क्लासिक विधि है, और यह जीन उत्परिवर्तन का पता लगाने के लिए स्वर्ण मानक भी है। डाइडॉक्सी अनुक्रमण के सिद्धांत पर आधारित प्रत्यक्ष अनुक्रमण विधि बेस पीक मैप के रूप में जीन अनुक्रम के परिवर्तन को सबसे सहजता से दिखा सकती है। पता लगाने का प्रकार अधिक व्यापक है, और यह सबसे पहले लागू उत्परिवर्तन पता लगाने की विधि भी है। नई पीढ़ी के अनुक्रमण प्लेटफार्मों के उद्भव के बावजूद, देश और विदेश में विद्वान अभी भी नई पद्धति की विश्वसनीयता को मापने और निर्धारित करने के लिए प्रत्यक्ष अनुक्रमण के परिणामों को एक पैमाने के रूप में उपयोग करते हैं। गाओ जिंग एट अल. कोलोरेक्टल कैंसर के 966 रोगियों में केआरएएस और बीआरएफ जीन उत्परिवर्तन का पता लगाने के लिए प्रत्यक्ष अनुक्रमण लागू किया गया। यह साहित्य में रिपोर्ट किए गए सबसे बड़े घरेलू नमूने के साथ केआरएएस जीन उत्परिवर्तन का विश्लेषण भी है। लिंग युन और अन्य का मानना है कि प्रत्यक्ष अनुक्रमण विधि प्रत्येक जीन की उत्परिवर्तन स्थिति को समझने के लिए सबसे प्रत्यक्ष और प्रभावी पता लगाने की विधि है, जो उत्परिवर्तन के प्रकार को स्पष्ट कर सकती है, विशेष रूप से अज्ञात उत्परिवर्तन का पता लगाने के लिए। यद्यपि इस विधि की संवेदनशीलता अपेक्षाकृत कम है, ट्यूमर कोशिकाओं को समृद्ध करने के लिए माइक्रोडिसेक्शन जैसी विधियों द्वारा इसे बेहतर बनाया जा सकता है। प्रत्यक्ष अनुक्रमण विधि को अन्य घरेलू अनुसंधान समूहों में बड़े नमूना आकारों के केआरएएस पता लगाने के लिए भी लागू किया गया है। हालाँकि, कम संवेदनशीलता प्रत्यक्ष अनुक्रमण का सबसे बड़ा नुकसान है। चीन में रिपोर्ट किए गए परिणामों से देखते हुए, प्रत्यक्ष अनुक्रमण द्वारा उत्परिवर्तन का पता लगाने की दर कम नहीं है। लियू जियाओजिंग एट अल। प्रत्यक्ष अनुक्रमण और पेप्टाइड न्यूक्लिक एसिड क्लैंप पीसीआर (पीएनए-पीसीआर) की तुलना की गई और पाया गया कि केआरएएस जीन उत्परिवर्तन के 43 मामलों का प्रत्यक्ष अनुक्रमण द्वारा पता लगाया गया था। इन उत्परिवर्तनों के अलावा, प्रत्यक्ष अनुक्रमण द्वारा पीएनए-पीसीआर का भी पता लगाया गया। जंगली प्रकार में दस उत्परिवर्तन पाए गए, और उत्परिवर्ती रोगियों को निर्धारित करने के लिए पीसीआर और प्रत्यक्ष अनुक्रमण विधि द्वारा जंगली प्रकार के रोगियों को निर्धारित करने के सुझाव दिए गए थे। किउ तियान एट अल। फ्लोरोसेंट पीसीआर-अनुकूलित ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड जांच विधि और प्रत्यक्ष अनुक्रमण विधि द्वारा 131 कोलोरेक्टल कैंसर नमूनों का पता लगाया गया, और केआरएएस जीन उत्परिवर्तन की सकारात्मक दर 41.2% (54/131) और 40.5% (53/131) थी। बाई डोंगयु ने विभिन्न तरीकों की पहचान संवेदनशीलता पर भी चर्चा की। 200 कोलोरेक्टल कैंसर रोगियों में से 63 का पता आरटी-क्यूपीसीआर उत्परिवर्तन द्वारा लगाया गया था, और उत्परिवर्तन का पता लगाने की दर 31.5% थी; उत्परिवर्तन के 169 मामलों का प्रत्यक्ष अनुक्रमण करके 50 नमूनों को सफलतापूर्वक अनुक्रमित किया गया, उत्परिवर्तन का पता लगाने की दर 29.6% है। यद्यपि प्रत्यक्ष अनुक्रमण विधि केआरएएस जीन उत्परिवर्तन स्थिति का सटीक, निष्पक्ष और विशेष रूप से पता लगा सकती है, लेकिन इसकी कमियां जैसे उच्च तकनीकी आवश्यकताएं, जटिल संचालन प्रक्रियाएं, क्रॉस-संदूषण का कारण आसान होना और परिणामों की समय लेने वाली और श्रमसाध्य व्याख्या भी बहुत स्पष्ट हैं। अक्सर कोई अनुक्रमण उपकरण नहीं होता है, और नमूने को परीक्षण के लिए संबंधित कंपनी को भेजने की आवश्यकता होती है, जिसमें लंबा समय लगता है और इसकी लागत अधिक होती है, इसलिए इसकी बड़ी सीमाएं हैं।
पायरोसेक्वेंसिंग विधि:
अनुक्रमण संवेदनशीलता, पता लगाने की लागत और रिपोर्ट करने के समय के संदर्भ में केआरएएस जीन उत्परिवर्तन का पता लगाने के लिए पाइरोसेक्वेंसिंग विधि भी एक अधिक सुविधाजनक विधि है। इस विधि की पुनरावृत्ति बेहतर है. प्राप्त शिखर मानचित्र के अनुसार एक निश्चित साइट की उत्परिवर्तन आवृत्ति का मात्रात्मक अध्ययन और विभिन्न साइटों की उत्परिवर्तन आवृत्तियों के बीच तुलना एक नज़र में स्पष्ट है। हाल के वर्षों में, ओगिनो एट अल., हचिन्स एट अल. कोलोरेक्टल कैंसर के बड़े नमूनों वाले रोगियों में केआरएएस उत्परिवर्तन का परीक्षण करने के लिए पाइरोडिंग तकनीक का उपयोग किया गया है। नतीजे बताते हैं कि लक्षित चिकित्सा के लिए मरीजों की जांच के लिए पाइरोसेक्वेंसिंग तकनीक एक शक्तिशाली उपकरण है। ट्यूमर आणविक निदान में व्यापक अनुप्रयोग संभावनाएं हैं। घरेलू विद्वानों ने अच्छी सटीकता और विश्वसनीयता के साथ कोलोरेक्टल कैंसर में केआरएएस उत्परिवर्तन का चिकित्सकीय रूप से पता लगाने के लिए पायरोसेक्वेंसिंग तकनीक का भी उपयोग किया है। इस विधि में बेहतर विशिष्टता और उच्च संवेदनशीलता है। सुंडस्ट्रोम एट अल. नैदानिक अनुप्रयोगों में एलिलिक-विशिष्ट पीसीआर और पायरोसेक्वेंसिंग की तुलना की गई और पाया गया कि कोलोरेक्टल कैंसर के रोगियों में केआरएएस उत्परिवर्तन के 314 मामलों में, पायरोसेक्वेंसिंग की विशिष्टता एलील्स की तुलना में बेहतर थी। पीसीआर, और कम ट्यूमर कोशिका सामग्री वाले ऊतकों के प्रति अच्छी संवेदनशीलता रखता है। ट्यूमर कोशिकाओं के अनुपात को 1.25% से 2.5% तक पतला करें। पायरोसेक्वेंसिंग अभी भी उत्परिवर्तन संकेतों का पता लगा सकती है। जब सेंगर अनुक्रमण द्वारा पता लगाने के लिए नमूने में उत्परिवर्ती एलील की न्यूनतम सामग्री को 20% तक पहुंचने की आवश्यकता होती है, तो इसे एचआरएम विधि द्वारा पता लगाया जा सकता है जब यह 10% तक पहुंच जाता है, और पाइरोग्रेडिंग के लिए केवल 5% तक उत्परिवर्तन का पता लगाया जा सकता है। एलील्स। हमने कोलोरेक्टल कैंसर के 717 रोगियों में केआरएएस उत्परिवर्तन का पता लगाने के लिए पाइरोग्रेडिंग का उपयोग किया और पाया कि केआरएएस उत्परिवर्तन की आवृत्ति 40.9% थी। कोडन 12 की उत्परिवर्तन दर 30.1% थी, कोडन 13 की उत्परिवर्तन दर 9.8% थी, और कोडन 61 की उत्परिवर्तन दर 1.0% थी। हमने परीक्षण से पहले मैन्युअल माइक्रोडिसेक्शन द्वारा ऊतकों को उच्च ट्यूमर सामग्री से समृद्ध किया, जिससे परिणाम अधिक विश्वसनीय हो गए। विधि में अच्छी संवेदनशीलता और विशिष्टता है, और नैदानिक अभ्यास में विकसित करना आसान है। पायरोसेक्वेंसिंग का नुकसान पता लगाने की उच्च लागत है, और अनुक्रमण नमूनों के लिए एकल-फंसे डीएनए तैयार करने की प्रक्रिया बोझिल है। भविष्य में, पायरोसेक्वेंसिंग को डबल-स्ट्रैंडेड पीसीआर उत्पादों का प्रत्यक्ष पता लगाने के लिए प्रौद्योगिकी के विकास के लिए समर्पित किया जा सकता है, जो ऑपरेशन को काफी सरल बना देगा। और नैदानिक परीक्षण के व्यापक प्रचार को प्राप्त करने के लिए अनुक्रमण की लागत को प्रभावी ढंग से कम करें।
3. हथियार विधि:
यह तकनीक जंगली प्रकार और उत्परिवर्ती जीनों के बीच अंतर करने के लिए प्राइमरों का उपयोग करती है
इसकी रिपोर्ट 1980 के दशक की शुरुआत में की गई है। इस पद्धति का सबसे बड़ा लाभ यह है कि इसकी संवेदनशीलता 1.0% तक है और नमूनों में उत्परिवर्ती जीन का पता 1.0% से भी कम समय में लगाया जा सकता है। डिज़ाइन में, लक्ष्य उत्पाद की लंबाई को सबसे बड़ी सीमा तक छोटा किया जा सकता है, और समस्या यह है कि सटीक पता लगाने के परिणाम प्राप्त नहीं किए जा सकते हैं क्योंकि पैराफिन-एम्बेडेड ऊतक नमूने से निकाले गए अधिकांश डीएनए खंडित हैं। यह तकनीक प्रवर्धन के दौरान बंद-ट्यूब संचालन को प्राप्त करने के लिए वास्तविक समय पीसीआर प्लेटफॉर्म को जोड़ती है। ऑपरेशन सरल है और उत्पाद के बाद के प्रसंस्करण की आवश्यकता नहीं है, जो प्रवर्धित उत्पाद के संदूषण से काफी हद तक बच सकता है। वर्तमान में, बिच्छू जांच और प्रवर्धन ब्लॉक उत्परिवर्तन प्रणाली को संयोजित करने वाली बिच्छू-एआरएमएस विधि दुनिया में अधिक सामान्यतः उपयोग की जाती है। दो प्रौद्योगिकियों का संयोजन दोनों पक्षों की संवेदनशीलता और विशिष्टता को अधिकतम कर सकता है। गाओ जी एट अल. कोलोरेक्टल कैंसर के 167 रोगियों में केआरएएस जीन उत्परिवर्तन स्थिति का पता लगाने के लिए इस विधि का उपयोग किया गया, जिससे पता चलता है कि यह विधि विश्वसनीय और सटीक है। वांग हुई एट अल. फॉर्मेल्डिहाइड-फिक्स्ड और पैराफिन-एम्बेडेड ऊतकों के 151 मामलों में केआरएएस उत्परिवर्तन का पता लगाने के लिए एआरएमएस का भी उपयोग किया गया। संयुक्त राज्य अमेरिका में, KRAS के नैदानिक परीक्षण के लिए FDA द्वारा अनुमोदित COBAS किट (Roche) और यूरोपीय संघ इन विट्रो डायग्नोस्टिक्स (CE-IVD) द्वारा प्रमाणित थेरास्क्रीन RGQ किट (Qiagen) सभी ARMS सिद्धांत का उपयोग करते हैं। सामान्य तरीकों में से, एआरएमएस विधि सबसे संवेदनशील है और लागत अपेक्षाकृत उचित है। इसलिए, देश और विदेश में केआरएएस जीन का नैदानिक पता लगाने का एक बड़ा हिस्सा एआरएमएस विधि का उपयोग कर रहा है, लेकिन क्योंकि यह विधि पीसीआर तकनीक पर आधारित है, इसकी कमी यह है कि यह केवल ज्ञात साइट उत्परिवर्तन का पता लगा सकता है।
4. वास्तविक समय प्रतिदीप्ति मात्रात्मक पीसीआर विधि:
It is a PCR-based detection method to determine the mutation by Ct value. It has the advantages of strong specificity, high sensitivity, accurate quantification, easy operation, and fully closed reaction. Many experimental groups have adopted this method for the detection of KRAS mutations in colorectal cancer. Compared with the direct sequencing method, quantitative PCR occupies a greater advantage in sensitivity. Most scholars comparing the two methods believe that quantitative PCR is more sensitive. Liu Wei et al. Used two methods to make a detailed analysis of the detection results of 280 cases of colorectal cancer KRAS gene mutations, 94 cases of KRAS gene sequencing mutations, the positive rate was 33.57% (94/280), of which, real-time fluorescence quantitative PCR was positive 91 cases had a sensitivity of 96.8% (91/94). Of the 186 gene sequencing wild-type cases, 184 were negative by real-time quantitative PCR, with a specificity of 98.9% (184/186). The coincidence rate between real-time fluorescence quantitative PCR method and direct gene sequencing method was 98.2%. In the two detection methods, the positive and negative coincidence rates of each mutation site were above 90%, and the coincidence rate of four sites reached 100%. The detection results of the two methods were highly consistent, indicating fluorescent quantitative PCR It is a more reliable method for mutation detection. However, PCR-based methods need to design primers and probes based on known mutation types, so all possible mutations cannot be detected, and only specific sites can be detected. If a certain site is not included in the detection range of the kit, even if there is actually a mutation, the kit result is still negative. In addition, although the sensitivity of quantitative PCR is high, whether there are false positives still needs to be verified by DNA sequencing technology, or retrospective and prospective clinical experiments with large sample sizes to confirm the correlation between KRAS mutation status and the efficacy of targeted drugs . Therefore, the high sensitivity of mutation detection should not be pursued blindly, while the specificity and accuracy of detection should be ignored. Under different laboratory conditions, the optimal method for mutation detection in specimens may also be different. For specimens with a higher proportion of mutations, Sanger sequencing method has a higher accuracy in detecting gene mutations, while for specimens with a lower proportion of mutations, Sanger sequencing method False negatives may occur, and the detection method using fluorescent PCR as the technical platform can be characterized by high sensitivity.
5. एचआरएम विधि:
यह हाल के वर्षों में सबसे अधिक इस्तेमाल की जाने वाली जीन पहचान विधियों में से एक है। इसमें प्रदूषण से बचने के लिए सरल, तेज़, संवेदनशील और एकल ट्यूब के फायदे हैं। नैदानिक परीक्षण में इसके उपयोग की व्यवहार्यता का पता लगाने के लिए, लियू लिकिन और अन्य ने कोलोरेक्टल कैंसर वाले 64 रोगियों में केआरएएस जीन उत्परिवर्तन का पता लगाने के लिए एचआरएम विधि का उपयोग किया, और फिर परिणामों को सत्यापित करने के लिए प्रत्यक्ष अनुक्रमण का उपयोग किया। एचआरएम और प्रत्यक्ष अनुक्रमण के परिणाम सुसंगत पाए गए हैं। प्रत्यक्ष अनुक्रमण की तुलना में, एचआरएम द्वारा केआरएएस जीन उत्परिवर्तन का पता लगाना सरल और सटीक है, यह सुझाव देता है कि यह नैदानिक परीक्षण के लिए उपयुक्त एक विश्वसनीय तरीका है। चेन झिहोंग एट अल। उनकी संवेदनशीलता का मूल्यांकन करने के लिए केआरएएस उत्परिवर्ती प्लास्मिड के विभिन्न अनुपात वाले मिश्रित नमूनों की एक श्रृंखला का परीक्षण करने के लिए एचआरएम विधि का उपयोग किया गया। यह पाया गया कि मिश्रित नमूनों में प्लास्मिड उत्परिवर्तन का अनुपात 10% था, और संवेदनशीलता 10% तक पहुंच गई। इसके बाद, इस विधि का उपयोग 60 कोलोरेक्टल कैंसर ऊतक नमूनों में केआरएएस जीन उत्परिवर्तन का पता लगाने के लिए किया गया था। प्रत्यक्ष अनुक्रमण विधि की तुलना में, एचआरएम विधि की संवेदनशीलता 100% थी, और विशिष्टता 96% (43/45) थी। एचआरएम पद्धति का नुकसान यह है कि विशिष्ट उत्परिवर्तन प्रकार और कौन सा कोडन उत्परिवर्तित है, यह सटीक रूप से प्रदान करना असंभव है। यदि पिघलने वाले वक्र पर कोई असामान्यता पाई जाती है, तो उत्परिवर्तन प्रकार निर्धारित करने के लिए अनुक्रमण विधि की आवश्यकता होती है। हार्ले अनुसंधान समूह ने फ्लोरोसेंट पीसीआर, एआरएमएस और एचआरएम तरीकों की तुलना करने के लिए कोलोरेक्टल कैंसर ऊतक के 156 मामलों का इस्तेमाल किया। नतीजे बताते हैं कि यद्यपि तीन विधियां नैदानिक परीक्षण के लिए उपयुक्त हैं, एचआरएम की विश्वसनीयता अन्य दो विधियों जितनी अच्छी नहीं है।
6. अन्य विधियाँ:
उपर्युक्त विधियों के अलावा, अन्य पहचान विधियों के अनुप्रयोग में अपने फायदे और नुकसान हैं, जैसे पीसीआर-एसएससीपी, उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी, फ्लोरोसेंट पीसीआर-अनुकूलित ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड जांच विधि, नेस्टेड पीसीआर और एआरएमएस संयोजन की विधि, सीओएलडी-पीसीआर विधि, आदि। उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी में मजबूत विशिष्टता है, लेकिन नमूनों की मांग बड़ी है; पीसीआर-एसएससीपी लागत में कम और किफायती है, लेकिन ऑपरेशन जटिल है; फ्लोरोसेंट पीसीआर पर आधारित उत्परिवर्तन का पता लगाने वाली तकनीक में मजबूत विशिष्टता, उच्च संवेदनशीलता और सटीक मात्रात्मक, आसान संचालन, पूरी तरह से अवरुद्ध प्रतिक्रिया और अन्य फायदे हैं, लेकिन सभी को ज्ञात उत्परिवर्तन प्रकार के अनुसार प्राइमर और जांच को डिजाइन करने की आवश्यकता है, इसलिए केवल विशिष्ट साइटों का पता लगाया जा सकता है, और सभी संभावित उत्परिवर्तन का पता नहीं लगाया जा सकता है।
3. सारांश
संक्षेप में, क्योंकि विभिन्न प्रयोगशालाओं में उत्परिवर्तन स्थल और पता लगाने के तरीके एक समान नहीं हैं, विश्लेषण किए गए ट्यूमर नमूनों का आकार और डीएनए निष्कर्षण की गुणवत्ता भी असमान है, जिसके परिणामस्वरूप प्रयोगशालाओं के बीच बड़े या छोटे प्रयोगात्मक परिणामों में अंतर होता है, केआरएएस जीन उत्परिवर्तन का पता लगाने का मानकीकरण विभिन्न देशों में चिंता का एक नैदानिक पहचान मुद्दा बन गया है। वर्तमान में, केआरएएस जीन में उत्परिवर्तन का पता लगाने के लिए कई तरीके हैं। उच्च से निम्न तक की संवेदनशीलता एआरएमएस, पायरोसेक्वेंसिंग, एचआरएम, वास्तविक समय मात्रात्मक पीसीआर और प्रत्यक्ष अनुक्रमण है। नैदानिक वास्तविकता से, कम संवेदनशीलता नैदानिक उपचार के लिए अनुकूल नहीं है, लेकिन बहुत संवेदनशील तरीकों से पता लगाने की विशिष्टता कम हो जाएगी, और अनावश्यक गलत सकारात्मक परिणाम हो सकते हैं और रोगी के बाद के दवा आहार को प्रभावित कर सकते हैं। उपरोक्त पहलुओं को ध्यान में रखते हुए, एफडीए द्वारा अनुमोदित विधि के साथ संयुक्त रूप से एआरएमएस विधि की सिफारिश की जाती है। बेशक, बाजार के नजरिए से, आणविक निदान पर मुझ पर जोर नहीं देना चाहिए
तरीके, लेकिन अंतिम सही परिणामों पर ध्यान केंद्रित करें। विभिन्न प्रयोगशालाएँ वास्तविक स्थिति के अनुसार उचित परीक्षण विधियाँ अपना सकती हैं, लेकिन केवल तभी जब उनके पास अच्छी ऑपरेटर योग्यताएँ और आंतरिक गुणवत्ता नियंत्रण प्रणालियाँ हों। वर्तमान घरेलू प्रयोगशाला पर्यावरणीय परिस्थितियों के तहत, विश्वसनीय प्रयोगशाला परीक्षण गुणवत्ता सुनिश्चित करने के लिए एक मानकीकृत पीसीआर प्रयोगशाला में परीक्षण करना और घरेलू और अंतर्राष्ट्रीय अंतर-कक्ष गुणवत्ता नियंत्रण गतिविधियों में भाग लेना आवश्यक है। निरंतर परिणाम सुनिश्चित करने के लिए मानकीकृत प्रबंधन एक आवश्यक शर्त है। चीन में, केआरएएस जीन के नैदानिक परीक्षण को एकीकृत और मानकीकृत करने और विभिन्न आवश्यकताओं के अनुसार एक मानकीकृत और मानकीकृत परीक्षण कार्यक्रम तैयार करने की तत्काल आवश्यकता है, और इस कार्यक्रम को नैदानिक आणविक रोगविज्ञान परीक्षण को बढ़ावा देने के लिए बीआरएफ, पीआईके23450_3सीए, ईजीएफआर और अन्य जीनों का पता लगाने के लिए बढ़ाया जा सकता है।
