ຢາເປົ້າໝາຍເຊັ່ນ cetuximab ແລະ panitumumab ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງໃນຄລີນິກເປັນຢາປິ່ນປົວທີ່ມີປະສິດຕິຜົນສໍາລັບມະເຮັງລໍາໄສ້ໃຫຍ່. ຂໍ້ມູນທາງຄລີນິກສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າຄົນເຈັບທີ່ມີການກາຍພັນຂອງ KRAS ບໍ່ມີຜົນກະທົບອັນໃຫຍ່ຫຼວງຕໍ່ຢາຕ້ານເຊື້ອ monoclonal ນີ້, ແລະພຽງແຕ່ຄົນເຈັບປະເພດທໍາມະຊາດສາມາດໄດ້ຮັບຜົນປະໂຫຍດຈາກມັນ. ດັ່ງນັ້ນ, ສະຖານະພາບການກາຍພັນຂອງ KRAS ໄດ້ຖືກຖືວ່າເປັນເຄື່ອງຫມາຍການປິ່ນປົວທີ່ສໍາຄັນ, ເຊິ່ງມີຄວາມສໍາພັນທີ່ເຂັ້ມແຂງກັບການຄາດຄະເນແລະຜົນກະທົບການປິ່ນປົວຂອງມະເຮັງລໍາໄສ້ໃຫຍ່. 2009 National Cancer Comprehensive Network (NCCN) ຄໍາແນະນໍາດ້ານການປະຕິບັດທາງດ້ານການຊ່ວຍດ້ານການປິ່ນປົວມະເຮັງລໍາໄສ້ໃຫຍ່ກໍານົດວ່າຄົນເຈັບທຸກຄົນທີ່ເປັນມະເຮັງກະເພາະລໍາໃສ້ metastatic ຕ້ອງກວດຫາສະຖານະພາບການກາຍພັນຂອງ KRAS, ແລະພຽງແຕ່ປະເພດທໍາມະຊາດ KRAS ໄດ້ຖືກແນະນໍາໃຫ້ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍເປົ້າຫມາຍ EGFR. ໃນປີດຽວກັນ, ສະມາຄົມໂຣກ Oncology ອາເມລິກາ (ASCO) ຍັງໄດ້ອອກຄໍາແນະນໍາການປິ່ນປົວທາງດ້ານຄລີນິກດຽວກັນເປັນເຄື່ອງຫມາຍໂມເລກຸນສໍາລັບການປິ່ນປົວເປົ້າຫມາຍຂອງເນື້ອງອກ, ເຊິ່ງສະແດງໃຫ້ເຫັນເຖິງຄວາມສໍາຄັນຂອງການຊີ້ນໍາຂອງມັນ. ໃນປັດຈຸບັນ, ການທົດສອບພັນທຸກໍາ KRAS ໄດ້ຖືກປະຕິບັດຢ່າງກວ້າງຂວາງທາງດ້ານຄລີນິກ. ພວກເຮົາສ່ວນໃຫຍ່ປະເມີນວິທີການກວດຫາການກາຍພັນຂອງ KRAS ພາຍໃນປະເທດເພື່ອອ້າງອີງໃນການຄັດເລືອກທາງຄລີນິກ.
1. ອັດຕາບວກຂອງການກາຍພັນຂອງ KRAS gene ໃນມະເຮັງລໍາໄສ້ໃຫຍ່
ໃນມະເຮັງລໍາໃສ້, ອັດຕາການກາຍພັນຂອງ KRAS gene ແມ່ນສູງເຖິງ 35% ຫາ 45%, ແລະສະຖານທີ່ການກາຍພັນທີ່ມີຄວາມສ່ຽງສູງແມ່ນ codons 12 ແລະ 13 ໃນ exon 2, ແລະຍັງມີອັນທີ່ຫາຍາກເຊັ່ນ: 61 ແລະ 146. ການກາຍພັນ. ເວັບໄຊ. ມີຫຼາຍວິທີການກວດຫາການກາຍພັນຂອງ KRAS, ລວມທັງການຈັດລໍາດັບໂດຍກົງ, ການວິເຄາະເສັ້ນໂຄ້ງ melting ຄວາມລະອຽດສູງ (HRM), pyrosequencing, quantitative PCR, mutation amplification block system (amplinc atio)nrefractorymutation system (ARMS), restriction fragment length polymorphism (RFLP), polymerase chain reaction-single-strand conformation polymorphism analysis (PCR-singlestrand confomation polymorphism (PCR-SSCP), co-amplification at low denaturation temperatur PCR (COLD-PCR) and high-performance liquid chromatography analysis, etc.
2. ການປະເມີນວິທີການກວດຫາການກາຍພັນຂອງ KRAS
1. ວິທີການຈັດລໍາດັບໂດຍກົງ: ມັນເປັນວິທີຄລາສສິກທີ່ສຸດສໍາລັບການກວດສອບການກາຍພັນຂອງ KRAS, ແລະມັນຍັງເປັນມາດຕະຖານຄໍາສໍາລັບການກວດສອບການກາຍພັນຂອງ gene. ວິທີການຈັດລໍາດັບໂດຍກົງໂດຍອີງໃສ່ຫຼັກການຂອງລໍາດັບ dideoxy ສາມາດສະແດງໃຫ້ເຫັນເຖິງການປ່ຽນແປງຂອງລໍາດັບ gene ໃນຮູບແບບຂອງແຜນທີ່ພື້ນຖານ. ປະເພດການກວດຫາແມ່ນມີຄວາມສົມບູນແບບກວ່າ, ແລະມັນຍັງເປັນວິທີການກວດຫາການກາຍພັນທີ່ນຳໃຊ້ໃນໄວທີ່ສຸດ. ເຖິງວ່າຈະມີການປະກົດຕົວຂອງເວທີການຈັດລໍາດັບຮຸ່ນໃຫມ່, ນັກວິຊາການພາຍໃນແລະຕ່າງປະເທດຍັງໃຊ້ຜົນໄດ້ຮັບຂອງລໍາດັບໂດຍກົງເປັນຂະຫນາດເພື່ອວັດແທກແລະກໍານົດຄວາມຫນ້າເຊື່ອຖືຂອງວິທີການໃຫມ່. Gao Jing et al. ນຳໃຊ້ການຈັດລຳດັບໂດຍກົງເຂົ້າໃນການກວດຫາການກາຍພັນຂອງ KRAS ແລະ BRAF ໃນຄົນເຈັບ 966 ຄົນທີ່ເປັນມະເຮັງລຳໄສ້ໃຫຍ່. ນີ້ຍັງເປັນການວິເຄາະການກາຍພັນຂອງເຊື້ອສາຍ KRAS ກັບຕົວຢ່າງພາຍໃນທີ່ໃຫຍ່ທີ່ສຸດທີ່ລາຍງານໃນວັນນະຄະດີ. Ling Yun ແລະຜູ້ອື່ນໆເຊື່ອວ່າວິທີການຈັດລໍາດັບໂດຍກົງແມ່ນວິທີການກວດຫາໂດຍກົງແລະມີປະສິດທິພາບທີ່ສຸດສໍາລັບການເຂົ້າໃຈສະຖານະການກາຍພັນຂອງແຕ່ລະ gene, ເຊິ່ງສາມາດຊີ້ແຈງປະເພດຂອງການກາຍພັນ, ໂດຍສະເພາະສໍາລັບການກວດພົບການກາຍພັນທີ່ບໍ່ຮູ້ຈັກ. ເຖິງແມ່ນວ່າຄວາມອ່ອນໄຫວຂອງວິທີການນີ້ແມ່ນຂ້ອນຂ້າງຕ່ໍາ, ມັນສາມາດໄດ້ຮັບການປັບປຸງໂດຍວິທີການເຊັ່ນ: microdissection ເພື່ອເສີມສ້າງຈຸລັງ tumor. ວິທີການຈັດລໍາດັບໂດຍກົງຍັງໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ກັບການກວດສອບ KRAS ຂອງຂະຫນາດຕົວຢ່າງທີ່ໃຫຍ່ກວ່າໃນກຸ່ມຄົ້ນຄ້ວາພາຍໃນປະເທດອື່ນໆ. ຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ຄວາມອ່ອນໄຫວຕ່ໍາແມ່ນຂໍ້ເສຍທີ່ໃຫຍ່ທີ່ສຸດຂອງການຈັດລໍາດັບໂດຍກົງ. ການຕັດສິນຈາກຜົນໄດ້ຮັບທີ່ລາຍງານໃນປະເທດຈີນ, ອັດຕາການກວດພົບການກາຍພັນໂດຍການຈັດລໍາດັບໂດຍກົງແມ່ນບໍ່ຕໍ່າ. Liu Xiaojing et al. ປຽບທຽບການຈັດລໍາດັບໂດຍກົງແລະ peptide nucleic acid clamp PCR (PNA-PCR) ແລະພົບວ່າ 43 ກໍລະນີຂອງການກາຍພັນຂອງ gene KRAS ຖືກກວດພົບໂດຍການຈັດລໍາດັບໂດຍກົງ. ນອກເຫນືອຈາກການກາຍພັນເຫຼົ່ານີ້, PNA-PCR ຍັງຖືກກວດພົບໂດຍການລໍາດັບໂດຍກົງ. 10 ການກາຍພັນໄດ້ຖືກພົບເຫັນຢູ່ໃນປະເພດປ່າ, ແລະຄໍາແນະນໍາໄດ້ຖືກເຮັດເພື່ອກໍານົດຄົນເຈັບປະເພດປ່າໂດຍ PCR ແລະວິທີການຈັດລໍາດັບໂດຍກົງເພື່ອກໍານົດຄົນເຈັບ mutant. Qiu Tian et al. ກວດພົບ 131 ຕົວຢ່າງມະເຮັງລໍາໄສ້ໂດຍວິທີ fluorescent PCR-optimized oligonucleotide probe ແລະວິທີການຈັດລໍາດັບໂດຍກົງ, ແລະອັດຕາບວກຂອງການກາຍພັນຂອງ KRAS ແມ່ນ 41.2% (54/131) ແລະ 40.5% (53/131). Bai Dongyu ຍັງໄດ້ປຶກສາຫາລືຄວາມອ່ອນໄຫວຂອງການຊອກຫາຂອງວິທີການທີ່ແຕກຕ່າງກັນ. ໃນຈໍານວນ 200 ຄົນເປັນມະເຮັງລໍາໃສ້, 63 ໄດ້ຖືກກວດພົບໂດຍການກາຍພັນຂອງ RT-qPCR, ແລະອັດຕາການກວດພົບການກາຍພັນແມ່ນ 31.5%; ຈໍານວນ 169 ຕົວຢ່າງ ໄດ້ຖືກນໍາໄປປະຕິບັດຢ່າງສໍາເລັດຜົນ ໂດຍການຈັດລໍາດັບໂດຍກົງ 50 ກໍລະນີຂອງການກາຍພັນ, ອັດຕາການກວດພົບການກາຍພັນ 29.6%. ເຖິງແມ່ນວ່າວິທີການຈັດລໍາດັບໂດຍກົງສາມາດກວດພົບໄດ້ຢ່າງຖືກຕ້ອງ, ຈຸດປະສົງແລະສະເພາະໃນການກວດສອບສະຖານະພາບການກາຍພັນຂອງເຊື້ອສາຍ KRAS, ແຕ່ຂໍ້ບົກຜ່ອງຂອງມັນເຊັ່ນ: ຄວາມຕ້ອງການດ້ານວິຊາການສູງ, ຂັ້ນຕອນການດໍາເນີນງານທີ່ສັບສົນ, ງ່າຍທີ່ຈະເຮັດໃຫ້ເກີດການປົນເປື້ອນຂ້າມ, ແລະການຕີຄວາມຫມາຍຜົນໄດ້ຮັບທີ່ໃຊ້ເວລາຫຼາຍ. ຈະແຈ້ງ. ເລື້ອຍໆບໍ່ມີອຸປະກອນການຈັດລໍາດັບ, ແລະຕົວຢ່າງຕ້ອງຖືກສົ່ງໄປຫາບໍລິສັດທີ່ສອດຄ້ອງກັນເພື່ອທົດສອບ, ເຊິ່ງໃຊ້ເວລາດົນແລະມີຄ່າໃຊ້ຈ່າຍສູງ, ດັ່ງນັ້ນມັນມີຂໍ້ຈໍາກັດຫຼາຍ.
ວິທີການ Pyrosequencing:
ວິທີການ Pyrosequencing ຍັງເປັນວິທີທີ່ສະດວກກວ່າສໍາລັບການກວດສອບການກາຍພັນຂອງ KRAS ໃນແງ່ຂອງຄວາມອ່ອນໄຫວຕາມລໍາດັບ, ຄ່າໃຊ້ຈ່າຍໃນການກວດສອບແລະເວລາທີ່ຈະລາຍງານ. ການເຮັດເລື້ມຄືນຂອງວິທີການນີ້ແມ່ນດີກວ່າ. ອີງຕາມແຜນທີ່ສູງສຸດທີ່ໄດ້ຮັບ, ການສຶກສາດ້ານປະລິມານຂອງຄວາມຖີ່ຂອງການກາຍພັນຂອງສະຖານທີ່ສະເພາະໃດຫນຶ່ງແລະການປຽບທຽບລະຫວ່າງຄວາມຖີ່ຂອງການກາຍພັນຂອງສະຖານທີ່ທີ່ແຕກຕ່າງກັນແມ່ນຈະແຈ້ງໃນ glance. ໃນຊຸມປີມໍ່ໆມານີ້, Ogino et al., Hutchins et al. ໄດ້ໃຊ້ເຕັກໂນໂລຊີ pyrosequencing ເພື່ອທົດສອບການກາຍພັນຂອງ KRAS ໃນຄົນເຈັບທີ່ມີຕົວຢ່າງຂະຫນາດໃຫຍ່ຂອງມະເຮັງລໍາໄສ້ໃຫຍ່. ຜົນໄດ້ຮັບຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າເທກໂນໂລຍີ pyrosequencing ເປັນເຄື່ອງມືທີ່ມີປະສິດທິພາບໃນການກວດສອບຄົນເຈັບສໍາລັບການປິ່ນປົວເປົ້າຫມາຍ. ການວິນິດໄສໂມເລກຸນ tumor ມີຄວາມສົດໃສດ້ານການນໍາໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງ. ນັກວິຊາການພາຍໃນປະເທດຍັງໄດ້ນໍາໃຊ້ເທກໂນໂລຍີ pyrosequencing ເພື່ອກວດຫາການກາຍພັນຂອງ KRAS ໃນມະເຮັງລໍາໄສ້, ດ້ວຍຄວາມຖືກຕ້ອງແລະຄວາມຫນ້າເຊື່ອຖືທີ່ດີ. ວິທີການນີ້ມີຄວາມສະເພາະທີ່ດີກວ່າແລະຄວາມອ່ອນໄຫວສູງກວ່າ. SundstrÖm et al. ເມື່ອປຽບທຽບ PCR ສະເພາະຂອງ allelic ແລະ pyrosequencing ໃນຄໍາຮ້ອງສະຫມັກທາງດ້ານການຊ່ວຍແລະພົບວ່າໃນ 314 ກໍລະນີຂອງການກາຍພັນຂອງ KRAS ໃນຄົນເຈັບມະເຮັງລໍາໃສ້, ສະເພາະຂອງ pyrosequencing ແມ່ນດີກວ່າຂອງ alleles. PCR, ແລະມີຄວາມອ່ອນໄຫວທີ່ດີຕໍ່ເນື້ອເຍື່ອທີ່ມີເນື້ອໃນຈຸລັງ tumor ຕ່ໍາ. ເຈືອຈາງອັດຕາສ່ວນຂອງຈຸລັງ tumor 1.25% ຫາ 2.5%. Pyrosequencing ຍັງສາມາດກວດພົບສັນຍານການກາຍພັນໄດ້. ໃນເວລາທີ່ເນື້ອໃນຕໍາ່ສຸດທີ່ຂອງ alleles mutant ໃນຕົວຢ່າງຈໍາເປັນຕ້ອງໄດ້ບັນລຸ 20% ທີ່ຈະກວດພົບໂດຍລໍາດັບ Sanger, ມັນສາມາດກວດພົບໄດ້ໂດຍວິທີການ HRM ເມື່ອມັນບັນລຸ 10%, ແລະສໍາລັບ pyrosequencing ການກາຍພັນສາມາດກວດພົບໄດ້ 5%. Alleles. ພວກເຮົາໃຊ້ pyrosequencing ເພື່ອກວດຫາການກາຍພັນຂອງ KRAS ໃນຄົນເຈັບ 717 ຄົນທີ່ເປັນມະເຮັງລຳໄສ້ໃຫຍ່ ແລະພົບວ່າຄວາມຖີ່ຂອງການກາຍພັນຂອງ KRAS ແມ່ນ 40.9%. ອັດຕາການກາຍພັນຂອງ codon 12 ແມ່ນ 30.1%, ອັດຕາການກາຍພັນຂອງ codon 13 ແມ່ນ 9.8%, ແລະອັດຕາການກາຍພັນຂອງ codon 61 ແມ່ນ 1.0%. ພວກເຮົາໄດ້ເສີມສ້າງເນື້ອເຍື່ອທີ່ມີເນື້ອງອກທີ່ສູງຂຶ້ນໂດຍການຜ່າຕັດດ້ວຍມືກ່ອນການທົດສອບ, ເຮັດໃຫ້ຜົນໄດ້ຮັບທີ່ເຊື່ອຖືໄດ້ຫຼາຍຂຶ້ນ. ວິທີການດັ່ງກ່າວມີຄວາມອ່ອນໄຫວທີ່ດີແລະສະເພາະ, ແລະງ່າຍຕໍ່ການພັດທະນາໃນການປະຕິບັດທາງດ້ານການຊ່ວຍ. ຂໍ້ເສຍຂອງ pyrosequencing ແມ່ນຄ່າໃຊ້ຈ່າຍສູງຂອງການກວດຫາ, ແລະຂະບວນການຂອງການກະກຽມ DNA ສາຍດຽວສໍາລັບການ sequencing ຕົວຢ່າງແມ່ນມີຄວາມຫຍຸ້ງຍາກ. ໃນອະນາຄົດ, pyrosequencing ສາມາດອຸທິດໃຫ້ແກ່ການພັດທະນາເຕັກໂນໂລຢີສໍາລັບການກວດພົບໂດຍກົງຂອງຜະລິດຕະພັນ PCR ຄູ່, ເຊິ່ງຈະເຮັດໃຫ້ການດໍາເນີນງານງ່າຍດາຍຫຼາຍ. ແລະປະສິດທິຜົນຫຼຸດຜ່ອນຄ່າໃຊ້ຈ່າຍໃນການຈັດລໍາດັບເພື່ອບັນລຸການສົ່ງເສີມທີ່ສົມບູນແບບຂອງການທົດສອບທາງດ້ານການຊ່ວຍ.
3. ວິທີການ ARMS:
ເທກໂນໂລຍີນີ້ໃຊ້ primers ເພື່ອຈໍາແນກລະຫວ່າງ genes ທໍາມະຊາດແລະ mutant, wh
ich ໄດ້ຖືກລາຍງານໃນຕົ້ນປີ 1980. ປະໂຫຍດທີ່ໃຫຍ່ທີ່ສຸດຂອງວິທີການນີ້ແມ່ນວ່າມັນມີຄວາມອ່ອນໄຫວເຖິງ 1.0% ແລະສາມາດກວດພົບເຊື້ອພັນທຸກໍາໃນຕົວຢ່າງຕໍ່າເຖິງ 1.0%. ໃນການອອກແບບ, ຄວາມຍາວຂອງຜະລິດຕະພັນເປົ້າຫມາຍສາມາດສັ້ນລົງໃນຂອບເຂດສູງສຸດ, ແລະບັນຫາທີ່ຜົນໄດ້ຮັບການກວດສອບຄວາມຖືກຕ້ອງບໍ່ສາມາດໄດ້ຮັບເພາະວ່າ DNA ສ່ວນໃຫຍ່ທີ່ສະກັດຈາກຕົວຢ່າງເນື້ອເຍື່ອທີ່ຝັງຢູ່ໃນ paraffin ແມ່ນແຕກແຍກ. ເທກໂນໂລຍີນີ້ລວມເອົາແພລະຕະຟອມ PCR ໃນເວລາຈິງເພື່ອບັນລຸການດໍາເນີນງານທໍ່ປິດໃນລະຫວ່າງການຂະຫຍາຍ. ການດໍາເນີນງານແມ່ນງ່າຍດາຍແລະບໍ່ຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີການປຸງແຕ່ງຫຼັງຈາກຜະລິດຕະພັນ, ເຊິ່ງສາມາດຫຼີກເວັ້ນການປົນເປື້ອນຂອງຜະລິດຕະພັນຂະຫຍາຍໃຫຍ່ຂື້ນໃນຂອບເຂດສູງສຸດ. ໃນປັດຈຸບັນ, ວິທີການ scorpion-ARMS ສົມທົບການ probe scorpion ແລະລະບົບການກາຍພັນຂອງຕັນຂະຫຍາຍແມ່ນຖືກນໍາໃຊ້ທົ່ວໄປໃນໂລກ. ການປະສົມປະສານຂອງທັງສອງເຕັກໂນໂລຢີສາມາດເພີ່ມຄວາມອ່ອນໄຫວແລະຄວາມສະເພາະຂອງທັງສອງດ້ານ. Gao Jie et al. ໃຊ້ວິທີນີ້ເພື່ອກວດຫາສະຖານະການກາຍພັນຂອງ KRAS ໃນຄົນເຈັບ 167 ຄົນທີ່ເປັນມະເຮັງລໍາໃສ້, ແນະນໍາວ່າວິທີນີ້ແມ່ນເຊື່ອຖືໄດ້ແລະຖືກຕ້ອງ. Wang Hui et al. ຍັງໄດ້ໃຊ້ ARMS ເພື່ອກວດຫາການກາຍພັນຂອງ KRAS ໃນ 151 ກໍລະນີຂອງແພຈຸລັງທີ່ສ້ອມແຊມ formaldehyde ແລະ paraffin-embedded. ໃນສະຫະລັດອາເມລິກາ, ຊຸດ COBAS (Roche) ອະນຸມັດໂດຍ FDA ສໍາລັບການທົດສອບທາງດ້ານການຊ່ວຍຂອງ KRAS ແລະຊຸດ Therascreen RGQ (Qiagen) ທີ່ໄດ້ຮັບການຢັ້ງຢືນໂດຍສະຫະພາບເອີຣົບ In Vitro Diagnostics (CE-IVD) ທັງຫມົດໃຊ້ຫຼັກການ ARMS. ໃນບັນດາວິທີການທົ່ວໄປ, ວິທີການ ARMS ແມ່ນມີຄວາມອ່ອນໄຫວທີ່ສຸດແລະຄ່າໃຊ້ຈ່າຍແມ່ນຂ້ອນຂ້າງສົມເຫດສົມຜົນ. ດັ່ງນັ້ນ, ສ່ວນໃຫຍ່ຂອງການກວດຫາທາງຄລີນິກຂອງ KRAS genes ພາຍໃນແລະຕ່າງປະເທດແມ່ນໃຊ້ວິທີການ ARMS, ແຕ່ເນື່ອງຈາກວ່າວິທີການແມ່ນອີງໃສ່ເຕັກໂນໂລຊີ PCR, ຂໍ້ບົກຜ່ອງຂອງມັນແມ່ນວ່າມັນພຽງແຕ່ສາມາດກວດພົບການກາຍພັນທີ່ຮູ້ຈັກ.
4. ວິທີ PCR ປະລິມານ fluorescence ໃນເວລາຈິງ:
ມັນເປັນວິທີການກວດຫາ PCR ເພື່ອກໍານົດການກາຍພັນໂດຍຄ່າ Ct. ມັນມີຄວາມໄດ້ປຽບຂອງຄວາມສະເພາະທີ່ເຂັ້ມແຂງ, ຄວາມອ່ອນໄຫວສູງ, ປະລິມານທີ່ຖືກຕ້ອງ, ການດໍາເນີນງານງ່າຍດາຍ, ແລະປະຕິກິລິຍາປິດຢ່າງເຕັມສ່ວນ. ກຸ່ມທົດລອງຈໍານວນຫຼາຍໄດ້ນໍາໃຊ້ວິທີການນີ້ເພື່ອກວດຫາການກາຍພັນຂອງ KRAS ໃນມະເຮັງລໍາໄສ້ໃຫຍ່. ເມື່ອປຽບທຽບກັບວິທີການຈັດລໍາດັບໂດຍກົງ, PCR ປະລິມານຄອບຄອງປະໂຫຍດຫຼາຍກວ່າເກົ່າໃນຄວາມອ່ອນໄຫວ. ນັກວິຊາການສ່ວນໃຫຍ່ປຽບທຽບສອງວິທີເຊື່ອວ່າ PCR ປະລິມານແມ່ນມີຄວາມອ່ອນໄຫວຫຼາຍ. Liu Wei et al. ການນໍາໃຊ້ສອງວິທີເພື່ອເຮັດໃຫ້ການວິເຄາະລາຍລະອຽດຂອງຜົນການກວດພົບຂອງ 280 ກໍລະນີຂອງມະເຮັງ colorectal mutations KRAS gene, 94 ກໍລະນີຂອງການກາຍພັນຂອງລໍາດັບ gene KRAS, ອັດຕາບວກແມ່ນ 33.57% (94/280), ຊຶ່ງໃນນັ້ນ, ປະລິມານ fluorescence ໃນເວລາທີ່ແທ້ຈິງ. PCR ເປັນບວກ 91 ກໍລະນີມີຄວາມອ່ອນໄຫວ 96.8% (91/94). ໃນຈຳນວນ 186 ກໍລະນີທີ່ຈັດລຽງລຳດັບ gene ປະເພດປ່າ, 184 ກໍລະນີແມ່ນເປັນລົບໂດຍ PCR ປະລິມານໃນເວລາຈິງ, ມີຄວາມສະເພາະຂອງ 98.9% (184/186). ອັດຕາການບັງເອີນລະຫວ່າງວິທີການ PCR ປະລິມານ fluorescence ໃນເວລາຈິງແລະວິທີການຈັດລໍາດັບ gene ໂດຍກົງແມ່ນ 98.2%. ໃນສອງວິທີການກວດພົບ, ອັດຕາການບັງເອີນໃນທາງບວກແລະທາງລົບຂອງແຕ່ລະສະຖານທີ່ກາຍພັນແມ່ນສູງກວ່າ 90%, ແລະອັດຕາການບັງເອີນຂອງສີ່ສະຖານທີ່ບັນລຸ 100%. ຜົນການກວດພົບຂອງສອງວິທີການແມ່ນສອດຄ່ອງສູງ, ສະແດງໃຫ້ເຫັນ PCR ປະລິມານ fluorescent ເປັນວິທີການທີ່ເຊື່ອຖືໄດ້ຫຼາຍກວ່າສໍາລັບການກວດສອບການກາຍພັນ. ຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ວິທີການທີ່ໃຊ້ PCR ຈໍາເປັນຕ້ອງອອກແບບ primers ແລະ probes ໂດຍອີງໃສ່ປະເພດຂອງການກາຍພັນທີ່ຮູ້ຈັກ, ດັ່ງນັ້ນການກາຍພັນທີ່ເປັນໄປໄດ້ທັງຫມົດບໍ່ສາມາດກວດພົບໄດ້, ແລະພຽງແຕ່ສະຖານທີ່ສະເພາະທີ່ສາມາດກວດພົບໄດ້. ຖ້າສະຖານທີ່ທີ່ແນ່ນອນບໍ່ໄດ້ລວມຢູ່ໃນຂອບເຂດການກວດພົບຂອງຊຸດ, ເຖິງແມ່ນວ່າມີການກາຍພັນຢ່າງແທ້ຈິງ, ຜົນໄດ້ຮັບຂອງຊຸດແມ່ນຍັງລົບ. ນອກຈາກນັ້ນ, ເຖິງແມ່ນວ່າຄວາມອ່ອນໄຫວຂອງ PCR ທາງດ້ານປະລິມານແມ່ນສູງ, ບໍ່ວ່າຈະມີຜົນບວກທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງຍັງຕ້ອງໄດ້ຮັບການກວດສອບໂດຍເທກໂນໂລຍີການຈັດລໍາດັບ DNA, ຫຼືການທົດລອງທາງດ້ານຄລີນິກແບບຫຍໍ້ໆທີ່ມີຂະຫນາດຕົວຢ່າງຂະຫນາດໃຫຍ່ເພື່ອຢືນຢັນຄວາມສໍາພັນລະຫວ່າງສະຖານະພາບການກາຍພັນຂອງ KRAS ແລະປະສິດທິພາບຂອງເປົ້າຫມາຍ. ຢາເສບຕິດ. ດັ່ງນັ້ນ, ຄວາມອ່ອນໄຫວສູງຂອງການກວດຫາການກາຍພັນບໍ່ຄວນຖືກປະຕິບັດຕາມຕາບອດ, ໃນຂະນະທີ່ຄວາມສະເພາະແລະຄວາມຖືກຕ້ອງຂອງການກວດຫາຄວນຈະຖືກລະເລີຍ. ພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂຫ້ອງທົດລອງທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ວິທີການທີ່ດີທີ່ສຸດສໍາລັບການກວດພົບການກາຍພັນໃນຕົວຢ່າງອາດຈະແຕກຕ່າງກັນ. ສໍາລັບຕົວຢ່າງທີ່ມີອັດຕາສ່ວນທີ່ສູງກວ່າຂອງການກາຍພັນ, ວິທີການລໍາດັບ Sanger ມີຄວາມຖືກຕ້ອງສູງໃນການກວດສອບການກາຍພັນຂອງເຊື້ອ, ໃນຂະນະທີ່ສໍາລັບຕົວຢ່າງທີ່ມີອັດຕາສ່ວນການກາຍພັນຕ່ໍາ, Sanger sequencing ວິທີການທາງລົບທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງອາດຈະເກີດຂຶ້ນ, ແລະວິທີການກວດສອບການນໍາໃຊ້ PCR fluorescent ເປັນເວທີວິຊາການ ສາມາດຖືກສະແດງໂດຍຄວາມອ່ອນໄຫວສູງ.
5. ວິທີການ HRM:
ມັນແມ່ນ ໜຶ່ງ ໃນວິທີການກວດຫາພັນທຸ ກຳ ທີ່ມັກໃຊ້ຫຼາຍໃນຊຸມປີທີ່ຜ່ານມາ. ມັນມີຄວາມໄດ້ປຽບຂອງງ່າຍດາຍ, ໄວ, ລະອຽດອ່ອນ, ແລະທໍ່ດຽວເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການມົນລະພິດ. ເພື່ອຄົ້ນຫາຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງການນໍາໃຊ້ໃນການທົດສອບທາງດ້ານຄລີນິກ, Liu Liqin ແລະອື່ນໆໄດ້ໃຊ້ວິທີການ HRM ເພື່ອກວດພົບການກາຍພັນຂອງ KRAS ໃນຄົນເຈັບ 64 ຄົນທີ່ເປັນມະເຮັງລໍາໄສ້, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນໄດ້ນໍາໃຊ້ລໍາດັບໂດຍກົງເພື່ອກວດສອບຜົນໄດ້ຮັບ. ຜົນໄດ້ຮັບຂອງ HRM ແລະການຈັດລໍາດັບໂດຍກົງແມ່ນພົບວ່າມີຄວາມສອດຄ່ອງ. ເມື່ອປຽບທຽບກັບການຈັດລໍາດັບໂດຍກົງ, ການກວດຫາການກາຍພັນຂອງ KRAS ໂດຍ HRM ແມ່ນງ່າຍດາຍແລະຖືກຕ້ອງ, ແນະນໍາວ່າມັນເປັນວິທີການທີ່ເຊື່ອຖືໄດ້ທີ່ເຫມາະສົມສໍາລັບການທົດສອບທາງດ້ານການຊ່ວຍ. Chen Zhihong et al. ໃຊ້ວິທີການ HRM ເພື່ອທົດສອບຊຸດຕົວຢ່າງປະສົມທີ່ມີອັດຕາສ່ວນທີ່ແຕກຕ່າງກັນຂອງ KRAS plasmids mutant ເພື່ອປະເມີນຄວາມອ່ອນໄຫວຂອງພວກມັນ. ມັນໄດ້ຖືກພົບເຫັນວ່າອັດຕາສ່ວນຂອງການກາຍພັນຂອງ plasmid ໃນຕົວຢ່າງປະສົມແມ່ນ 10%, ແລະຄວາມອ່ອນໄຫວບັນລຸ 10%. ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ວິທີການດັ່ງກ່າວໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອກວດພົບການກາຍພັນຂອງ KRAS ໃນ 60 ຕົວຢ່າງເນື້ອເຍື່ອມະເຮັງລໍາໄສ້ໃຫຍ່. ເມື່ອປຽບທຽບກັບວິທີການຈັດລໍາດັບໂດຍກົງ, ຄວາມອ່ອນໄຫວຂອງວິທີການ HRM ແມ່ນ 100%, ແລະຄວາມສະເພາະແມ່ນ 96% (43/45). ຂໍ້ເສຍຂອງວິທີການ HRM ແມ່ນວ່າມັນເປັນໄປບໍ່ໄດ້ທີ່ຈະສະຫນອງປະເພດການກາຍພັນສະເພາະໄດ້ຢ່າງຖືກຕ້ອງແລະ codon ໃດແມ່ນ mutated. ຖ້າພົບຄວາມຜິດປົກກະຕິກ່ຽວກັບເສັ້ນໂຄ້ງການລະລາຍ, ວິທີການຈັດລໍາດັບແມ່ນຈໍາເປັນເພື່ອກໍານົດປະເພດຂອງການກາຍພັນ. ກຸ່ມຄົ້ນຄ້ວາ Harlé ໄດ້ນໍາໃຊ້ 156 ກໍລະນີຂອງເນື້ອເຍື່ອມະເຮັງລໍາໄສ້ໃຫຍ່ເພື່ອປຽບທຽບວິທີການ fluorescent PCR, ARMS ແລະ HRM. ຜົນໄດ້ຮັບຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າເຖິງແມ່ນວ່າສາມວິທີການແມ່ນເຫມາະສົມສໍາລັບການທົດສອບທາງດ້ານການຊ່ວຍ, ຄວາມຫນ້າເຊື່ອຖືຂອງ HRM ບໍ່ດີເທົ່າກັບສອງວິທີການອື່ນໆ.
6. ວິທີການອື່ນໆ:
ນອກເຫນືອໄປຈາກວິທີການທີ່ໄດ້ກ່າວມາຂ້າງເທິງ, ວິທີການກວດຫາອື່ນໆມີຂໍ້ດີແລະຂໍ້ເສຍຂອງຕົນເອງໃນຄໍາຮ້ອງສະຫມັກ, ເຊັ່ນ PCR-SSCP, ປະສິດທິພາບສູງ chromatography ແຫຼວ, fluorescent PCR-optimized oligonucleotide probe method, ວິທີການຂອງ PCR ຮັງແລະປະສົມປະສານ ARMS, COLD-PCR ວິທີການ, ແລະອື່ນໆ. ປະສິດທິພາບສູງຂອງແຫຼວ chromatography ມີຄວາມສະເພາະທີ່ເຂັ້ມແຂງ, ແຕ່ຄວາມຕ້ອງການສໍາລັບຕົວຢ່າງແມ່ນຂະຫນາດໃຫຍ່; PCR-SSCP ມີຄ່າໃຊ້ຈ່າຍຕ່ໍາແລະປະຫຍັດ, ແຕ່ການດໍາເນີນງານແມ່ນສັບສົນ; ເຕັກໂນໂລຊີການກວດສອບການກາຍພັນໂດຍອີງໃສ່ fluorescent PCR ມີຄວາມສະເພາະທີ່ເຂັ້ມແຂງ, ຄວາມອ່ອນໄຫວສູງ, ແລະປະລິມານທີ່ຖືກຕ້ອງ, ການດໍາເນີນງານງ່າຍດາຍ, ປະຕິກິລິຢາສະກັດຢ່າງເຕັມສ່ວນແລະຂໍ້ໄດ້ປຽບອື່ນໆ, ແຕ່ທັງຫມົດຈໍາເປັນຕ້ອງໄດ້ອອກແບບ primers ແລະ probes ຕາມປະເພດຂອງການກາຍພັນທີ່ຮູ້ຈັກ, ສະນັ້ນພຽງແຕ່ສະຖານທີ່ສະເພາະສາມາດເປັນ. ກວດພົບ, ແລະການກາຍພັນທີ່ເປັນໄປໄດ້ທັງຫມົດບໍ່ສາມາດກວດພົບໄດ້.
3. ສະຫຼຸບ
ສະຫຼຸບແລ້ວ, ເນື່ອງຈາກວ່າສະຖານທີ່ການກາຍພັນແລະວິທີການກວດຫາຢູ່ໃນຫ້ອງທົດລອງທີ່ແຕກຕ່າງກັນບໍ່ເປັນເອກະພາບ, ຂະຫນາດຂອງຕົວຢ່າງເນື້ອງອກທີ່ວິເຄາະແລະຄຸນນະພາບຂອງການສະກັດເອົາ DNA ແມ່ນບໍ່ສະເຫມີກັນ, ເຮັດໃຫ້ຜົນໄດ້ຮັບການທົດລອງຂະຫນາດໃຫຍ່ຫຼືຂະຫນາດນ້ອຍລະຫວ່າງຫ້ອງທົດລອງຄວາມແຕກຕ່າງ, ການກໍານົດມາດຕະຖານ. ການກວດຫາການກາຍພັນຂອງ KRAS ໄດ້ກາຍເປັນບັນຫາການກວດຫາທາງຄລີນິກທີ່ເປັນຫ່ວງໃນປະເທດຕ່າງໆ. ໃນປັດຈຸບັນ, ມີຫຼາຍວິທີທີ່ຈະກວດພົບການກາຍພັນໃນ gene KRAS. ຄວາມອ່ອນໄຫວຈາກສູງໄປຫາຕ່ໍາແມ່ນ ARMS, pyrosequencing, HRM, PCR ປະລິມານໃນເວລາທີ່ແທ້ຈິງ, ແລະການຈັດລໍາດັບໂດຍກົງ. ຈາກຄວາມເປັນຈິງທາງດ້ານຄລີນິກ, ຄວາມອ່ອນໄຫວຕໍ່າບໍ່ເອື້ອອໍານວຍໃຫ້ແກ່ການປິ່ນປົວທາງດ້ານຄລີນິກ, ແຕ່ວິທີການທີ່ລະອຽດອ່ອນເກີນໄປຈະເຮັດໃຫ້ຄວາມສະເພາະຂອງການກວດຫາຫຼຸດລົງ, ແລະຜົນໄດ້ຮັບໃນທາງບວກທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງທີ່ບໍ່ຈໍາເປັນອາດຈະເກີດຂື້ນແລະຜົນກະທົບຕໍ່ການກິນຢາຕໍ່ໄປຂອງຄົນເຈັບ. ພິຈາລະນາລັກສະນະຂ້າງເທິງ, ສົມທົບກັບວິທີການອະນຸມັດໂດຍ FDA, ວິທີການ ARMS ແມ່ນແນະນໍາ. ແນ່ນອນ, ຈາກທັດສະນະຂອງຕະຫຼາດ, ການວິນິດໄສໂມເລກຸນບໍ່ຄວນເນັ້ນຫນັກໃສ່ຂ້ອຍ
thods, ແຕ່ສຸມໃສ່ຜົນໄດ້ຮັບທີ່ຖືກຕ້ອງສຸດທ້າຍ. ຫ້ອງທົດລອງທີ່ແຕກຕ່າງກັນສາມາດຮັບຮອງເອົາວິທີການທົດສອບທີ່ເຫມາະສົມຕາມສະຖານະການຕົວຈິງ, ແຕ່ວ່າພຽງແຕ່ຖ້າພວກເຂົາມີຄຸນສົມບັດຂອງຜູ້ປະຕິບັດງານທີ່ດີແລະລະບົບການຄວບຄຸມຄຸນນະພາບພາຍໃນ. ພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂສິ່ງແວດລ້ອມຂອງຫ້ອງທົດລອງພາຍໃນປະເທດໃນປະຈຸບັນ, ມັນຈໍາເປັນຕ້ອງໄດ້ດໍາເນີນການທົດສອບຢູ່ໃນຫ້ອງທົດລອງ PCR ທີ່ໄດ້ມາດຕະຖານແລະເຂົ້າຮ່ວມໃນກິດຈະກໍາການຄວບຄຸມຄຸນນະພາບລະຫວ່າງຫ້ອງພາຍໃນແລະຕ່າງປະເທດເພື່ອຮັບປະກັນຄຸນນະພາບການທົດສອບຫ້ອງທົດລອງທີ່ເຊື່ອຖືໄດ້. ການຄຸ້ມຄອງມາດຕະຖານແມ່ນເງື່ອນໄຂທີ່ຈໍາເປັນເພື່ອຮັບປະກັນຜົນໄດ້ຮັບຄົງທີ່. ໃນປະເທດຈີນ, ມີຄວາມຈໍາເປັນອັນຮີບດ່ວນທີ່ຈະເປັນເອກະພາບແລະມາດຕະຖານການທົດສອບທາງດ້ານຄລີນິກຂອງ KRAS gene, ແລະເພື່ອສ້າງໂຄງການທົດສອບທີ່ມີມາດຕະຖານແລະມາດຕະຖານຕາມຄວາມຕ້ອງການທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ແລະໂຄງການນີ້ສາມາດຂະຫຍາຍໄປສູ່ການກວດພົບ BRAF, PIK23450_3CA, EGFR ແລະ. ພັນທຸ ກຳ ອື່ນໆເພື່ອສົ່ງເສີມການທົດສອບທາງໂມເລກຸນທາງຄລີນິກ.
