Targeting drugs such as cetuximab and panitumumab have been widely used in clinic as effective therapeutic drugs for colorectal cancer. Clinical data show that patients with KRAS mutations have no significant effect on this monoclonal antibody drug, and only wild-type patients can benefit from it. Therefore, the KRAS gene mutation status is clinically regarded as an important therapeutic marker, which has a strong correlation with the prognosis and treatment effect of colorectal cancer. The 2009 National Cancer Comprehensive Network (NCCN) Colorectal Cancer Clinical Practice Guidelines stipulates that all patients with metastatic colorectal cancer must detect KRAS gene mutation status, and only KRAS wild type is recommended to receive EGFR targeted therapy. In the same year, the American Society of Clinical Oncology (ASCO) also issued the same clinical treatment recommendations as a molecular marker for tumor targeted therapy, which shows its important guiding significance. At present, KRAS genetic testing has been widely carried out clinically. We mainly evaluate the domestic KRAS gene mutation detection methods for reference in clinical selection.
1. මහා බඩවැලේ පිළිකා වල KRAS ජාන විකෘතියේ ධනාත්මක අනුපාතය
මහා බඩවැලේ පිළිකා වලදී, KRAS ජානයේ විකෘති අනුපාතය 35% සිට 45% දක්වා ඉහළ අගයක් ගන්නා අතර අධි අවදානම් සහිත විකෘති අඩවිය එක්සෝන් 12 හි 13 සහ 2 කෝඩෝන වන අතර 61 සහ 146 වැනි දුර්ලභ ඒවා තවමත් පවතී. අඩවිය. KRAS ජාන විකෘති සඳහා සෘජු අනුක්‍රමණය, අධි විභේදන ද්‍රවා වක්‍ර විශ්ලේෂණය (HRM), පයිරෝසෙන්සිං, ප්‍රමාණාත්මක PCR, විකෘති විස්තාරණ වාරණ පද්ධතිය (ඇම්ප්ලින්ක් ඇටියෝ) nrefractorymutation system (ARMS), සීමා කිරීම් කැබලි දිග බහුමාපකය (RFLP), පොලිමරේස් දාම ප්‍රතික්‍රියා-තනි-නූල් අනුකූලතා බහුමාපක විශ්ලේෂණය (PCR-singlestrand confomation polymorphism (PCR-SSCP), අඩු අවපීඩන උෂ්ණත්වයේ දී සම-විස්තාරණය කිරීම PCR (COLD-PCR) සහ ඉහළ ක්‍රියාකාරීත්වයකින් යුත් ද්‍රව වර්ණදේහ විශ්ලේෂණය යනාදිය.
2. KRAS විකෘති හඳුනාගැනීමේ ක්‍රම ඇගයීම
1. සෘජු අනුක්‍රමණය කිරීමේ ක්‍රමය: එය KRAS ජාන විකෘති හඳුනා ගැනීම සඳහා වඩාත් සම්භාව්‍ය ක්‍රමය වන අතර එය ජාන විකෘති හඳුනා ගැනීම සඳහා වන රන් ප්‍රමිතිය ද වේ. ඩයිඩොක්සි අනුක්‍රමණය කිරීමේ මූලධර්මය මත පදනම් වූ සෘජු අනුක්‍රමණය කිරීමේ ක්‍රමවේදය මූලික අනුරූප සිතියමේ ස්වරූපයෙන් ජාන අනුක්‍රමය වෙනස් කිරීම වඩාත් බුද්ධිමත්ව පෙන්විය හැකිය. හඳුනාගැනීමේ වර්ගය වඩාත් පුළුල් වන අතර එය පැරණිතම ව්‍යවහාරික විකෘති හඳුනාගැනීමේ ක්‍රමය ද වේ. නව පරම්පරාවේ අනුක්‍රමික වේදිකා මතුවී තිබියදීත්, දේශීය හා විදේශීය විශාරදයින් නව ක්‍රමයේ විශ්වසනීයත්වය මැනීමට සහ තීරණය කිරීමට පරිමාණයක් ලෙස සෘජු අනුක්‍රමයේ ප්‍රති results ල තවමත් භාවිතා කරයි. ගාඕ ජිං සහ වෙනත් අය. කොලරෙක්ටල් පිළිකා ඇති රෝගීන් 966 දෙනෙකු තුළ KRAS සහ BRAF ජාන විකෘති හඳුනා ගැනීමට සෘජු අනුක්‍රමණය කිරීම. සාහිත්‍යයේ වාර්තා වී ඇති විශාලතම ගෘහස්ථ නියැදිය සමඟ KRAS ජාන විකෘතිය විශ්ලේෂණය කිරීම ද මෙයයි. ලින්ග් යුන් සහ තවත් අය විශ්වාස කරන්නේ එක් එක් ජානයේ විකෘති තත්ත්වය අවබෝධ කර ගැනීම සඳහා වඩාත් direct ජු හා effective ලදායී හඳුනාගැනීමේ ක්‍රමය සෘජු අනුක්‍රමණය කිරීමේ ක්‍රමය වන අතර එමඟින් විකෘති වර්ගය පැහැදිලි කළ හැකි අතර විශේෂයෙන් නොදන්නා විකෘති හඳුනා ගැනීම සඳහා ය. මෙම ක්‍රමයේ සංවේදීතාව සාපේක්ෂව අඩු වුවද, පිළිකා සෛල පොහොසත් කිරීම සඳහා ක්ෂුද්‍ර විච්ඡේදනය වැනි ක්‍රම මගින් එය වැඩිදියුණු කළ හැකිය. අනෙකුත් දේශීය පර්යේෂණ කණ්ඩායම්වල විශාල නියැදි ප්‍රමාණ KRAS හඳුනා ගැනීම සඳහා සෘජු අනුක්‍රමණය කිරීමේ ක්‍රමය ද යොදාගෙන ඇත. කෙසේ වෙතත්, අඩු සංවේදීතාව යනු සෘජු අනුපිළිවෙලෙහි විශාලතම අවාසියයි. චීනයේ වාර්තා වූ ප්‍රති results ල දෙස බලන විට, සෘජු අනුපිළිවෙලින් විකෘති හඳුනාගැනීමේ වේගය අඩු නොවේ. ලියු ෂියාජිං සහ වෙනත් අය. සෘජු අනුක්‍රමණය හා පෙප්ටයිඩ නියුක්ලෙයික් අම්ල කලම්ප PCR (PNA-PCR) හා සසඳන විට KRAS ජාන විකෘති අවස්ථා 43 ක් direct ජු අනුක්‍රමණයෙන් අනාවරණය වී ඇති බව සොයා ගන්නා ලදී. මෙම විකෘති වලට අමතරව, P ජු අනුපිළිවෙලින් PNA-PCR ද අනාවරණය විය. වල් වර්ගයේ විකෘති XNUMX ක් සොයා ගත් අතර, PCR මගින් වල් වර්ගයේ රෝගීන් තීරණය කිරීම සඳහා යෝජනා ඉදිරිපත් කරන ලද අතර විකෘති රෝගීන් තීරණය කිරීම සඳහා සෘජු අනුක්‍රමණය කිරීමේ ක්‍රමය ද විය. කියු ටියාන් සහ වෙනත් අය. ප්‍රතිදීප්ත PCR- ප්‍රශස්ත ඔලිගොනියුක්ලියෝටයිඩ් පරීක්ෂණ ක්‍රමය සහ සෘජු අනුක්‍රමණය කිරීමේ ක්‍රමවේදය මගින් කොලරෙක්ටල් පිළිකා නිදර්ශක 131 ක් සොයා ගන්නා ලද අතර KRAS ජාන විකෘති වල ධනාත්මක අනුපාතය 41.2% (54/131) සහ 40.5% (53/131) විය. බයි ඩොන්ග්යු ද විවිධ ක්‍රම හඳුනාගැනීමේ සංවේදීතාව පිළිබඳව සාකච්ඡා කළේය. කොලරෙක්ටල් පිළිකා රෝගීන් 200 දෙනාගෙන් 63 දෙනෙකු RT-qPCR විකෘති මගින් හඳුනාගෙන ඇති අතර විකෘති හඳුනාගැනීමේ වේගය 31.5% ක් විය; විකෘති අවස්ථා 169 ක්, විකෘති හඳුනාගැනීමේ අනුපාතය 50% සෘජු අනුපිළිවෙලින් සාම්පල 29.6 ක් සාර්ථකව අනුපිළිවෙලට සකස් කරන ලදී. සෘජු අනුක්‍රමණය කිරීමේ ක්‍රමයට KRAS ජාන විකෘති තත්ත්වය නිවැරදිව, වෛෂයිකව හා නිශ්චිතව හඳුනාගත හැකි වුවද, එහි අඩුපාඩු වන ඉහළ තාක්ෂණික අවශ්‍යතා, සංකීර්ණ මෙහෙයුම් ක්‍රියා පටිපාටි, හරස් අපවිත්‍ර වීමට පහසු වීම සහ ප්‍රති results ල පිළිබඳ කාලය හා වෙහෙසකාරී අර්ථ නිරූපණය වැනි කරුණු ද ඉතා ය. පැහැදිලිය. බොහෝ විට අනුක්‍රමික උපකරණ නොමැති අතර, නිදර්ශකය පරීක්ෂා කිරීම සඳහා අනුරූප සමාගමට යැවිය යුතු අතර, එය දිගු කාලයක් ගත වන අතර අධික පිරිවැයක් දරයි, එබැවින් එයට විශාල සීමාවන් ඇත.
පයිරෝසෙන්සිං ක්‍රමය:
අනුක්‍රමික සංවේදීතාව, හඳුනාගැනීමේ පිරිවැය සහ වාර්තා කිරීමට ගතවන කාලය අනුව KRAS ජාන විකෘති හඳුනා ගැනීම සඳහා පයිරෝසෙන්සින් ක්‍රමය වඩාත් පහසු ක්‍රමයකි. මෙම ක්‍රමයේ පුනරාවර්තන හැකියාව වඩා හොඳය. ලබාගත් උපරිම සිතියමට අනුව, එක්තරා වෙබ් අඩවියක විකෘති සංඛ්‍යාතය ප්‍රමාණාත්මකව අධ්‍යයනය කිරීම සහ විවිධ අඩවි වල විකෘති සංඛ්‍යාත අතර සංසන්දනය බැලූ බැල්මට පැහැදිලි ය. මෑත වසරවලදී, ඔගිනෝ සහ වෙනත් අය, හචින්ස් සහ වෙනත් අය. මහා බඩවැලේ පිළිකා සාම්පල ඇති රෝගීන් තුළ KRAS විකෘති පරීක්ෂා කිරීම සඳහා පයිරෝසෙන්සින් තාක්ෂණය භාවිතා කර ඇත. ප්‍රති results ලවලින් පෙනී යන්නේ ඉලක්කගත ප්රතිකාර සඳහා රෝගීන් පරීක්ෂා කිරීම සඳහා පයිරෝසෙන්සින් තාක්ෂණය ප්‍රබල මෙවලමක් බවයි. පටක අණුක රෝග විනිශ්චය සඳහා පුළුල් යෙදුම් අපේක්ෂාවන් ඇත. ගෘහස්ථ විශාරදයින් හොඳ නිරවද්‍යතාවයකින් සහ විශ්වසනීයත්වයකින් යුත් මහා බඩවැලේ පිළිකා වල KRAS විකෘති සායනිකව හඳුනා ගැනීම සඳහා පයිරෝසෙන්සින් තාක්ෂණය භාවිතා කර ඇත. මෙම ක්‍රමයට වඩා හොඳ නිශ්චිතතාවයක් සහ ඉහළ සංවේදීතාවයක් ඇත. සන්ඩ්ස්ට්‍රෝම් සහ වෙනත් අය. සායනික යෙදීම්වල ඇලිලික්-විශේෂිත PCR හා පයිරෝසෙන්සෙන්ස් සමඟ සසඳන විට, මහා බඩවැලේ පිළිකා රෝගීන්ගේ KRAS විකෘති 314 ක් තුළ, පයිරෝසෙන්සිං වල නිශ්චිතතාව ඇලිලීස් වලට වඩා උසස් බව සොයා ගන්නා ලදී. PCR, සහ අඩු පිළිකා සෛල අන්තර්ගත පටක වලට හොඳ සංවේදීතාවයක් ඇත. පිළිකා සෛලවල අනුපාතය 1.25% සිට 2.5% දක්වා තනුක කරන්න. පයිරෝසෙන්සින් මගින් තවමත් විකෘති සං als ා හඳුනාගත හැකිය. නියැදියෙහි ඇති විකෘති ඇලිලීන් වල අවම අන්තර්ගතය සැන්ගර් අනුක්‍රමණයෙන් හඳුනා ගැනීමට 20% දක්වා ළඟා විය යුතු විට, එය 10% කරා ළඟා වූ විට එය එච්ආර්එම් ක්‍රමවේදය මගින් හඳුනාගත හැකි අතර, පයිරෝසෙන්සිං සඳහා විකෘති පමණක් 5% කින් හඳුනාගත හැකිය. ඇලලීස්. කොලරෙක්ටල් පිළිකා ඇති රෝගීන් 717 දෙනෙකු තුළ KRAS විකෘති හඳුනා ගැනීමට අපි පයිරෝසෙන්සිං භාවිතා කළ අතර KRAS විකෘති වල සංඛ්‍යාතය 40.9% ක් බව සොයා ගන්නා ලදී. කෝඩෝන 12 හි විකෘති අනුපාතය 30.1% ක් ද, කෝඩෝන 13 හි විකෘති අනුපාතය 9.8% ක් ද, කෝඩෝන 61 හි විකෘති අනුපාතය 1.0% ක් ද විය. පරීක්‍ෂණයට පෙර අතින් ක්ෂුද්‍ර විභේදනය මගින් ඉහළ පටක අන්තර්ගතයක් සහිත පටක අපි පොහොසත් කළෙමු. මෙම ක්‍රමයට හොඳ සංවේදීතාවයක් සහ නිශ්චිතතාවයක් ඇති අතර සායනික භාවිතයේදී එය වර්ධනය කිරීම පහසුය. පයිරෝසෙන්සින් කිරීමේ අවාසිය නම් හඳුනා ගැනීමේ අධික පිරිවැය වන අතර සාම්පල අනුක්‍රමණය කිරීම සඳහා තනි පටු ඩීඑන්ඒ සකස් කිරීමේ ක්‍රියාවලිය අවුල් සහගතය. අනාගතයේ දී, පයිරෝසෙන්සිං ද්විත්ව පටු PCR නිෂ්පාදන සෘජුවම අනාවරණය කර ගැනීම සඳහා තාක්ෂණය දියුණු කිරීම සඳහා කැප කළ හැකි අතර එමඟින් මෙහෙයුම බෙහෙවින් සරල වනු ඇත. සායනික පරීක්ෂණ පුළුල් ලෙස ප්රවර්ධනය කිරීම සඳහා අනුක්‍රමණය කිරීමේ පිරිවැය effectively ලදායී ලෙස අඩු කරන්න.
3. ARMS ක්‍රමය:
මෙම තාක්ෂණය වල්-වර්ගය සහ විකෘති ජාන අතර වෙනස හඳුනා ගැනීමට ප්‍රයිමර් භාවිතා කරයි
ich 1980 දශකය තරම් reported ත අතීතයේ දී වාර්තා විය. මෙම ක්‍රමයේ ඇති ලොකුම වාසිය නම් එය 1.0% දක්වා සංවේදීතාවයක් ඇති අතර සාම්පලවල විකෘති ජාන 1.0% තරම් අඩු අගයක් හඳුනාගත හැකිය. සැලසුමේදී, ඉලක්කගත නිෂ්පාදනයේ දිග විශාල වශයෙන් කෙටි කළ හැකි අතර, නිවැරදිව හඳුනාගැනීමේ ප්‍රති results ල ලබා ගත නොහැකි වන්නේ පැරෆින්-කාවැද්දූ පටක නිදර්ශකයෙන් ලබාගත් ඩීඑන්ඒ බොහෝමයක් කැබලි වී ඇති බැවිනි. මෙම තාක්ෂණය තථ්‍ය කාලීන PCR වේදිකාව ඒකාබද්ධ කර විස්තාරණය කිරීමේදී සංවෘත නල ක්‍රියාකාරිත්වය සාක්ෂාත් කර ගනී. මෙහෙයුම සරල වන අතර නිෂ්පාදනයේ පශ්චාත් සැකසුම් අවශ්‍ය නොවන අතර එමඟින් විශාලනය කරන ලද නිෂ්පාදනයේ දූෂණය වළක්වා ගත හැකිය. වර්තමානයේදී, ගෝනුස්සන්ගේ ගවේෂණය සහ විස්තාරණ වාරණ විකෘති පද්ධතිය ඒකාබද්ධ කරන ගෝනුස්සන්-ආර්එම්එස් ක්‍රමය ලෝකයේ බහුලව භාවිතා වේ. තාක්ෂණයන් දෙකේ සංයෝජනය මඟින් දෙපාර්ශවයේම සංවේදීතාව සහ නිශ්චිතතාව උපරිම කළ හැකිය. ගාඕ ජි සහ වෙනත් අය. කොලරෙක්ටල් පිළිකා ඇති රෝගීන් 167 දෙනෙකුගේ KRAS ජාන විකෘති තත්ත්වය හඳුනා ගැනීමට මෙම ක්‍රමය භාවිතා කළ අතර මෙම ක්‍රමය විශ්වාසදායක හා නිවැරදි බව යෝජනා කරයි. වැන්ග් හුයි සහ වෙනත් අය. ෆෝමල්ඩිහයිඩ්-ස්ථාවර සහ පැරෆින්-කාවැද්දූ පටක 151 ක KRAS විකෘති හඳුනා ගැනීමට ARMS භාවිතා කරයි. එක්සත් ජනපදයේ, KRAS හි සායනික පරීක්ෂණ සඳහා FDA විසින් අනුමත කරන ලද COBAS කට්ටලය (Roche) සහ යුරෝපීය සංගමය විසින් Vitro Diagnostics (CE-IVD) විසින් සහතික කරන ලද Therascreen RGQ කට්ටලය (Qiagen) සියල්ලම ARMS මූලධර්මය භාවිතා කරයි. පොදු ක්‍රම අතර, ARMS ක්‍රමය වඩාත් සංවේදී වන අතර පිරිවැය සාපේක්ෂව සාධාරණ ය. එබැවින්, දේශීය හා විදේශීය KRAS ජාන සායනිකව අනාවරණය කර ගැනීමෙන් විශාල කොටසක් ARMS ක්‍රමය භාවිතා කරයි, නමුත් මෙම ක්‍රමය PCR තාක්ෂණය මත පදනම් වී ඇති හෙයින්, එහි අඩුපාඩුව වන්නේ එය හඳුනාගත හැක්කේ දන්නා අඩවි විකෘති පමණි.
4. තත්‍ය කාලීන ප්‍රතිදීප්ත ප්‍රමාණාත්මක PCR ක්‍රමය:
It is a PCR-based detection method to determine the mutation by Ct value. It has the advantages of strong specificity, high sensitivity, accurate quantification, easy operation, and fully closed reaction. Many experimental groups have adopted this method for the detection of KRAS mutations in colorectal cancer. Compared with the direct sequencing method, quantitative PCR occupies a greater advantage in sensitivity. Most scholars comparing the two methods believe that quantitative PCR is more sensitive. Liu Wei et al. Used two methods to make a detailed analysis of the detection results of 280 cases of colorectal cancer KRAS gene mutations, 94 cases of KRAS gene sequencing mutations, the positive rate was 33.57% (94/280), of which, real-time fluorescence quantitative PCR was positive 91 cases had a sensitivity of 96.8% (91/94). Of the 186 gene sequencing wild-type cases, 184 were negative by real-time quantitative PCR, with a specificity of 98.9% (184/186). The coincidence rate between real-time fluorescence quantitative PCR method and direct gene sequencing method was 98.2%. In the two detection methods, the positive and negative coincidence rates of each mutation site were above 90%, and the coincidence rate of four sites reached 100%. The detection results of the two methods were highly consistent, indicating fluorescent quantitative PCR It is a more reliable method for mutation detection. However, PCR-based methods need to design primers and probes based on known mutation types, so all possible mutations cannot be detected, and only specific sites can be detected. If a certain site is not included in the detection range of the kit, even if there is actually a mutation, the kit result is still negative. In addition, although the sensitivity of quantitative PCR is high, whether there are false positives still needs to be verified by DNA sequencing technology, or retrospective and prospective clinical experiments with large sample sizes to confirm the correlation between KRAS mutation status and the efficacy of targeted drugs . Therefore, the high sensitivity of mutation detection should not be pursued blindly, while the specificity and accuracy of detection should be ignored. Under different laboratory conditions, the optimal method for mutation detection in specimens may also be different. For specimens with a higher proportion of mutations, Sanger sequencing method has a higher accuracy in detecting gene mutations, while for specimens with a lower proportion of mutations, Sanger sequencing method False negatives may occur, and the detection method using fluorescent PCR as the technical platform can be characterized by high sensitivity.
5. මානව සම්පත් කළමනාකරණ ක්‍රමය:
එය මෑත වසරවල බහුලව භාවිතා වන ජාන හඳුනාගැනීමේ ක්‍රමයකි. දූෂණය වළක්වා ගැනීම සඳහා සරල, වේගවත්, සංවේදී හා තනි නළයක වාසි ඇත. සායනික පරීක්ෂණ වලදී එහි භාවිතයේ ශක්‍යතාව ගවේෂණය කිරීම සඳහා, ලියු ලිකින් සහ තවත් අය කොලරෙක්ටල් පිළිකා ඇති රෝගීන් 64 දෙනෙකු තුළ KRAS ජාන විකෘති හඳුනා ගැනීමට HRM ක්‍රමය භාවිතා කළ අතර පසුව ප්‍රති .ල සත්‍යාපනය සඳහා සෘජු අනුක්‍රමණය භාවිතා කළහ. එච්ආර්එම් සහ සෘජු අනුක්‍රමණය කිරීමේ ප්‍රති results ල අනුකූල බව සොයාගෙන ඇත. සෘජු අනුක්‍රමණය සමඟ සසඳන විට, එච්ආර්එම් විසින් KRAS ජාන විකෘති හඳුනා ගැනීම සරල හා නිවැරදි ය, එය සායනික පරීක්ෂණ සඳහා සුදුසු විශ්වසනීය ක්‍රමයක් බව යෝජනා කරයි. චෙන් ෂිහෝං සහ වෙනත් අය. ඒවායේ සංවේදීතාව තක්සේරු කිරීම සඳහා KRAS විකෘති ප්ලාස්මිඩ්වල විවිධ අනුපාතයන් සහිත මිශ්‍ර සාම්පල මාලාවක් පරීක්ෂා කිරීමට HRM ක්‍රමය භාවිතා කරන ලදී. මිශ්‍ර සාම්පලවල ප්ලාස්මිඩ් විකෘති අනුපාතය 10% ක් වන අතර සංවේදීතාව 10% දක්වා ළඟා විය. පසුව, කොලරෙක්ටල් පිළිකා පටක සාම්පල 60 ක KRAS ජාන විකෘති හඳුනා ගැනීමට මෙම ක්‍රමය භාවිතා කරන ලදී. සෘජු අනුක්‍රමණය කිරීමේ ක්‍රමයට සාපේක්ෂව, එච්ආර්එම් ක්‍රමයේ සංවේදීතාව 100% ක් වූ අතර නිශ්චිතතාව 96% (43/45) විය. එච්ආර්එම් ක්‍රමයේ අවාසිය නම් නිශ්චිත විකෘති වර්ගය නිවැරදිව සැපයිය නොහැකි අතර කුමන කෝඩෝනය විකෘති වී ඇත්ද යන්නයි. ද්‍රවා වක්‍රයෙහි අසාමාන්‍යතාවයක් දක්නට ලැබේ නම්, විකෘති වර්ගය තීරණය කිරීම සඳහා අනුක්‍රමික ක්‍රමයක් අවශ්‍ය වේ. ප්‍රතිදීප්ත PCR, ARMS සහ HRM ක්‍රම සංසන්දනය කිරීම සඳහා හාර්ලි පර්යේෂණ කණ්ඩායම විසින් කොලරෙක්ටල් පිළිකා පටක 156 ක් භාවිතා කරන ලදී. ප්‍රති results ල වලට අනුව මෙම ක්‍රම තුන සායනික පරීක්ෂණ සඳහා සුදුසු වුවද මානව සම්පත් කළමනාකරණයේ විශ්වසනීයත්වය අනෙක් ක්‍රම දෙක තරම් හොඳ නැත.
6. වෙනත් ක්‍රම:
ඉහත සඳහන් ක්‍රම වලට අමතරව, PCR-SSCP, ඉහළ කාර්යසාධනයක් සහිත ද්‍රව වර්ණදේව, ප්‍රතිදීප්ත PCR- ප්‍රශස්ත ඔලිගොනියුක්ලියෝටයිඩ් පරීක්ෂණ ක්‍රමය, කැදැලි PCR සහ ARMS සංයෝජන ක්‍රමය, COLD-PCR වැනි වෙනත් හඳුනාගැනීමේ ක්‍රමවලට ඒවායේ වාසි සහ අවාසි ඇත. ක්‍රමය, ආදිය. ඉහළ කාර්යසාධනයක් සහිත ද්‍රව වර්ණදේහයට ප්‍රබල නිශ්චිතතාවයක් ඇත, නමුත් සාම්පල සඳහා ඇති ඉල්ලුම විශාල ය; PCR-SSCP පිරිවැය අඩු සහ ආර්ථිකමය වේ, නමුත් මෙහෙයුම සංකීර්ණ ය; ප්‍රතිදීප්ත PCR මත පදනම් වූ විකෘති හඳුනාගැනීමේ තාක්ෂණයට ශක්තිමත් නිශ්චිතතාවයක්, ඉහළ සංවේදීතාවයක් සහ නිවැරදි ප්‍රමාණාත්මක, පහසු ක්‍රියාකාරිත්වය, සම්පූර්ණයෙන් අවහිර කළ ප්‍රතික්‍රියා සහ වෙනත් වාසි ඇත, නමුත් සියල්ලන්ටම දන්නා විකෘති වර්ගයට අනුව ප්‍රයිමර් සහ ප්‍රොබ්ස් සැලසුම් කළ යුතුය, එබැවින් විශේෂිත අඩවි පමණක් විය හැකිය අනාවරණය වී ඇති අතර හැකි සියලුම විකෘති හඳුනාගත නොහැක.
3. සාරාංශය
සාරාංශයක් ලෙස, විවිධ රසායනාගාරවල විකෘති ස්ථාන සහ හඳුනාගැනීමේ ක්‍රම ඒකාකාරී නොවන බැවින්, විශ්ලේෂණය කරන ලද පිළිකා නිදර්ශකවල ප්‍රමාණය සහ ඩීඑන්ඒ නිස්සාරණය කිරීමේ ගුණාත්මකභාවය ද අසමාන වන අතර, එහි ප්‍රති ing ලයක් ලෙස විද්‍යාගාර අතර විශාල හෝ කුඩා පර්යේෂණාත්මක ප්‍රති results ල පවතී. KRAS හි ජාන විකෘති හඳුනාගැනීම විවිධ රටවල සායනික හඳුනාගැනීමේ ගැටලුවක් බවට පත්ව ඇත. වර්තමානයේ, KRAS ජානයේ විකෘති හඳුනා ගැනීමට බොහෝ ක්‍රම තිබේ. ඉහළ සිට පහළට සංවේදීතාව වන්නේ ආර්එම්එස්, පයිරෝසෙන්සිං, එච්ආර්එම්, තත්‍ය කාලීන ප්‍රමාණාත්මක පීසීආර් සහ සෘජු අනුක්‍රමණයයි. සායනික යථාර්ථයේ සිට, අඩු සංවේදීතාව සායනික ප්රතිකාර සඳහා හිතකර නොවේ, නමුත් ඕනෑවට වඩා සංවේදී ක්‍රම මඟින් හඳුනාගැනීමේ නිශ්චිතතාව අඩුවීමට හේතු වන අතර අනවශ්‍ය ව්‍යාජ ධනාත්මක ප්‍රති results ල ඇති විය හැකි අතර රෝගියාගේ පසුකාලීන ation ෂධ ක්‍රමයට එය බලපායි. ඉහත කරුණු සලකා බැලීමේදී, FDA විසින් අනුමත කරන ලද ක්‍රමවේදය සමඟ ඒකාබද්ධව, ARMS ක්‍රමය නිර්දේශ කෙරේ. ඇත්ත වශයෙන්ම, වෙළඳපල දෘෂ්ටි කෝණයකින්, අණුක රෝග විනිශ්චය මා අවධාරණය නොකළ යුතුය
thods, නමුත් අවසාන නිවැරදි ප්රතිඵල කෙරෙහි අවධානය යොමු කරන්න. විවිධ රසායනාගාරවලට සැබෑ තත්ත්වය අනුව සුදුසු පරීක්ෂණ ක්‍රම අනුගමනය කළ හැකි නමුත් ඒවාට හොඳ ක්‍රියාකරු සුදුසුකම් සහ අභ්‍යන්තර තත්ත්ව පාලන පද්ධති තිබේ නම් පමණි. වර්තමාන දේශීය රසායනාගාර පාරිසරික තත්ත්වයන් යටතේ, විශ්වසනීය රසායනාගාර පරීක්ෂණ තත්ත්ව සහතික කිරීම සඳහා සම්මත PCR රසායනාගාරයක පරීක්ෂණ සිදු කිරීම සහ දේශීය හා ජාත්‍යන්තර අන්තර් කාමර තත්ත්ව පාලන ක්‍රියාකාරකම්වලට සහභාගී වීම අවශ්‍ය වේ. ප්‍රමිතිගත කළමණාකරණය යනු නියත ප්රතිඵල සහතික කිරීම සඳහා අවශ්‍ය කොන්දේසියකි. චීනයේ, KRAS ජානයේ සායනික පරීක්ෂණ ඒකාබද්ධ කිරීම සහ ප්‍රමිතිකරණය කිරීම සහ විවිධ අවශ්‍යතා අනුව ප්‍රමිතිගත සහ ප්‍රමිතිගත පරීක්ෂණ වැඩසටහනක් ජනනය කිරීම හදිසි අවශ්‍යතාවයක් ඇති අතර, මෙම වැඩසටහන BRAF, PIK23450_3CA, EGFR සහ හඳුනාගැනීම දක්වා ව්‍යාප්ත කළ හැකිය. සායනික අණුක ව්යාධිවේදය පරීක්ෂා කිරීම ප්රවර්ධනය කිරීම සඳහා වෙනත් ජාන.
