কলোরেক্টাল ক্যান্সারের জন্য কেআরএএস জিনের রূপান্তর পদ্ধতির প্রয়োগ ও মূল্যায়ন

ক্লিনিকে কোলোরেক্টাল ক্যান্সারের জন্য কার্যকর থেরাপিউটিক ওষুধ হিসাবে সেটুক্সিমাব এবং প্যানিটুমুমাবের মতো লক্ষ্যবস্তু ওষুধগুলি ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়েছে। ক্লিনিকাল ডেটা দেখায় যে KRAS মিউটেশনের রোগীদের এই মনোক্লোনাল অ্যান্টিবডি ড্রাগের কোনও উল্লেখযোগ্য প্রভাব নেই এবং শুধুমাত্র বন্য ধরনের রোগীরা এটি থেকে উপকৃত হতে পারেন। অতএব, কেআরএএস জিন মিউটেশন স্ট্যাটাসকে ক্লিনিক্যালি একটি গুরুত্বপূর্ণ থেরাপিউটিক মার্কার হিসাবে বিবেচনা করা হয়, যা কোলোরেক্টাল ক্যান্সারের পূর্বাভাস এবং চিকিত্সার প্রভাবের সাথে একটি শক্তিশালী সম্পর্ক রয়েছে। 2009 ন্যাশনাল ক্যান্সার কম্প্রিহেনসিভ নেটওয়ার্ক (NCCN) কোলোরেক্টাল ক্যান্সার ক্লিনিকাল প্র্যাকটিস নির্দেশিকা নির্দেশ করে যে মেটাস্ট্যাটিক কোলোরেক্টাল ক্যান্সারের সমস্ত রোগীদের অবশ্যই KRAS জিন মিউটেশনের অবস্থা সনাক্ত করতে হবে এবং শুধুমাত্র KRAS বন্য ধরনের EGFR টার্গেটেড থেরাপি গ্রহণের সুপারিশ করা হয়। একই বছরে, আমেরিকান সোসাইটি অফ ক্লিনিক্যাল অনকোলজি (ASCO) টিউমার টার্গেটেড থেরাপির জন্য একটি আণবিক মার্কার হিসাবে একই ক্লিনিকাল চিকিত্সা সুপারিশ জারি করেছে, যা এর গুরুত্বপূর্ণ নির্দেশক তাত্পর্য দেখায়। বর্তমানে, কেআরএএস জেনেটিক পরীক্ষা ব্যাপকভাবে ক্লিনিক্যালি করা হয়েছে। আমরা প্রধানত ক্লিনিকাল নির্বাচনে রেফারেন্সের জন্য গার্হস্থ্য KRAS জিন মিউটেশন সনাক্তকরণ পদ্ধতিগুলি মূল্যায়ন করি।

1. কলোরেক্টাল ক্যান্সারে কেআরএএস জিনের পরিবর্তনের ইতিবাচক হার

কোলোরেক্টাল ক্যান্সারে, কেআরএএস জিনের রূপান্তরকরণের হার 35% থেকে 45% পর্যন্ত উচ্চতর হয়, এবং উচ্চ-ঝুঁকির মিউটেশন সাইটের এক্সোন 12 তে কোডন 13 এবং 2 হয় এবং এখনও 61 এবং 146 এর মতো বিরল রয়েছে M সাইট সরাসরি সিকোয়েন্সিং, উচ্চ রেজোলিউশন গলনা বাঁকানো বিশ্লেষণ (এইচআরএম), পাইরোসেকেন্সিং, পরিমাণগত পিসিআর, মিউটেশন এমপ্লিফিকেশন ব্লক সিস্টেম (এমপ্লিনিক এটিও) নেরেফ্যাক্টরিমিউটেশন সিস্টেম (এআরএমএস), সীমাবদ্ধতা খণ্ড দৈর্ঘ্য পলিমারফিজম (আরএফএলপি), পলিমারেজ চেইন রিঅ্যাকশন-সিঙ্গল-স্ট্র্যান্ড কনফর্মেশন পলিমর্ফিজম অ্যানালাইসিস (পিসিআর-সিঙ্গেলস্ট্র্যান্ড কনফোমেশন পলিমারফিজম (পিসিআর-এসএসসিপি), নিম্ন-স্বচ্ছন্নতা তাপমাত্রা পিসিআর (কোল্ড-পিসিআর) এবং উচ্চ-কার্যকারিতা তরল ক্রোমাটোগ্রাফি বিশ্লেষণ ইত্যাদিতে সহ-পরিবর্ধন ইত্যাদি

২. কেআরএএস রূপান্তর সনাক্তকরণ পদ্ধতির মূল্যায়ন

1. ডাইরেক্ট সিকোয়েন্সিং পদ্ধতি: এটি কেআরএএস জিন রূপান্তর সনাক্তকরণের জন্য সবচেয়ে সর্বোত্তম পদ্ধতি এবং জিন রূপান্তর সনাক্তকরণের জন্য এটি সোনার মান standard ডাইডক্সি সিকোয়েন্সিংয়ের নীতির উপর ভিত্তি করে সরাসরি সিকোয়েন্সিং পদ্ধতিটি বেজ শিখর মানচিত্রের আকারে জিন সিকোয়েন্সের পরিবর্তনকে সবচেয়ে স্বজ্ঞাতভাবে দেখায়। সনাক্তকরণের ধরনটি আরও বিস্তৃত এবং এটি প্রাচীনতম প্রয়োগকৃত মিউটেশন সনাক্তকরণ পদ্ধতিও। নতুন প্রজন্মের সিকোয়েন্সিং প্ল্যাটফর্মগুলির উত্থান সত্ত্বেও, দেশ-বিদেশের পণ্ডিতরা এখনও নতুন পদ্ধতির নির্ভরযোগ্যতা পরিমাপ এবং নির্ধারণের জন্য সরাসরি ক্রমগুলির ফলাফলকে স্কেল হিসাবে ব্যবহার করেন। গাও জিং এট আল। কলোরেক্টাল ক্যান্সারে আক্রান্ত 966 রোগীদের মধ্যে কেআরএএস এবং বিআরএফ জিন পরিবর্তনের সনাক্তকরণের জন্য সরাসরি ক্রম প্রয়োগ করা হয়েছে। এটি হ'ল কেআরএএস জিন পরিবর্তনেরও বিশ্লেষণ যা সাহিত্যে প্রকাশিত বৃহত্তম দেশীয় নমুনার সাথে রয়েছে। লিং ইউন এবং অন্যান্যরা বিশ্বাস করেন যে প্রত্যক্ষ অনুক্রমের পদ্ধতিটি প্রতিটি জিনের রূপান্তর পরিস্থিতি বোঝার জন্য সর্বাধিক প্রত্যক্ষ এবং কার্যকর সনাক্তকরণ পদ্ধতি যা বিশেষত অজানা পরিবর্তনের সনাক্তকরণের জন্য পরিব্যক্তির প্রকারটি পরিষ্কার করতে পারে। যদিও এই পদ্ধতির সংবেদনশীলতা তুলনামূলকভাবে কম, তবে এটি টিউমার কোষগুলিকে সমৃদ্ধ করার জন্য মাইক্রোডিসেকশনের মতো পদ্ধতি দ্বারা উন্নত করা যেতে পারে। সরাসরি সিকোয়েন্সিং পদ্ধতিটি অন্যান্য অভ্যন্তরীণ গবেষণা গোষ্ঠীতে আরও বড় নমুনা আকারের কেআরএএস সনাক্তকরণে প্রয়োগ করা হয়েছে to তবে নিম্ন সংবেদনশীলতা হ'ল সরাসরি সিকোয়েন্সিংয়ের বৃহত্তম অসুবিধা। চীনে রিপোর্ট করা ফলাফলগুলি বিচার করে, সরাসরি সিকোয়েন্সিংয়ের মাধ্যমে মিউটেশন সনাক্তকরণের হার কম নয়। লিউ জিয়াওজিং এট আল। ডাইরেক্ট সিকোয়েন্সিং এবং পেপটাইড নিউক্লিক অ্যাসিড ক্ল্যাম্প পিসিআর (পিএনএ-পিসিআর) তুলনা করে দেখা গেছে যে কেআরএএস জিনের মিউটেশনগুলির 43 টি ঘটনা সরাসরি সিকোয়েন্সিংয়ের মাধ্যমে সনাক্ত করা হয়েছিল। এই রূপান্তরগুলি ছাড়াও, পিএনএ-পিসিআর সরাসরি সিকোয়েন্সিংয়ের মাধ্যমেও সনাক্ত করা হয়েছিল। দশটি মিউটেশন বন্য প্রকারের মধ্যে পাওয়া গেছে এবং পিসিআর দ্বারা বন্য ধরণের রোগীদের নির্ধারণ করার জন্য এবং মিউট্যান্ট রোগীদের নির্ধারণের জন্য সরাসরি সিকোয়েন্সিং পদ্ধতির পরামর্শ দেওয়া হয়েছিল। কিউ তিয়ান এট আল। ফ্লোরোসেন্ট পিসিআর-অপ্টিমাইজড অলিগোনুক্লিওটাইড প্রোব পদ্ধতি এবং সরাসরি সিকোয়েন্সিং পদ্ধতি দ্বারা 131 কোলোরেক্টাল ক্যান্সার নমুনাগুলি সনাক্ত করা হয়েছে এবং কেআরএএস জিনের মিউটেশনের ইতিবাচক হার ছিল 41.2% (54/131) এবং 40.5% (53/131))। বাই ডংইউ বিভিন্ন পদ্ধতির সনাক্তকরণ সংবেদনশীলতা নিয়েও আলোচনা করেছিলেন। কলোরেক্টাল ক্যান্সারের 200 রোগীর মধ্যে 63 টি আরটি-কিউপিআরসি রূপান্তর দ্বারা সনাক্ত করা হয়েছিল এবং মিউটেশন সনাক্তকরণের হার ছিল 31.5%; 169 নমুনাগুলি সাফল্যের সাথে 50 টি কেস মিউটেশন, মিউটেশন সনাক্তকরণের হার 29.6% এর ক্রমক্রমে সফলভাবে সিকোয়েন্স করা হয়েছিল। যদিও সরাসরি সিকোয়েন্সিং পদ্ধতিটি নির্ভুলভাবে, উদ্দেশ্যমূলকভাবে এবং নির্দিষ্টভাবে কেআরএএস জিনের পরিবর্তনের স্থিতি সনাক্ত করতে পারে, এর ত্রুটিগুলি যেমন উচ্চ প্রযুক্তিগত প্রয়োজনীয়তা, জটিল অপারেশন পদ্ধতি, ক্রস-দূষণের কারণ সহজ, এবং সময়সাপেক্ষ এবং ফলাফলগুলির শ্রমসাধ্য ব্যাখ্যাও খুব খুব স্পষ্ট। প্রায়শই কোনও সিকোয়েন্সিং সরঞ্জাম নেই, এবং নমুনাটি পরীক্ষার জন্য সংশ্লিষ্ট সংস্থায় প্রেরণ করা প্রয়োজন, এটি একটি দীর্ঘ সময় নেয় এবং একটি উচ্চ ব্যয় হয়, তাই এর দুর্দান্ত সীমাবদ্ধতা রয়েছে।

পাইরোসেক্সিং পদ্ধতি:

ক্রাইভিং সংবেদনশীলতা, সনাক্তকরণের ব্যয় এবং রিপোর্ট করার সময় বিবেচনা করে কেআরএএস জিনের মিউটেশন সনাক্তকরণের জন্য পাইরোসোকেন্সিং পদ্ধতিটি আরও সুবিধাজনক পদ্ধতি। এই পদ্ধতির পুনরাবৃত্তিযোগ্যতা আরও ভাল। প্রাপ্ত শিখর মানচিত্র অনুসারে একটি নির্দিষ্ট সাইটের রূপান্তর ফ্রিকোয়েন্সি এর পরিমাণগত অধ্যয়ন এবং বিভিন্ন সাইটের রূপান্তর ফ্রিকোয়েন্সিগুলির মধ্যে তুলনা এক নজরে পরিষ্কার। সাম্প্রতিক বছরগুলিতে, ওগিনো এট আল।, হাচিনস এট আল। কলোরেক্টাল ক্যান্সারের বড় নমুনাযুক্ত রোগীদের মধ্যে কেআরএএস রূপান্তর পরীক্ষা করার জন্য পাইরোসেকেন্সিং প্রযুক্তি ব্যবহার করেছেন। ফলাফলগুলি ইঙ্গিত দেয় যে পাইরোসেক্সেন্সিং প্রযুক্তি লক্ষ্যযুক্ত থেরাপির জন্য রোগীদের স্ক্রীনিং করার জন্য একটি শক্তিশালী সরঞ্জাম। টিউমার মলিকুলার নির্ণয়ের ব্যাপক প্রয়োগের সম্ভাবনা রয়েছে। ঘরোয়া পণ্ডিতরাও ক্লোরেক্টাল ক্যান্সারে কেআরএএস রূপান্তরগুলি ক্লিনিকভাবে সনাক্ত করতে ভাল নির্ভুলতা এবং নির্ভরযোগ্যতার সাথে পাইরোসেক্সেন্সিং প্রযুক্তি ব্যবহার করেছেন। এই পদ্ধতিতে আরও ভাল নির্দিষ্টতা এবং উচ্চতর সংবেদনশীলতা রয়েছে। সুন্দস্ট্রোম এট আল। ক্লিনিকাল অ্যাপ্লিকেশনগুলিতে অ্যালালিক-নির্দিষ্ট পিসিআর এবং পাইরোসেক্সেন্সিংয়ের তুলনা করে এবং দেখতে পেয়েছেন যে কোলোরেক্টাল ক্যান্সার রোগীদের মধ্যে কেআরএএস রূপান্তরগুলির 314 ক্ষেত্রে, পাইরোসোকেন্সিংয়ের বৈশিষ্ট্যটি অ্যালিলের চেয়ে বেশি ছিল। পিসিআর, এবং কম টিউমার সেল সামগ্রী সহ টিস্যুগুলির প্রতি ভাল সংবেদনশীলতা রয়েছে। টিউমার কোষের অনুপাত 1.25% থেকে 2.5% এ সরান। পাইরোসেক্সেন্সিং এখনও মিউটেশন সংকেত সনাক্ত করতে পারে। স্যাঙ্গার সিকোয়েন্সিংয়ের মাধ্যমে যখন নমুনায় মিউট্যান্ট অ্যালিলের ন্যূনতম সামগ্রীটি সনাক্ত করতে 20% পৌঁছানোর প্রয়োজন হয়, তখন এটি এইচআরএম পদ্ধতি দ্বারা 10% এ পৌঁছানো যায় এবং পাইরোসোকেন্সিংয়ের জন্য কেবল মিউটেশনগুলি 5% দ্বারা সনাক্ত করা যায়। অ্যালেলেস আমরা কলোরেক্টাল ক্যান্সারে আক্রান্ত 717 রোগীদের মধ্যে কেআরএএস রূপান্তর সনাক্ত করতে পাইরোসেকেন্সিং ব্যবহার করেছি এবং দেখেছি যে কেআরএএস রূপান্তরের 40.9% হার ছিল। কোডন 12 এর মিউটেশনের হার ছিল 30.1%, কোডন 13 এর রূপান্তর হার 9.8%, এবং কোডনের 61 এর পরিবর্তনের হার ছিল 1.0%। আমরা পরীক্ষার আগে ম্যানুয়াল মাইক্রোডিস্কেশন দ্বারা টিউমারগুলিকে উচ্চতর টিউমার সমৃদ্ধ করেছিলাম, ফলাফলগুলি আরও নির্ভরযোগ্য করে তুলেছি। পদ্ধতিতে ভাল সংবেদনশীলতা এবং নির্দিষ্টতা রয়েছে এবং ক্লিনিকাল অনুশীলনে বিকাশ করা সহজ। পাইরোসেকেন্সিংয়ের অসুবিধাগুলি সনাক্তকরণের উচ্চ ব্যয় এবং নমুনা সিকোয়েন্সিংয়ের জন্য একক-স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএ প্রস্তুত করার প্রক্রিয়াটি জটিল। ভবিষ্যতে পাইরোসোকেন্সিং ডাবল স্ট্র্যান্ডেড পিসিআর পণ্যগুলির সরাসরি সনাক্তকরণের জন্য প্রযুক্তির বিকাশে উত্সর্গ করা যেতে পারে, যা অপারেশনটিকে ব্যাপকভাবে সরল করবে। এবং ক্লিনিকাল পরীক্ষার ব্যাপক প্রচার অর্জনের জন্য সিকোয়েন্সিংয়ের ব্যয়কে কার্যকরভাবে হ্রাস করুন।

৩.আরএমএস পদ্ধতি:

এই প্রযুক্তিটি বন্য-প্রকার এবং মিউট্যান্ট জিনগুলির মধ্যে পার্থক্য করার জন্য প্রাইমার ব্যবহার করে wh
আইচ 1980 এর দশকের প্রথম দিকে রিপোর্ট করা হয়েছিল। এই পদ্ধতির সর্বাধিক সুবিধা হ'ল এটির সংবেদনশীলতা 1.0% অবধি রয়েছে এবং এটি নমুনায় 1.0% এর চেয়ে কম মিউট্যান্ট জিনগুলি সনাক্ত করতে পারে। নকশায়, লক্ষ্য পণ্যটির দৈর্ঘ্য সর্বাধিক পরিমাণে সংক্ষিপ্ত করা যায় এবং সঠিক সনাক্তকরণের ফলাফল পাওয়া যায় না কারণ প্যারাফিন-এমবেডেড টিস্যু নমুনা থেকে প্রাপ্ত বেশিরভাগ ডিএনএ খণ্ডিত হয়। পরিবর্ধনের সময় ক্লোজড টিউব অপারেশন অর্জন করতে এই প্রযুক্তিটি রিয়েল-টাইম পিসিআর প্ল্যাটফর্মকে একত্রিত করে। অপারেশনটি সহজ এবং পণ্যের পোস্ট প্রসেসিংয়ের প্রয়োজন হয় না, যা পরিবর্ধিত পণ্যের দূষণকে সর্বাধিক পরিমাণে এড়াতে পারে। বর্তমানে, বৃশ্চিক অনুসন্ধান এবং এমপ্লিফিকেশন ব্লক মিউটেশন সিস্টেমের সমন্বয়ে বিচ্ছু-এআরএমএস পদ্ধতি বিশ্বে বেশি ব্যবহৃত হয়। দুটি প্রযুক্তির সংমিশ্রণ উভয় পক্ষের সংবেদনশীলতা এবং নির্দিষ্টতা সর্বাধিক করে তুলতে পারে। গাও জি এট আল। কলোরেক্টাল ক্যান্সারে আক্রান্ত 167 রোগীদের মধ্যে কেআরএএস জিনের পরিবর্তনের স্থিতি সনাক্ত করতে এই পদ্ধতিটি ব্যবহার করুন, এই পদ্ধতিটি নির্ভরযোগ্য এবং নির্ভুল বলে প্রস্তাব দিচ্ছে। ওয়াং হুই এট আল। ফর্মালডিহাইড-ফিক্সড এবং প্যারাফিন-এমবেডেড টিস্যুগুলির 151 ক্ষেত্রে কেআরএএস মিউটেশন সনাক্ত করতে আরএমএস ব্যবহার করেছেন used মার্কিন যুক্তরাষ্ট্রে ইউরোপীয় ইউনিয়ন ইন ভিট্রো ডায়াগনস্টিকস (সিই-আইভিডি) দ্বারা প্রত্যক্ষিত কেআরএএস এবং থেরাস স্ক্রিন আরজিকিউ কিট (কিয়াজেন) এর ক্লিনিকাল পরীক্ষার জন্য এফডিএ দ্বারা অনুমোদিত সিওবিএস কিট (রোচে) সবাই এআরএমএস নীতিটি ব্যবহার করে। সাধারণ পদ্ধতির মধ্যে, এআরএমএস পদ্ধতিটি সর্বাধিক সংবেদনশীল এবং ব্যয় তুলনামূলক যুক্তিসঙ্গত। সুতরাং, দেশ-বিদেশের কেআরএএস জিনগুলির ক্লিনিকাল সনাক্তকরণের একটি বড় অংশটি এআরএমএস পদ্ধতি ব্যবহার করছে, তবে পদ্ধতিটি পিসিআর প্রযুক্তির উপর ভিত্তি করে, এর ঘাটতিটি হ'ল এটি কেবল পরিচিত সাইট মিউটেশনগুলি সনাক্ত করা যায়।

৪. রিয়েল-টাইম ফ্লুরোসেন্সের পরিমাণগত পিসিআর পদ্ধতি:

এটি একটি পিসিআর-ভিত্তিক সনাক্তকরণ পদ্ধতি যা Ct মান দ্বারা মিউটেশন নির্ধারণ করে। এটিতে শক্তিশালী নির্দিষ্টতা, উচ্চ সংবেদনশীলতা, সঠিক পরিমাণ নির্ধারণ, সহজ অপারেশন এবং সম্পূর্ণরূপে বন্ধ প্রতিক্রিয়ার সুবিধা রয়েছে। অনেক পরীক্ষামূলক গোষ্ঠী কোলোরেক্টাল ক্যান্সারে KRAS মিউটেশন সনাক্তকরণের জন্য এই পদ্ধতিটি গ্রহণ করেছে। সরাসরি সিকোয়েন্সিং পদ্ধতির সাথে তুলনা করে, পরিমাণগত পিসিআর সংবেদনশীলতার একটি বড় সুবিধা দখল করে। দুটি পদ্ধতির তুলনাকারী বেশিরভাগ পণ্ডিতরা বিশ্বাস করেন যে পরিমাণগত পিসিআর আরও সংবেদনশীল। লিউ ওয়েই এট আল। কোলোরেক্টাল ক্যান্সারের KRAS জিন মিউটেশনের 280টি ক্ষেত্রে, KRAS জিন সিকোয়েন্সিং মিউটেশনের 94টি ক্ষেত্রে সনাক্তকরণের ফলাফলের বিস্তারিত বিশ্লেষণ করতে দুটি পদ্ধতি ব্যবহার করা হয়েছে, ইতিবাচক হার ছিল 33.57% (94/280), যার মধ্যে, রিয়েল-টাইম ফ্লুরোসেন্স পরিমাণগত পিসিআর ইতিবাচক ছিল 91 ক্ষেত্রে সংবেদনশীলতা 96.8% (91/94)। 186টি জিন সিকোয়েন্সিং ওয়াইল্ড-টাইপ কেসের মধ্যে, 184টি রিয়েল-টাইম পরিমাণগত পিসিআর দ্বারা নেতিবাচক ছিল, যার নির্দিষ্টতা 98.9% (184/186)। রিয়েল-টাইম ফ্লুরোসেন্স পরিমাণগত পিসিআর পদ্ধতি এবং সরাসরি জিন সিকোয়েন্সিং পদ্ধতির মধ্যে কাকতালীয় হার ছিল 98.2%। দুটি সনাক্তকরণ পদ্ধতিতে, প্রতিটি মিউটেশন সাইটের ইতিবাচক এবং নেতিবাচক কাকতালীয় হার 90% এর উপরে ছিল এবং চারটি সাইটের কাকতালীয় হার 100% পৌঁছেছে। দুটি পদ্ধতির সনাক্তকরণের ফলাফলগুলি অত্যন্ত সামঞ্জস্যপূর্ণ ছিল, যা ফ্লুরোসেন্ট পরিমাণগত পিসিআর নির্দেশ করে এটি মিউটেশন সনাক্তকরণের জন্য আরও নির্ভরযোগ্য পদ্ধতি। যাইহোক, পিসিআর-ভিত্তিক পদ্ধতিতে পরিচিত মিউটেশনের ধরনগুলির উপর ভিত্তি করে প্রাইমার এবং প্রোবের ডিজাইন করা প্রয়োজন, তাই সমস্ত সম্ভাব্য মিউটেশন সনাক্ত করা যায় না এবং শুধুমাত্র নির্দিষ্ট সাইটগুলি সনাক্ত করা যায়। যদি একটি নির্দিষ্ট সাইট কিটের সনাক্তকরণ পরিসরে অন্তর্ভুক্ত না হয়, এমনকি যদি বাস্তবে একটি মিউটেশন থাকে তবে কিটের ফলাফল এখনও নেতিবাচক। উপরন্তু, যদিও পরিমাণগত পিসিআর-এর সংবেদনশীলতা বেশি, তবুও ডিএনএ সিকোয়েন্সিং প্রযুক্তির মাধ্যমে মিথ্যা পজিটিভ আছে কিনা তা যাচাই করা দরকার, অথবা কেআরএএস মিউটেশন স্ট্যাটাস এবং টার্গেটের কার্যকারিতার মধ্যে পারস্পরিক সম্পর্ক নিশ্চিত করার জন্য বড় নমুনা আকারের সাথে পূর্ববর্তী এবং সম্ভাব্য ক্লিনিকাল পরীক্ষা-নিরীক্ষা করা প্রয়োজন। ওষুধের . অতএব, মিউটেশন সনাক্তকরণের উচ্চ সংবেদনশীলতা অন্ধভাবে অনুসরণ করা উচিত নয়, যখন সনাক্তকরণের নির্দিষ্টতা এবং নির্ভুলতা উপেক্ষা করা উচিত। বিভিন্ন পরীক্ষাগারের অবস্থার অধীনে, নমুনাগুলিতে মিউটেশন সনাক্তকরণের জন্য সর্বোত্তম পদ্ধতিও ভিন্ন হতে পারে। মিউটেশনের উচ্চ অনুপাতের নমুনার জন্য, সেঙ্গার সিকোয়েন্সিং পদ্ধতিতে জিন মিউটেশন সনাক্তকরণে উচ্চতর নির্ভুলতা রয়েছে, অন্যদিকে মিউটেশনের কম অনুপাতের নমুনার ক্ষেত্রে, সেঞ্জার সিকোয়েন্সিং পদ্ধতিতে মিথ্যা নেতিবাচক হতে পারে, এবং প্রযুক্তিগত প্ল্যাটফর্ম হিসাবে ফ্লুরোসেন্ট পিসিআর ব্যবহার করে সনাক্তকরণ পদ্ধতি। উচ্চ সংবেদনশীলতা দ্বারা চিহ্নিত করা যেতে পারে।

৫. এইচআরএম পদ্ধতি:

সাম্প্রতিক বছরগুলিতে এটি সাধারণত ব্যবহৃত জিন সনাক্তকরণ পদ্ধতিগুলির মধ্যে একটি methods দূষণ এড়ানোর জন্য এর সহজ, দ্রুত, সংবেদনশীল এবং একক নলের সুবিধা রয়েছে। ক্লিনিকাল টেস্টিংয়ে এটির ব্যবহারের সম্ভাব্যতাটি অনুসন্ধান করার জন্য, লিউ লিকিন এবং অন্যান্যরা কোলোরেক্টাল ক্যান্সারে আক্রান্ত 64 রোগীদের মধ্যে কেআরএএস জিন পরিবর্তনগুলি সনাক্ত করতে এইচআরএম পদ্ধতি ব্যবহার করেছিলেন এবং ফলাফলগুলি যাচাই করার জন্য সরাসরি ক্রম ব্যবহার করেছিলেন। এইচআরএম এবং ডাইরেক্ট সিকোয়েন্সিংয়ের ফলাফলগুলি সামঞ্জস্যপূর্ণ বলে প্রমাণিত হয়েছে। সরাসরি সিকোয়েন্সিংয়ের সাথে তুলনা করে, এইচআরএম দ্বারা কেআরএএস জিন পরিবর্তনের সনাক্তকরণ সহজ এবং নির্ভুল, এটি পরামর্শ দেয় যে এটি ক্লিনিকাল পরীক্ষার জন্য উপযুক্ত একটি নির্ভরযোগ্য পদ্ধতি। চেন জিহং এট আল। এইচআরএম পদ্ধতিটি সংবেদনশীলতা মূল্যায়নের জন্য কেআরএএস মিউট্যান্ট প্লাজমিডগুলির বিভিন্ন অনুপাত সমন্বিত মিশ্র নমুনাগুলির একটি সিরিজ পরীক্ষা করতে ব্যবহার করুন। দেখা গেছে যে মিশ্র নমুনায় প্লাজমিড মিউটেশনের অনুপাত 10%, এবং সংবেদনশীলতা 10% এ পৌঁছেছিল। পরবর্তীকালে, পদ্ধতিটি কলোরেক্টাল ক্যান্সার টিস্যু নমুনায় কেআরএএস জিন পরিবর্তনগুলি সনাক্ত করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। সরাসরি সিকোয়েন্সিং পদ্ধতির সাথে তুলনা করে এইচআরএম পদ্ধতির সংবেদনশীলতা ছিল 60%, এবং নির্দিষ্টকরণটি ছিল 100% (96/43)। এইচআরএম পদ্ধতির অসুবিধাটি হ'ল নির্দিষ্ট মিউটেশন টাইপটি সঠিকভাবে সরবরাহ করা অসম্ভব এবং কোন কোডনটি রূপান্তরিত। গলে যাওয়া কার্ভে যদি কোনও অস্বাভাবিকতা পাওয়া যায়, তবে মিউটেশনটির ধরণ নির্ধারণের জন্য সিকোয়েন্সিং পদ্ধতি প্রয়োজন। হারলি গবেষণা গ্রুপ ফ্লুরোসেন্ট পিসিআর, এআরএমএস এবং এইচআরএম পদ্ধতিগুলির তুলনা করতে কলোরেক্টাল ক্যান্সার টিস্যুগুলির 45 টি ক্ষেত্রে ব্যবহার করেছিল। ফলাফলগুলি সুপারিশ করে যে তিনটি পদ্ধতি ক্লিনিকাল পরীক্ষার জন্য উপযুক্ত, এইচআরএম এর নির্ভরযোগ্যতা অন্যান্য দুটি পদ্ধতির মতো তত ভাল নয়।

Other. অন্যান্য পদ্ধতি:

উল্লিখিত পদ্ধতিগুলি ছাড়াও, অন্যান্য সনাক্তকরণ পদ্ধতির প্রয়োগের নিজস্ব সুবিধা এবং অসুবিধাগুলি রয়েছে, যেমন পিসিআর-এসএসসিপি, উচ্চ কার্যকারিতা তরল ক্রোমাটোগ্রাফি, ফ্লোরোসেন্ট পিসিআর-অপ্টিমাইজড অলিগোনোক্লাইটাইড প্রোব পদ্ধতি, নেস্টেড পিসিআর এবং এআরএমএস সমন্বয়ের পদ্ধতি, কোল্ড-পিসিআর পদ্ধতি, ইত্যাদি উচ্চ কার্যকারিতা তরল ক্রোমাটোগ্রাফির দৃ strong় সুনির্দিষ্টতা রয়েছে তবে নমুনার চাহিদা বড়; পিসিআর-এসএসসিপি ব্যয় এবং অর্থনৈতিকভাবে কম, তবে অপারেশন জটিল; ফ্লুরোসেন্ট পিসিআর ভিত্তিক মিউটেশন সনাক্তকরণ প্রযুক্তির দৃ strong় স্বাতন্ত্র্য, উচ্চ সংবেদনশীলতা এবং সঠিক পরিমাণগত, সহজ অপারেশন, সম্পূর্ণরূপে অবরুদ্ধ প্রতিক্রিয়া এবং অন্যান্য সুবিধাগুলি রয়েছে, তবে সকলকে পরিচিত মিউটেশন টাইপ অনুযায়ী প্রাইমার এবং প্রোব ডিজাইন করা প্রয়োজন, সুতরাং কেবল নির্দিষ্ট সাইটগুলিই হতে পারে সনাক্ত করা হয়েছে এবং সমস্ত সম্ভাব্য মিউটেশন সনাক্ত করা যায় না।

3। সারাংশ

সংক্ষেপে, যেহেতু বিভিন্ন পরীক্ষাগারে মিউটেশন সাইটগুলি এবং সনাক্তকরণের পদ্ধতিগুলি অভিন্ন নয়, তাই টিউমার নমুনাগুলির আকার বিশ্লেষণ করা হয় এবং ডিএনএ নিষ্কাশনের গুণাগুণও অসম হয়, ফলশ্রুতিতে পরীক্ষাগারের মধ্যে বৃহত বা ছোট পরীক্ষামূলক ফলাফলের অস্তিত্ব, মানককরণ কেআরএএস জিনের রূপান্তর সনাক্তকরণ বিভিন্ন দেশে উদ্বেগের একটি ক্লিনিকাল সনাক্তকরণের বিষয় হয়ে দাঁড়িয়েছে। বর্তমানে কেআরএএস জিনে মিউটেশন সনাক্তকরণের জন্য অনেকগুলি পদ্ধতি রয়েছে। উচ্চ থেকে নিম্ন থেকে সংবেদনশীলতা হ'ল এআরএমএস, পাইরোসেকেন্সিং, এইচআরএম, রিয়েল-টাইম পরিমাণগত পিসিআর এবং সরাসরি সিকোয়েন্সিং। ক্লিনিকাল বাস্তবতা থেকে, নিম্ন সংবেদনশীলতা ক্লিনিকাল চিকিত্সার পক্ষে অনুকূল নয়, তবে খুব সংবেদনশীল পদ্ধতিগুলি সনাক্তকরণের সুনির্দিষ্টতা হ্রাস করতে পারে এবং অপ্রয়োজনীয় মিথ্যা ইতিবাচক ফলাফলগুলি দেখা দিতে পারে এবং রোগীর পরবর্তী ওষুধের প্রভাবকে প্রভাবিত করতে পারে। উপরের দিকগুলি বিবেচনা করে, এফডিএ দ্বারা অনুমোদিত পদ্ধতির সাথে মিলিত হয়ে এআরএমএস পদ্ধতিটি সুপারিশ করা হয়। অবশ্যই, বাজারের দৃষ্টিকোণ থেকে, আণবিক ডায়াগনস্টিকগুলিতে আমাকে জোর দেওয়া উচিত নয়
thods, কিন্তু চূড়ান্ত সঠিক ফলাফল ফোকাস. বিভিন্ন পরীক্ষাগার প্রকৃত পরিস্থিতি অনুযায়ী উপযুক্ত পরীক্ষার পদ্ধতি অবলম্বন করতে পারে, তবে শুধুমাত্র যদি তাদের ভাল অপারেটর যোগ্যতা এবং অভ্যন্তরীণ মান নিয়ন্ত্রণ ব্যবস্থা থাকে। বর্তমান গার্হস্থ্য পরীক্ষাগার পরিবেশগত অবস্থার অধীনে, নির্ভরযোগ্য পরীক্ষাগার পরীক্ষার মান নিশ্চিত করার জন্য একটি প্রমিত PCR পরীক্ষাগারে পরীক্ষা করা এবং দেশীয় ও আন্তর্জাতিক আন্তঃ-কক্ষ মান নিয়ন্ত্রণ কার্যক্রমে অংশগ্রহণ করা প্রয়োজন। স্থির ফলাফল নিশ্চিত করার জন্য মানসম্মত ব্যবস্থাপনা একটি প্রয়োজনীয় শর্ত। চীনে, KRAS জিনের ক্লিনিকাল টেস্টিংকে একীভূত এবং মানসম্মত করার জরুরী প্রয়োজন আছে, এবং বিভিন্ন প্রয়োজন অনুসারে একটি প্রমিত ও প্রমিত পরীক্ষার প্রোগ্রাম তৈরি করা, এবং এই প্রোগ্রামটিকে BRAF, PIK23450_3CA, EGFR এবং সনাক্তকরণ পর্যন্ত প্রসারিত করা যেতে পারে। ক্লিনিকাল আণবিক প্যাথলজি পরীক্ষার প্রচারের জন্য অন্যান্য জিন।