کلیٹیکیماب اور پینٹوموماب جیسی نشانے کی دوائیں کلوریکل کینسر کے لئے موثر علاج معالجے کے طور پر کلینک میں وسیع پیمانے پر استعمال ہوتی رہی ہیں۔ طبی اعداد و شمار سے پتہ چلتا ہے کہ کے آر اے ایس تغیر پذیر مریضوں کو اس مونوکلونل مائپنڈ دوائی پر کوئی خاص اثر نہیں پڑتا ہے ، اور صرف جنگلی نوعیت کے مریض ہی اس سے فائدہ اٹھا سکتے ہیں۔ لہذا ، KRAS جین تغیر پذیری کی حیثیت کو طبی لحاظ سے ایک اہم علاج معالجہ کے طور پر سمجھا جاتا ہے ، جس کا کولیوریکل کینسر کے تشخیص اور علاج کے اثر سے مضبوط تعلق ہے۔ 2009 کے نیشنل کینسر کمپری ہینسی نیٹ ورک (این سی سی این) کولورکٹل کینسر کلینیکل پریکٹس گائیڈ لائنس میں یہ شرط عائد کی گئی ہے کہ میٹاسٹیٹک کولوریکٹل کینسر والے تمام مریضوں کو کے آر اے ایس جین اتپریورتن کی حیثیت کا پتہ لگانا چاہئے ، اور صرف کے آر اے ایس جنگلی قسم کو ای جی ایف آر ٹارگٹ تھراپی حاصل کرنے کی سفارش کی جاتی ہے۔ اسی سال میں ، امریکن سوسائٹی آف کلینیکل آنکولوجی (ASCO) نے بھی ٹیومر ٹارگٹ تھراپی کے لئے ایک مالیکیولر مارکر کی طرح کے طبی علاج کی سفارشات جاری کیں ، جو اس کی اہم رہنما guidingں کی اہمیت کو ظاہر کرتی ہے۔ اس وقت ، KRAS جینیاتی جانچ بڑے پیمانے پر طبی طور پر کی گئی ہے۔ ہم بنیادی طور پر کلینیکل سلیکشن میں ریفرنس کے لئے گھریلو KRAS جین اتپریورتنتی شناخت کے طریقوں کی جانچ کرتے ہیں۔
1. کولیورکٹل کینسر میں کے آر اے ایس جین کی تغیر کی مثبت شرح
کولیٹریکٹل کینسر میں ، کے آر اے ایس جین کی تغیر کی شرح زیادہ سے زیادہ 35 to سے 45 is تک ہے ، اور اعلی خطرہ اتپریورتن کی جگہ کوڈن 12 اور 13 ایکسن 2 پر ہے ، اور اب بھی ایسے نادر ہی موجود ہیں جیسے 61 اور 146۔ تغیر سائٹ کے آر اے ایس جین تغیر پزیر کے لئے بہت سراغ لگانے کے طریقے موجود ہیں ، جن میں براہ راست ترتیب ، اعلی ریزولیشن پگھلنے والی وکر تجزیہ (HRM) ، پائروسینسیسنگ ، مقداری پی سی آر ، اتپریورتن امپلیفیکشن بلاک سسٹم (ایمپلنک ایٹیو) نیری فریکٹریومیٹیشن سسٹم (اے آر ایم ایس) ، پابندی کے ٹکڑے کی لمبائی پولیمورفزم (آر ایف ایل پی) شامل ہیں۔ پولیمریسیس زنجیر ری ایکشن - واحد اسٹرینڈ کنفیوژن پولیمورفزم تجزیہ (پی سی آر - سنگل اسٹرینڈ کنفومیشن پولیمورفزم (پی سی آر-ایس ایس سی پی) ، کم امتیازی نمونہ پی سی آر (کولڈ-پی سی آر) اور اعلی کارکردگی مائع کرومیٹوگرافی تجزیہ ، وغیرہ میں شریک پرورش۔
2. KRAS اتپریورتنتی پتہ لگانے کے طریقوں کی تشخیص
1. براہ راست ترتیب کا طریقہ: کے آر اے ایس جین تغیرات کا پتہ لگانے کے لئے یہ سب سے کلاسیکی طریقہ ہے ، اور جین تغیرات کا پتہ لگانے کے لئے یہ سونے کا معیار بھی ہے۔ ڈائیڈوکیسی تسلسل کے اصول پر مبنی براہ راست ترتیب کا طریقہ زیادہ تر بدیہی طور پر بیس چوٹی کے نقشے کی شکل میں جین کی ترتیب کی تبدیلی کو دکھا سکتا ہے۔ پتہ لگانے کی قسم زیادہ جامع ہے ، اور یہ اتنا ہی ابتدائی اطلاق شدہ اتپریورتنتی پتہ لگانے کا طریقہ بھی ہے۔ نئی نسل کی ترتیب سازی پلیٹ فارم کے ابھرنے کے باوجود ، اندرون اور بیرون ملک کے اسکالرز اب بھی براہ راست ترتیب کے نتائج کو پیمانہ اور نئے طریقہ کار کی وشوسنییتا کا تعین کرنے کے لئے استعمال کرتے ہیں۔ گاو جینگ ات 966 مریضوں میں کولیورکٹل کینسر والے KRAS اور BRAF جین اتپریورتنوں کا پتہ لگانے کے لئے براہ راست تسلسل کا اطلاق کیا گیا۔ یہ KRAS جین اتپریورتن کا بھی تجزیہ ہے جو ادب میں شائع ہونے والے سب سے بڑے گھریلو نمونے کے ساتھ ہے۔ لنگ یون اور دوسرے کا خیال ہے کہ براہ راست ترتیب دینے کا طریقہ ہر جین کی اتپریورتن حیثیت کو سمجھنے کے ل direct سب سے سیدھا اور موثر پتہ لگانے کا طریقہ ہے ، جو اتپریورتن کی قسم کو واضح کرسکتا ہے ، خاص طور پر نامعلوم تغیرات کا پتہ لگانے کے لئے۔ اگرچہ اس طریقے کی حساسیت نسبتا low کم ہے ، لیکن اس میں ٹیومر کے خلیوں کو افزودہ کرنے کے لئے مائکروڈیسیکشن جیسے طریقوں سے بہتر بنایا جاسکتا ہے۔ دوسرے گھریلو تحقیقاتی گروپوں میں بڑے نمونے کے سائز کی کھوج کے لئے کے آر اے ایس کا پتہ لگانے کے لئے براہ راست ترتیب کا طریقہ بھی لاگو کیا گیا ہے۔ تاہم ، نچلی حساسیت براہ راست ترتیب کا سب سے بڑا نقصان ہے۔ چین میں موصولہ نتائج کا جائزہ لیں تو ، براہ راست ترتیب کے ذریعہ تغیر پانے کا پتہ لگانے کی شرح کم نہیں ہے۔ لیو ژاؤجنگ اٹ رحمہ اللہ تعالی براہ راست ترتیب اور پیپٹائڈ نیوکلیک ایسڈ کلیمپ پی سی آر (PNA-PCR) کا موازنہ کیا اور پتہ چلا کہ براہ راست ترتیب سے KRAS جین تغیر پزیر کے 43 واقعات کا پتہ چلا ہے۔ ان تغیرات کے علاوہ ، پی این اے-پی سی آر کا بھی براہ راست ترتیب سے پتہ چلا۔ جنگلی نوعیت میں دس تغیرات پائے گئے ، اور پی سی آر کے ذریعہ جنگلی نوعیت کے مریضوں کا تعی toن کرنے کے لئے تجاویز پیش کی گئیں اور اتپریورتن مریضوں کا تعی toن کرنے کے لئے براہ راست ترتیب کا طریقہ کیو تیان وغیرہ۔ فلوروسینٹ پی سی آر سے بہتر شدہ اولیگونیوکلائٹائڈ تحقیقات کا طریقہ اور براہ راست ترتیب کے طریقہ کار کے ذریعہ 131 کالوریکل کینسر کے نمونوں کا پتہ لگایا گیا ، اور کے آر اے ایس جین اتپریورتن کی مثبت شرحیں 41.2٪ (54/131) اور 40.5٪ (53/131) تھیں۔ بائی ڈونگیو نے مختلف طریقوں کی کھوج کی حساسیت پر بھی تبادلہ خیال کیا۔ کولیٹریکٹل کینسر کے 200 مریضوں میں سے 63 کو آر ٹی کیو پی سی آر تغیرات کے ذریعہ پتا چلا تھا ، اور اتپریورتنتی پتہ لگانے کی شرح 31.5٪ تھی۔ اتپریورتن ، اتپریورتن کا پتہ لگانے کی شرح 169٪ کے 50 واقعات کی براہ راست ترتیب دے کر 29.6 نمونوں کو کامیابی کے ساتھ ترتیب دیا گیا۔ اگرچہ براہ راست ترتیب دینے کا طریقہ درست ، معروضی اور خاص طور پر کے آر اے ایس جین تغیر پذیری کی حیثیت کا پتہ لگاسکتا ہے ، لیکن اس کی کوتاہیاں جیسے اعلی تکنیکی ضروریات ، پیچیدہ آپریشن کے طریقہ کار ، آلودگی پیدا کرنے کا آسان طریقہ ، اور نتائج کا وقت طلب اور محنتی تشریح بھی بہت ہیں۔ واضح اکثر کوئی ترتیب سازی کا سامان نہیں ہوتا ہے ، اور نمونہ کو متعلقہ کمپنی کو جانچ کے ل sent بھیجنے کی ضرورت ہوتی ہے ، جس میں کافی وقت لگتا ہے اور اس کی قیمت بہت زیادہ ہوتی ہے ، لہذا اس میں بڑی حدود ہوتی ہیں۔
پائروسیسیسنگ کا طریقہ:
سنکشیشیت ، کھوج لگانے کی لاگت اور اطلاع دینے کے لئے وقت کی ترتیب کے لحاظ سے کے آر اے ایس جین کی اتپریورتنتی پتہ لگانے کے لئے پائروسیکنسنگ کا طریقہ بھی ایک زیادہ آسان طریقہ ہے۔ اس طریقہ کی تکرار کرنے کی صلاحیت بہتر ہے۔ موصولہ چوٹی نقشہ کے مطابق کسی خاص سائٹ کی اتپریورتن تعدد کا مقداری مطالعہ اور مختلف سائٹوں کی اتپریورتن تعدد کے مابین موازنہ ایک نظر میں واضح ہے۔ حالیہ برسوں میں ، اوگینو ایٹ ال۔ ، ہچنس ET رحمہ اللہ تعالی۔ کولیورکٹل کینسر کے بڑے نمونوں والے مریضوں میں کے آر اے ایس تغیرات کو جانچنے کے لئے پائروسیکنسنگ ٹکنالوجی کا استعمال کیا ہے۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ پائروسیونگینس ٹکنالوجی مریضوں کو ہدف بنائے جانے والے علاج کے لئے اسکریننگ کرنے کا ایک طاقتور ذریعہ ہے۔ ٹیومر کے سالماتی تشخیص میں وسیع تر امکانات موجود ہیں۔ گھریلو اسکالرز نے کلوریکٹیل کینسر میں KRAS اتپریورتنوں کی طبی اعتبار سے اچھ accی درستگی اور وشوسنییتا کے ساتھ pyrosequencing Technology بھی استعمال کی ہے۔ یہ طریقہ بہتر خصوصیات اور اعلی حساسیت رکھتا ہے۔ سنڈسٹرÖم وغیرہ۔ کلینیکل ایپلی کیشنز میں ایللیک مخصوص پی سی آر اور پائروسیکوینسنگ کا موازنہ کیا گیا اور معلوم ہوا کہ کولوریکل کے کینسر کے مریضوں میں کے آر اے ایس تغیر کے 314 معاملات میں ، پائروسیونگینس کی خصوصیت ایللیوں سے بہتر ہے۔ پی سی آر ، اور کم ٹیومر سیل مواد والے ٹشوز کے ساتھ اچھی حساسیت رکھتا ہے۔ ٹیومر خلیوں کے تناسب کو 1.25٪ سے 2.5٪ تک پتلی کریں۔ پائروسیکنسنگ اب بھی اتپریورتن سگنل کا پتہ لگاسکتی ہے۔ جب نمونے میں اتپریورتی ایللیوں کا کم سے کم مواد 20 10 تک پہنچنے کی ضرورت ہو تو سنجر تسلسل کے ذریعہ اس کا پتہ لگائیں ، جب یہ 5 reaches تک پہنچ جاتا ہے تو اس کا پتہ HRM کے ذریعہ لگایا جاسکتا ہے ، اور pyrosequencecing کے لئے صرف 717 فیصد تغیرات کا پتہ لگایا جاسکتا ہے۔ ایللیس ہم نے 40.9 مریضوں میں KRAS اتپریورتنوں کا پتہ لگانے کے لئے pyrosequencing کا استعمال کیا جس میں کولورکٹل کینسر ہے اور پتہ چلا ہے کہ KRAS تغیرات کی فریکوئنسی 12٪ ہے۔ کوڈن 30.1 کی تبدیلی کی شرح 13٪ ، کوڈن 9.8 کی تبدیلی کی شرح 61٪ تھی ، اور کوڈن 1.0 کی تبدیلی کی شرح XNUMX٪ تھی۔ ہم جانچنے سے پہلے دستی مائکروڈیسیکشن کے ذریعہ ٹیومر کے اعلی مواد کے ساتھ ؤتکوں کو افزودہ کرتے ہیں ، جس سے نتائج کو زیادہ قابل اعتماد بنایا جاتا ہے۔ اس طریقہ کار میں اچھی حساسیت اور خصوصیت ہے ، اور کلینیکل پریکٹس میں اس کی نشوونما آسان ہے۔ پائروسیونگینس کا نقصان کھوج لگانے کی زیادہ لاگت ہے ، اور نمونے کی ترتیب کے ل for سنگل پھنسے ہوئے ڈی این اے کی تیاری کا عمل بوجھل ہے۔ مستقبل میں ، پائروسیکنسنگ ڈبل پھنسے ہوئے پی سی آر مصنوعات کی براہ راست کھوج کے ل technology ٹکنالوجی کی نشوونما کے لئے وقف کیا جاسکتا ہے ، جو آپریشن کو بہت آسان بنا دے گا۔ اور مؤثر طریقے سے کلینیکل ٹیسٹنگ کے جامع فروغ حاصل کرنے کے لئے ترتیب کی لاگت کو کم کریں۔
3. آرمس کا طریقہ:
اس ٹکنالوجی میں پرائمر کا استعمال جنگلی قسم اور اتپریورتی جینوں میں فرق کرنے کے لئے کیا گیا ہے
اس کی اطلاع 1980 کی دہائی کے اوائل میں دی گئی ہے۔ اس طریقہ کار کا سب سے بڑا فائدہ یہ ہے کہ اس میں 1.0 1.0 تک کی حساسیت ہے اور نمونوں میں اتپریورتن جینوں کا پتہ لگاسکتا ہے جس میں 167٪ سے بھی کم ہے۔ ڈیزائن میں ، ہدف کی مصنوعات کی لمبائی کو بڑی حد تک کم کیا جاسکتا ہے ، اور اس مسئلے کا پتہ لگانے کے درست نتائج حاصل نہیں کیے جاسکتے ہیں کیونکہ پیرافن میں سرایت شدہ ٹشو نمونہ سے نکالا جانے والا بیشتر ڈی این اے ٹکڑا ہوا ہے۔ اس ٹکنالوجی میں اضافے کے دوران بند ٹیوب آپریشن کو حاصل کرنے کے ل the ریئل ٹائم پی سی آر پلیٹ فارم کو جوڑ دیا گیا ہے۔ آپریشن آسان ہے اور اس میں مصنوع کے بعد کی پروسیسنگ کی ضرورت نہیں ہے ، جو زیادہ تر حد تک پروقار مصنوعات کی آلودگی سے بچ سکے۔ اس وقت ، بچھو-اے آر ایم ایس کا طریقہ کار جو بچھو کی تحقیقات اور امپلیفیکیشن بلاک اتپریورتن کے نظام کا امتزاج کرتا ہے دنیا میں زیادہ عام طور پر استعمال ہوتا ہے۔ دونوں ٹیکنالوجیز کا امتزاج دونوں اطراف کی حساسیت اور وضاحت کو زیادہ سے زیادہ کرسکتا ہے۔ گاو جئ ایٹ اللہ۔ اس طریقہ کار کو کولیٹریکٹل کینسر والے 151 مریضوں میں KRAS جین تغیر پذیری کی حیثیت کا پتہ لگانے کے لئے استعمال کیا گیا ، اس تجویز سے کہ یہ طریقہ قابل اعتماد اور درست ہے۔ وانگ ھوئی وغیرہ۔ فارماڈیڈہائڈ فکسڈ اور پیرافین سرایت والے ؤتکوں کے XNUMX معاملات میں کے آر اے ایس تغیرات کا پتہ لگانے کے لئے بھی اے آر ایم ایس کا استعمال کیا۔ ریاستہائے متحدہ میں ، ایف ڈی اے کے ذریعہ KRAS کی کلینیکل جانچ کے لئے منظور شدہ COBAS کٹ (روچے) اور یورپی یونین کے ذریعہ وٹرو تشخیص (CE-IVD) کے ذریعہ تصدیق شدہ تھیراسکرین آر جی کیو کٹ (کیجین) سبھی اے آر ایم ایس اصول کا استعمال کرتے ہیں۔ عام طریقوں میں ، اے آر ایم ایس کا طریقہ سب سے زیادہ حساس ہے اور قیمت نسبتا معقول ہے۔ لہذا ، ملک اور بیرون ملک کے آر اے ایس جینوں کے کلینیکل سراغ لگانے کا ایک بڑا حصہ اے آر ایم ایس طریقہ استعمال کر رہا ہے ، لیکن چونکہ یہ طریقہ پی سی آر ٹکنالوجی پر مبنی ہے ، اس کی کمی یہ ہے کہ اس کا پتہ صرف سائٹ کے نام سے جانا جاتا تغیرات کا پتہ لگایا جاسکتا ہے۔
4. ریئل ٹائم فلوروسینس مقداری پی سی آر کا طریقہ:
سی ٹی ویلیو کے ذریعہ تغیر کا تعین کرنے کے لئے یہ پی سی آر پر مبنی کھوج کا طریقہ ہے۔ اس میں مضبوط خصوصیت ، اعلی سنویدنشیلتا ، درست مقدار ، آسان آپریشن ، اور مکمل طور پر بند رد عمل کے فوائد ہیں۔ بہت سے تجرباتی گروپوں نے کولورکٹل کینسر میں کے آر اے ایس تغیرات کا پتہ لگانے کے لئے یہ طریقہ اختیار کیا ہے۔ براہ راست ترتیب کے طریقہ کار کے مقابلے میں ، مقداری پی سی آر سنویدنشیلتا میں زیادہ سے زیادہ فائدہ حاصل کرتا ہے۔ دو طریقوں کا موازنہ کرنے والے زیادہ تر علماء کا خیال ہے کہ مقداری پی سی آر زیادہ حساس ہے۔ لیو وی ایٹ. کولیورکٹل کینسر KRAS جین اتپریورتن کے 280 واقعات ، KRAS جین کی ترتیب ترتیب اتپریورتن کے 94 معاملات کے سراغ لگانے کے نتائج کے بارے میں تفصیلی تجزیہ کرنے کے لئے دو طریقوں کا استعمال کیا گیا ، مثبت شرح 33.57٪ (94/280) تھی ، جس میں ، اصل وقت کے مائدیپتی مقداری پی سی آر مثبت تھا 91 معاملات کی حساسیت 96.8٪ (91/94) تھی۔ 186 جین کی ترتیب وار جنگلی نوعیت کے معاملات میں سے ، 184 ریئل ٹائم مقداری پی سی آر کے ذریعہ منفی تھے ، جن کی خصوصیات 98.9٪ (184/186) ہے۔ ریئل ٹائم فلوروسینس مقداری پی سی آر کے طریقہ کار اور براہ راست جین کی ترتیب کے طریقہ کار کے مابین اتفاق کی شرح 98.2٪ تھی۔ پتہ لگانے کے دو طریقوں میں ، ہر تغیر پذیر سائٹ کی مثبت اور منفی اتفاق کی شرح 90٪ سے اوپر تھی ، اور چار مقامات کی اتفاقیہ شرح 100٪ تک پہنچ گئی تھی۔ ان دو طریقوں کا پتہ لگانے کے نتائج انتہائی مستقل تھے ، جو فلورسنٹ مقداری پی سی آر کی نشاندہی کرتے ہیں۔ یہ اتپریورتنتی شناخت کا زیادہ قابل اعتماد طریقہ ہے۔ تاہم ، پی سی آر پر مبنی طریقوں کو معلوم شدہ تغیر پزیر اقسام پر مبنی پرائمر اور تحقیقات کے ڈیزائن کی ضرورت ہے ، لہذا تمام ممکنہ تغیرات کا پتہ نہیں چل سکتا ہے ، اور صرف مخصوص سائٹوں کا پتہ لگایا جاسکتا ہے۔ اگر کسی خاص سائٹ کو کٹ کے پتہ لگانے کی حد میں شامل نہیں کیا گیا ہے ، یہاں تک کہ اگر حقیقت میں اتپریورتن ہو ، تو بھی کٹ کا نتیجہ منفی ہے۔ اس کے علاوہ ، اگرچہ مقداری پی سی آر کی حساسیت زیادہ ہے ، چاہے جھوٹے مثبت ابھی بھی ڈی این اے تسلسل ٹیکنالوجی کے ذریعہ تصدیق کی جائیں ، یا کے آر اے ایس تغیر پذیری کی حیثیت اور اہداف کی افادیت کے مابین ارتباط کی تصدیق کے ل large بڑے نمونہ سائز کے ساتھ سابقہ اور ممکنہ کلینیکل تجربات کی تصدیق کی ضرورت ہے۔ منشیات. لہذا ، اتپریورتنم کے پتہ لگانے کی اعلی حساسیت کو آنکھیں بند نہیں کیا جانا چاہئے ، جبکہ پتہ لگانے کی خصوصیت اور درستگی کو نظرانداز کیا جانا چاہئے۔ مختلف تجربہ گاہوں کے حالات کے تحت ، نمونوں میں تغیر پذیر کا پتہ لگانے کا زیادہ سے زیادہ طریقہ بھی مختلف ہوسکتا ہے۔ تغیرات کے اعلی تناسب کے ساتھ نمونوں کے ل San ، جین اتپریورتنوں کا پتہ لگانے میں سنجر کی ترتیب کا طریقہ کار میں زیادہ درستگی رکھتا ہے ، جبکہ تغیرات کے کم تناسب والے نمونوں کے لئے ، سنجر ترتیب دینے کا طریقہ غلط منفی ہوسکتا ہے ، اور فلورسنٹ پی سی آر کو تکنیکی پلیٹ فارم کے طور پر استعمال کرتے ہوئے پتہ لگانے کا طریقہ اعلی حساسیت کی طرف سے خصوصیات کیا جا سکتا ہے.
5. HRM طریقہ:
حالیہ برسوں میں یہ جین کا عام طور پر استعمال کرنے والے طریقوں میں سے ایک ہے۔ اس میں آلودگی سے بچنے کے ل simple آسان ، تیز ، حساس اور واحد ٹیوب کے فوائد ہیں۔ کلینیکل ٹیسٹنگ میں اس کے استعمال کی فزیبلٹی کو دریافت کرنے کے ل Li ، لیو لیکین اور دیگر افراد نے HRM کا طریقہ استعمال کیا جس میں کولیورکٹل کینسر سے متاثرہ 64 مریضوں میں KRAS جین کی تغیرات کا پتہ چلایا جاسکتا ہے ، اور پھر نتائج کی تصدیق کے ل direct براہ راست تسلسل کا استعمال کیا جاتا تھا۔ HRM اور براہ راست ترتیب کے نتائج مستقل پائے جاتے ہیں۔ براہ راست ترتیب کے ساتھ مقابلے میں ، ایچ آر ایم کے ذریعہ کے آر اے ایس جین تغیرات کا پتہ لگانا آسان اور درست ہے ، جس سے معلوم ہوتا ہے کہ یہ کلینیکل جانچ کے لئے موزوں ایک قابل اعتماد طریقہ ہے۔ چن ژہونگ ات al۔ ان کی حساسیت کا اندازہ لگانے کے لئے KRAS اتپریورتی پلازمیڈ کے مختلف تناسب پر مشتمل مخلوط نمونوں کی ایک سیریز کی جانچ کے لئے HRM طریقہ استعمال کیا۔ یہ پایا گیا کہ مخلوط نمونوں میں پلازمیڈ تغیرات کا تناسب 10٪ تھا ، اور حساسیت 10٪ تک پہنچ گئی۔ اس کے بعد ، 60 کولیٹریکٹل کینسر ٹشو نمونوں میں کے آر اے ایس جین تغیرات کا پتہ لگانے کے لئے یہ طریقہ استعمال کیا گیا۔ براہ راست ترتیب کے طریقہ کار کے مقابلے میں ، HRM کے طریقہ کار کی حساسیت 100٪ تھی ، اور خصوصیت 96٪ (43/45) تھی۔ ایچ آر ایم کے طریقہ کار کا نقصان یہ ہے کہ مخصوص اتپریورتنتی قسم کو درست طریقے سے فراہم کرنا ناممکن ہے اور کون سا کوڈن تبدیل کیا گیا ہے۔ اگر پگھلنے والے وکر پر کوئی غیر معمولی چیز پائی جاتی ہے تو ، اتپریورتن کی قسم کا تعین کرنے کے لئے ترتیب کا طریقہ درکار ہوتا ہے۔ ہارلی ریسرچ گروپ نے فلوروسینٹ پی سی آر ، اے آر ایم ایس اور ایچ آر ایم طریقوں کا موازنہ کرنے کے ل col کولوریکل کینسر ٹشو کے 156 کیس استعمال کیے۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ اگرچہ یہ تین طریقے کلینیکل ٹیسٹنگ کے ل suitable موزوں ہیں ، لیکن HRM کی وشوسنییتا دوسرے دو طریقوں کی طرح بہتر نہیں ہے۔
6. دوسرے طریقے:
مذکورہ طریقوں کے علاوہ ، پتہ لگانے کے دیگر طریقوں کے اطلاق میں ان کے اپنے فوائد اور نقصانات ہیں ، جیسے پی سی آر-ایس ایس سی پی ، اعلی کارکردگی مائع کرومیٹوگرافی ، فلوروسینٹ پی سی آر سے بہتر شدہ اولیگونوکلیوٹائڈ تحقیقات کا طریقہ ، نیسٹڈ پی سی آر اور اے آر ایم ایس مرکب کا طریقہ ، کولڈ-پی سی آر طریقہ ، وغیرہ۔ اعلی کارکردگی مائع کرومیٹوگرافی کی مضبوط خصوصیات ہیں ، لیکن نمونوں کی طلب بڑی ہے۔ پی سی آر-ایس ایس سی پی کی قیمت کم اور اقتصادی ہے ، لیکن یہ عمل پیچیدہ ہے۔ فلورسنٹ پی سی آر پر مبنی تغیرات کا پتہ لگانے والی ٹکنالوجی مضبوط خصوصیات ، اعلی سنویدنشیلتا ، اور درست مقداری ، آسان آپریشن ، مکمل طور پر مسدود رد عمل اور دیگر فوائد رکھتی ہے ، لیکن سب کو معلوم تغیر کی نوعیت کے مطابق پرائمر اور تحقیقات ڈیزائن کرنے کی ضرورت ہے ، لہذا صرف مخصوص سائٹیں ہی ہوسکتی ہیں پتہ چلا ، اور تمام ممکنہ تغیرات کا پتہ نہیں چل سکتا ہے۔
3. خلاصہ
خلاصہ یہ کہ چونکہ مختلف لیبارٹریوں میں تغیر پذیری کی جگہیں اور پتہ لگانے کے طریقے یکساں نہیں ہیں ، اس لئے تجزیہ کردہ ٹیومر کے نمونوں کا سائز اور ڈی این اے نکالنے کا معیار بھی ناہموار ہے ، جس کے نتیجے میں لیبارٹریوں میں فرق یا نمونہ کے درمیان بڑے یا چھوٹے تجرباتی نتائج موجود ہیں۔ KRAS جین اتپریورتن کا پتہ لگانے کے مختلف ممالک میں تشویش کا کلینیکل سراغ لگانے کا مسئلہ بن گیا ہے۔ اس وقت کے آر اے ایس جین میں تغیرات کا پتہ لگانے کے بہت سارے طریقے موجود ہیں۔ اعلی سے کم تک کی حساسیت ARMS ، pyrosequencing ، HRM ، اصل وقتی مقداری پی سی آر اور براہ راست ترتیب ہے۔ طبی حقیقت سے ، کم حساسیت طبی علاج کے لduc موزوں نہیں ہے ، لیکن بہت ہی حساس طریقے سراغ لگانے کی خصوصیت کو زوال کا سبب بنیں گے ، اور غیر ضروری جھوٹے مثبت نتائج سامنے آسکتے ہیں اور مریض کے بعد کی دوائیوں کی تشکیل کو متاثر کرسکتے ہیں۔ مندرجہ بالا پہلوؤں پر غور کرتے ہوئے ، ایف ڈی اے کے ذریعہ منظور شدہ طریقہ کار کے ساتھ مل کر ، اے آر ایم ایس طریقہ کی سفارش کی گئی ہے۔ یقینا ، مارکیٹ کے نقطہ نظر سے ، سالماتی تشخیص کرنے والوں کو مجھ پر زور نہیں دینا چاہئے
thods، لیکن حتمی درست نتائج پر توجہ مرکوز کریں. مختلف لیبارٹریز اصل صورتحال کے مطابق جانچ کے مناسب طریقے اپنا سکتی ہیں، لیکن صرف اس صورت میں جب ان کے پاس آپریٹر کی اچھی اہلیت اور اندرونی کوالٹی کنٹرول سسٹم ہوں۔ موجودہ گھریلو لیبارٹری کے ماحولیاتی حالات کے تحت، یہ ضروری ہے کہ معیاری پی سی آر لیبارٹری میں جانچ کی جائے اور قابل اعتماد لیبارٹری ٹیسٹنگ کے معیار کو یقینی بنانے کے لیے گھریلو اور بین الاقوامی انٹر روم کوالٹی کنٹرول سرگرمیوں میں حصہ لیا جائے۔ مستقل نتائج کو یقینی بنانے کے لیے معیاری انتظام ایک ضروری شرط ہے۔ چین میں، KRAS جین کی کلینیکل جانچ کو یکجا کرنے اور معیاری بنانے کی، اور مختلف ضروریات کے مطابق ایک معیاری اور معیاری ٹیسٹنگ پروگرام تیار کرنے کی فوری ضرورت ہے، اور اس پروگرام کو BRAF، PIK23450_3CA، EGFR اور اس کی تشخیص تک بڑھایا جا سکتا ہے۔ دوسرے جین کلینیکل مالیکیولر پیتھالوجی ٹیسٹنگ کو فروغ دینے کے لیے۔
