કોલોરેક્ટલ કેન્સર માટે કેઆરએએસ જનીન પરિવર્તનની પદ્ધતિની એપ્લિકેશન અને મૂલ્યાંકન

Targeting drugs such as cetuximab and panitumumab have been widely used in clinic as effective therapeutic drugs for colorectal cancer. Clinical data show that patients with KRAS mutations have no significant effect on this monoclonal antibody drug, and only wild-type patients can benefit from it. Therefore, the KRAS gene mutation status is clinically regarded as an important therapeutic marker, which has a strong correlation with the prognosis and treatment effect of colorectal cancer. The 2009 National Cancer Comprehensive Network (NCCN) Colorectal Cancer Clinical Practice Guidelines stipulates that all patients with metastatic colorectal cancer must detect KRAS gene mutation status, and only KRAS wild type is recommended to receive EGFR targeted therapy. In the same year, the American Society of Clinical Oncology (ASCO) also issued the same clinical treatment  recommendations as a molecular marker for tumor targeted therapy, which shows its important guiding significance. At present, KRAS genetic testing has been widely carried out clinically. We mainly evaluate the domestic KRAS gene mutation detection methods for reference in clinical selection.

1. કોલોરેક્ટલ કેન્સરમાં કેઆરએએસ જનીન પરિવર્તનનો સકારાત્મક દર

કોલોરેક્ટલ કેન્સરમાં, કેઆરએએસ જનીનનું પરિવર્તન દર 35% થી 45% જેટલું highંચું છે, અને ઉચ્ચ જોખમવાળા પરિવર્તન સ્થળ એક્ઝોન 12 પર 13 અને 2 કોડન છે, અને હજી પણ 61 અને 146 જેવા દુર્લભ છે. સાઇટ. કેઆરએએસ જનીન પરિવર્તનો માટે ઘણી શોધ પદ્ધતિઓ છે, જેમાં સીધી સિક્વન્સિંગ, ઉચ્ચ રીઝોલ્યુશન મેલ્ટીંગ કર્વ વિશ્લેષણ (એચઆરએમ), પાયરોસેક્વિન્સીંગ, જથ્થાત્મક પીસીઆર, પરિવર્તન એમ્પ્લીફિકેશન બ્લ blockક સિસ્ટમ (એમ્પ્લીંક એટીઓ) નેરેફ્રેક્ટરીમીટેશન સિસ્ટમ (એઆરએમએસ), પ્રતિબંધ ફ્રેગમેન્ટ લંબાઈ પોલિમોર્ફિઝમ (આરએફએલપી), પોલિમરેઝ ચેન રિએક્શન-સિંગલ-સ્ટ્રાન્ડ કન્ફોર્મેશન પોલીમોર્ફિઝમ એનાલિસિસ (પીસીઆર-સિંગલસ્ટ્રાન્ડ કoન્ફોમેશન પ polલિમોર્ફિઝમ (પીસીઆર-એસએસસીપી)), નીચલા ડિએન્ટેરેશન ટેમેટુર પીસીઆર (કોલ્ડ-પીસીઆર) અને ઉચ્ચ-પ્રદર્શન લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી વિશ્લેષણ, વગેરેમાં સહ-એમ્પ્લીફિકેશન.

2. કેઆરએએસ પરિવર્તન શોધવાની પદ્ધતિઓનું મૂલ્યાંકન

1. સીધી અનુક્રમ પદ્ધતિ: કેઆરએએસ જનીન પરિવર્તનો શોધવા માટેની તે સૌથી ઉત્તમ પદ્ધતિ છે, અને જનીન પરિવર્તનને શોધવા માટે તે સુવર્ણ માનક પણ છે. ડાયોડoxક્સી સિક્વન્સીંગના સિદ્ધાંત પર આધારિત સીધી અનુક્રમ પદ્ધતિ, મોટા ભાગના સાહજિક રીતે બેઝ પીક નકશાના સ્વરૂપમાં જનીન ક્રમના ફેરફારને બતાવી શકે છે. શોધનો પ્રકાર વધુ વ્યાપક છે, અને તે વહેલી તકે લાગુ પરિવર્તન શોધવાની પદ્ધતિ પણ છે. નવી પે generationીના સિક્વન્સીંગ પ્લેટફોર્મ્સના ઉદભવ છતાં, દેશ-વિદેશના વિદ્વાનો હજી નવી પદ્ધતિની વિશ્વસનીયતાને માપવા અને નિર્ધારિત કરવા માટે સીધા ક્રમના પરિણામોનો ઉપયોગ કરે છે. ગાઓ જિંગ એટ અલ. કોલોરેક્ટલ કેન્સરવાળા 966 દર્દીઓમાં કેઆરએએસ અને બીઆરએએફ જનીન પરિવર્તનની તપાસ માટે સીધી અનુક્રમણિકા લાગુ કરી. આ સાહિત્યમાં નોંધાયેલા સૌથી મોટા સ્થાનિક નમૂના સાથે કેઆરએએસ જનીન પરિવર્તનનું વિશ્લેષણ પણ છે. લિંગ યૂન અને અન્ય લોકો માને છે કે પ્રત્યેક અનુક્રમ પદ્ધતિ દરેક જીનની પરિવર્તનની સ્થિતિને સમજવા માટે સૌથી સીધી અને અસરકારક શોધવાની પદ્ધતિ છે, જે પરિવર્તનના પ્રકારને સ્પષ્ટ કરી શકે છે, ખાસ કરીને અજાણ્યા પરિવર્તનની તપાસ માટે. આ પદ્ધતિની સંવેદનશીલતા પ્રમાણમાં ઓછી હોવા છતાં, તે ગાંઠના કોષોને સમૃદ્ધ બનાવવા માટે માઇક્રોડિસેક્શન જેવી પદ્ધતિઓ દ્વારા સુધારી શકાય છે. અન્ય સ્થાનિક સંશોધન જૂથોમાં મોટા નમૂનાના કદના કેઆરએએસ તપાસ માટે સીધી અનુક્રમ પદ્ધતિ પણ લાગુ કરવામાં આવી છે. જો કે, નીચી સંવેદનશીલતા એ સીધી અનુક્રમનો સૌથી મોટો ગેરલાભ છે. ચાઇનામાં રિપોર્ટ કરેલા પરિણામોને ધ્યાનમાં રાખીને, સીધા ક્રમ દ્વારા પરિવર્તન શોધવાનો દર ઓછો નથી. લિયુ ઝિયાઓજિંગ એટ અલ. સીધા અનુક્રમણિકા અને પેપ્ટાઇડ ન્યુક્લિક એસિડ ક્લેમ્પ પીસીઆર (પીએનએ-પીસીઆર) ની તુલના કરી અને જાણવા મળ્યું કે સીઆર સીક્વન્સીંગ દ્વારા કેઆરએએસ જનીન પરિવર્તનના 43 કેસ મળી આવ્યા છે. આ પરિવર્તનો ઉપરાંત, સીધા ક્રમ દ્વારા પી.એન.એ.-પી.સી.આર. દસ પરિવર્તનો જંગલી પ્રકારમાં મળી આવ્યા હતા, અને પીસીઆર દ્વારા જંગલી પ્રકારનાં દર્દીઓ નક્કી કરવા અને મ્યુટન્ટ દર્દીઓ નક્કી કરવા માટેની સીધી અનુક્રમણિકા સૂચનો સૂચવવામાં આવ્યા હતા. કિયુ ટિયાન એટ અલ. ફ્લોરોસન્ટ પીસીઆર-optimપ્ટિમાઇઝ્ડ ઓલિગોન્યુક્લિયોટાઇડ પ્રોબ પદ્ધતિ અને સીધી અનુક્રમ પદ્ધતિ દ્વારા 131 કોલોરેક્ટલ કેન્સરના નમુનાઓ શોધી કા K્યા, અને કેઆરએએસ જનીન પરિવર્તનનો સકારાત્મક દર 41.2% (54/131) અને 40.5% (53/131) હતો. બાઇ ડોંગયુએ વિવિધ પદ્ધતિઓની તપાસ સંવેદનશીલતા અંગે પણ ચર્ચા કરી. કોલોરેક્ટલ કેન્સરના 200 દર્દીઓમાંથી, 63 આરટી-ક્યુપીસીઆર પરિવર્તન દ્વારા શોધી કા ;વામાં આવ્યા હતા, અને પરિવર્તન તપાસ દર 31.5% હતો; પરિવર્તનના 169 કેસો, પરિવર્તન શોધ દર 50% ની સીધી અનુક્રમણિકા દ્વારા 29.6 નમૂનાઓ સફળતાપૂર્વક અનુક્રમે બનાવવામાં આવ્યા હતા. તેમ છતાં સીધી અનુક્રમણિકા પદ્ધતિ, નિશ્ચિતરૂપે અને ખાસ કરીને કેઆરએએસ જનીન પરિવર્તનની સ્થિતિ શોધી શકે છે, તેની ખામીઓ જેમ કે ઉચ્ચ તકનીકી આવશ્યકતાઓ, જટિલ કામગીરી પ્રક્રિયાઓ, ક્રોસ-દૂષણનું કારણ બનેલું સરળ, અને સમય માંગી લેનાર અને પરિશ્રમપૂર્ણ અર્થઘટન પણ ખૂબ જ છે. સ્પષ્ટ. મોટેભાગે કોઈ અનુક્રમ ઉપકરણો નથી, અને નમૂનાને સંબંધિત કંપનીને પરીક્ષણ માટે મોકલવાની જરૂર છે, જે લાંબો સમય લે છે અને તેની કિંમત વધારે છે, તેથી તેની ઘણી મર્યાદાઓ છે.

પિરોસેક્વેન્સીંગ પદ્ધતિ:

ક્રાયન્સિંગ સંવેદનશીલતા, તપાસ ખર્ચ અને રિપોર્ટ કરવા માટેના સમયની દ્રષ્ટિએ કેઆરએએસ જનીન પરિવર્તન શોધ માટે પિરોસેક્વેન્સિંગ પદ્ધતિ પણ વધુ અનુકૂળ પદ્ધતિ છે. આ પદ્ધતિની પુનરાવર્તનક્ષમતા વધુ સારી છે. પ્રાપ્ત શિખર નકશા અનુસાર ચોક્કસ સાઇટની પરિવર્તન આવર્તનનો જથ્થાત્મક અભ્યાસ અને વિવિધ સાઇટ્સના પરિવર્તન આવર્તન વચ્ચેની તુલના એક નજરમાં સ્પષ્ટ છે. તાજેતરનાં વર્ષોમાં, ઓજિનો એટ અલ., હચીન્સ એટ અલ. કોલોરેક્ટલ કેન્સરના મોટા નમૂનાઓ ધરાવતા દર્દીઓમાં કેઆરએએસ પરિવર્તનની ચકાસણી કરવા માટે પાયરોસેક્વિન્સીંગ ટેકનોલોજીનો ઉપયોગ કર્યો છે. પરિણામો સૂચવે છે કે પિરોસેક્વેન્સિંગ ટેકનોલોજી એ લક્ષિત ઉપચાર માટે દર્દીઓની તપાસ માટેનું એક શક્તિશાળી સાધન છે. ગાંઠના પરમાણુ નિદાનમાં વ્યાપક એપ્લિકેશનની સંભાવના છે. ઘરેલું વિદ્વાનોએ સારી ચોકસાઈ અને વિશ્વસનીયતા સાથે, કોલોરેક્ટલ કેન્સરમાં કેઆરએએસ પરિવર્તનને તબીબી રૂપે શોધવા માટે પાયરોસેક્વિન્સીંગ તકનીકનો પણ ઉપયોગ કર્યો છે. આ પદ્ધતિમાં વધુ સારી વિશિષ્ટતા અને ઉચ્ચ સંવેદનશીલતા છે. સુંદ્રેસ્મ એટ અલ. ક્લિનિકલ એપ્લિકેશન્સમાં એલિલિક-વિશિષ્ટ પીસીઆર અને પાયરોસેક્વિન્સીંગની તુલના કરી અને જાણવા મળ્યું કે કોલોરેક્ટલ કેન્સરના દર્દીઓમાં કેઆરએએસ પરિવર્તનના 314 કેસોમાં, પાયરોસેક્વિન્સીંગની વિશિષ્ટતા એલીલ્સ કરતા વધુ સારી હતી. પીસીઆર, અને ઓછી ગાંઠ કોષ સામગ્રી સાથેના પેશીઓ પ્રત્યે સારી સંવેદનશીલતા ધરાવે છે. ગાંઠ કોષોનું પ્રમાણ 1.25% થી 2.5% સુધી પાતળું કરો. પિરોસેક્વિન્સીંગ હજી પણ પરિવર્તન સંકેતો શોધી શકે છે. જ્યારે સેમ્પરમાં મ્યુટન્ટ એલીલ્સની ન્યૂનતમ સામગ્રીને સેન્જર સિક્વન્સીંગ દ્વારા શોધવાની 20% સુધી પહોંચવાની જરૂર હોય છે, ત્યારે તે એચઆરએમ પદ્ધતિ દ્વારા શોધી શકાય છે જ્યારે તે 10% સુધી પહોંચે છે, અને પિરોક્સેન્સીંગ માટે ફક્ત પરિવર્તનો 5% દ્વારા શોધી શકાય છે. એલેલીસ. અમે કોલોરેક્ટલ કેન્સર ધરાવતા 717 દર્દીઓમાં કેઆરએએસ પરિવર્તન શોધવા માટે પાયરોસેક્ન્સીંગનો ઉપયોગ કર્યો અને શોધી કા .્યું કે કેઆરએએસ પરિવર્તનની આવર્તન 40.9% હતી. કોડન 12 નો પરિવર્તન દર 30.1% હતો, કોડન 13 નો પરિવર્તન દર 9.8% હતો, અને કોડન 61 નો પરિવર્તન દર 1.0% હતો. અમે પરીક્ષણ કરતા પહેલાં મેન્યુઅલ માઇક્રોડિસેક્શન દ્વારા ઉચ્ચ ગાંઠની સામગ્રીવાળા પેશીઓને સમૃદ્ધ બનાવ્યા, પરિણામોને વધુ વિશ્વસનીય બનાવ્યું. પદ્ધતિમાં સારી સંવેદનશીલતા અને વિશિષ્ટતા છે, અને ક્લિનિકલ પ્રેક્ટિસમાં વિકાસ કરવો સરળ છે. પાયરોસેક્વિન્સીંગનું ગેરલાભ એ શોધવાની costંચી કિંમત છે, અને નમૂનાઓ અનુક્રમ માટે સિંગલ-સ્ટ્રેન્ડ ડીએનએ તૈયાર કરવાની પ્રક્રિયા બોજારૂપ છે. ભવિષ્યમાં, પિરોસેક્વિન્સીંગને ડબલ-વંચિત પીસીઆર ઉત્પાદનોની સીધી શોધ માટે તકનીકીના વિકાસમાં સમર્પિત કરી શકાય છે, જે કામગીરીને મોટા પ્રમાણમાં સરળ બનાવશે. અને ક્લિનિકલ પરીક્ષણના વ્યાપક પ્રમોશન પ્રાપ્ત કરવા માટે ક્રમની કિંમતને અસરકારક રીતે ઘટાડે છે.

3. એઆરએમએસ પદ્ધતિ:

આ તકનીકી વાઇલ્ડ-ટાઇપ અને મ્યુટન્ટ જનીનો વચ્ચે તફાવત જોવા માટે પ્રાઇમર્સનો ઉપયોગ કરે છે
1980 ના દાયકાની શરૂઆતમાં અહેવાલ આપવામાં આવ્યો છે. આ પદ્ધતિનો સૌથી મોટો ફાયદો એ છે કે તેમાં પ્રત્યેક 1.0% ની સંવેદનશીલતા છે અને તે નમૂનાઓમાં ઉત્તેજનાત્મક જનીનોને 1.0% જેટલા ઓછા શોધી શકે છે. ડિઝાઇનમાં, લક્ષ્ય પ્રોડક્ટની લંબાઈ સૌથી મોટી હદ સુધી ટૂંકી કરી શકાય છે, અને સચોટ તપાસ પરિણામ પ્રાપ્ત કરી શકતી સમસ્યા મેળવી શકાતી નથી, કારણ કે પેરાફિન-એમ્બેડેડ પેશીના નમૂનામાંથી કાractedવામાં આવેલા મોટાભાગના ડીએનએ ટુકડાઓ છે. આ તકનીકી એમ્પ્લીફિકેશન દરમિયાન ક્લોઝ-ટ્યુબ achieveપરેશન પ્રાપ્ત કરવા માટે રીઅલ-ટાઇમ પીસીઆર પ્લેટફોર્મને જોડે છે. Simpleપરેશન સરળ છે અને ઉત્પાદનની પોસ્ટ-પ્રોસેસિંગની આવશ્યકતા નથી, જે વિસ્તૃત ઉત્પાદનના દૂષણને મોટા પ્રમાણમાં ટાળી શકે છે. હાલમાં, વીંછી-એઆરએમએસ પદ્ધતિ, વીંછીની ચકાસણી અને એમ્પ્લીફિકેશન બ્લોક પરિવર્તન પ્રણાલીને સંયોજનમાં વિશ્વમાં વધુ ઉપયોગમાં લેવાય છે. બે તકનીકીઓનું સંયોજન સંવેદનશીલતા અને બંને બાજુની વિશિષ્ટતાને મહત્તમ બનાવી શકે છે. ગાઓ જિ એટ એટલ. કોલોરેક્ટલ કેન્સરવાળા 167 દર્દીઓમાં કેઆરએએસ જનીન પરિવર્તનની સ્થિતિ શોધવા માટે આ પદ્ધતિનો ઉપયોગ કરો, સૂચવે છે કે આ પદ્ધતિ વિશ્વસનીય અને સચોટ છે. વાંગ હુઇ એટ અલ. ફોર્માલ્ડીહાઇડ-ફિક્સ્ડ અને પેરાફિન-એમ્બેડેડ પેશીઓના 151 કેસોમાં કેઆરએએસ પરિવર્તન શોધવા માટે એઆરએમએસનો ઉપયોગ પણ કર્યો હતો. યુનાઇટેડ સ્ટેટ્સમાં, કેઆરએએસના ક્લિનિકલ પરીક્ષણ માટે એફડીએ દ્વારા માન્ય કરાયેલ કોબASસ કીટ (રોશે) અને યુરોપિયન યુનિયન ઇન વિટ્રો ડાયગ્નોસ્ટિક્સ (સીઇ-આઇવીડી) દ્વારા પ્રમાણિત થેરાસ્ક્રીન આરજીક્યુ કીટ (કિયાજેન) બધા એઆરએમએસ સિદ્ધાંતનો ઉપયોગ કરે છે. સામાન્ય પદ્ધતિઓમાં, એઆરએમએસ પદ્ધતિ સૌથી સંવેદનશીલ હોય છે અને કિંમત પ્રમાણમાં વાજબી હોય છે. તેથી, દેશ અને વિદેશમાં કેઆરએએસ જનીનોની ક્લિનિકલ તપાસનો મોટો ભાગ એઆરએમએસ પદ્ધતિનો ઉપયોગ કરી રહ્યો છે, પરંતુ કારણ કે તે પદ્ધતિ પીસીઆર ટેકનોલોજી પર આધારિત છે, તેથી તેની ખામી એ છે કે તે ફક્ત જાણીતી સાઇટ પરિવર્તન શોધી શકાય છે.

4. રીઅલ-ટાઇમ ફ્લોરોસન્સ ક્વોન્ટીટીવ પીસીઆર પદ્ધતિ:

It is a PCR-based detection method to determine the mutation by Ct value. It has the advantages of strong specificity, high sensitivity, accurate quantification, easy operation, and fully closed reaction. Many experimental groups have adopted this method for the detection of KRAS mutations in colorectal cancer. Compared with the direct sequencing method, quantitative PCR occupies a greater advantage in sensitivity. Most scholars comparing the two methods believe that quantitative PCR is more sensitive. Liu Wei et al. Used two methods to make a detailed analysis of the detection results of 280 cases of colorectal cancer KRAS gene mutations, 94 cases of KRAS gene sequencing mutations, the positive rate was 33.57% (94/280), of which, real-time fluorescence quantitative PCR was positive 91 cases had a sensitivity of 96.8% (91/94). Of the 186 gene sequencing wild-type cases, 184 were negative by real-time quantitative PCR, with a specificity of 98.9% (184/186). The coincidence rate between real-time fluorescence quantitative PCR method and direct gene sequencing method was 98.2%. In the two detection methods, the positive and negative coincidence rates of each mutation site were above 90%, and the coincidence rate of four sites reached 100%. The detection results of the two methods were highly consistent, indicating fluorescent quantitative PCR It is a more reliable method for mutation detection. However, PCR-based methods need to design primers and probes based on known mutation types, so all possible mutations cannot be detected, and only specific sites can be detected. If a certain site is not included in the detection range of the kit, even if there is actually a mutation, the kit result is still negative. In addition, although the sensitivity of quantitative PCR is high, whether there are false positives still needs to be verified by DNA sequencing technology, or retrospective and prospective clinical experiments with large sample sizes to confirm the correlation between KRAS mutation status and the efficacy of targeted drugs . Therefore, the high sensitivity of mutation detection should not be pursued blindly, while the specificity and accuracy of detection should be ignored. Under different laboratory conditions, the optimal method for mutation detection in specimens may also be different. For specimens with a higher proportion of mutations, Sanger sequencing method has a higher accuracy in detecting gene mutations, while for specimens with a lower proportion of mutations, Sanger sequencing method False negatives may occur, and the detection method using fluorescent PCR as the technical platform can be characterized by high sensitivity.

5. એચઆરએમ પદ્ધતિ:

તે તાજેતરના વર્ષોમાં સામાન્ય રીતે ઉપયોગમાં લેવામાં આવતી જીન શોધવાની પદ્ધતિઓમાંની એક છે. પ્રદૂષણને ટાળવા માટે તેમાં સરળ, ઝડપી, સંવેદનશીલ અને એક નળીના ફાયદા છે. ક્લિનિકલ પરીક્ષણમાં તેના ઉપયોગની શક્યતાને અન્વેષણ કરવા માટે, લ્યુ લિકિન અને અન્ય લોકોએ એચઆરએમ પદ્ધતિનો ઉપયોગ કોરોરેક્ટલ કેન્સરવાળા 64 દર્દીઓમાં કેઆરએએસ જનીન પરિવર્તનને શોધી કા ,્યો, અને પછી પરિણામોને ચકાસવા માટે સીધા ક્રમનો ઉપયોગ કર્યો. એચઆરએમ અને સીધા અનુક્રમના પરિણામો સુસંગત હોવાનું જાણવા મળે છે. સીધા અનુક્રમની તુલનામાં, એચઆરએમ દ્વારા કેઆરએએસ જનીન પરિવર્તનની તપાસ સરળ અને સચોટ છે, જે સૂચવે છે કે તે ક્લિનિકલ પરીક્ષણ માટે યોગ્ય વિશ્વસનીય પદ્ધતિ છે. ચેન ઝિહોંગ એટ અલ. તેમની સંવેદનશીલતાનું મૂલ્યાંકન કરવા માટે કેઆરએએસ મ્યુટન્ટ પ્લાઝમિડ્સના વિવિધ પ્રમાણ ધરાવતા મિશ્રિત નમૂનાઓની શ્રેણીના પરીક્ષણ માટે એચઆરએમ પદ્ધતિનો ઉપયોગ કરો. એવું જોવા મળ્યું હતું કે મિશ્રિત નમૂનાઓમાં પ્લાઝ્મિડ પરિવર્તનનું પ્રમાણ 10% હતું, અને સંવેદનશીલતા 10% સુધી પહોંચી. ત્યારબાદ, આ પદ્ધતિનો ઉપયોગ 60 કોલોરેક્ટલ કેન્સર પેશીના નમૂનાઓમાં કેઆરએએસ જનીન પરિવર્તનને શોધવા માટે કરવામાં આવ્યો હતો. સીધી અનુક્રમ પદ્ધતિની તુલનામાં, એચઆરએમ પદ્ધતિની સંવેદનશીલતા 100% હતી, અને વિશિષ્ટતા 96% (43/45) હતી. એચઆરએમ પદ્ધતિનો ગેરલાભ એ છે કે ચોક્કસ પરિવર્તનના પ્રકારને સચોટપણે પ્રદાન કરવું અશક્ય છે અને કયો કોડન પરિવર્તિત છે. જો ગલન વળાંક પર કોઈ અસામાન્યતા જોવા મળે છે, તો પરિવર્તનના પ્રકારને નિર્ધારિત કરવા માટે અનુક્રમ પદ્ધતિની જરૂર છે. હાર્લી સંશોધન જૂથે ફ્લોરોસન્ટ પીસીઆર, એઆરએમએસ અને એચઆરએમ પદ્ધતિઓની તુલના કરવા માટે કોલોરેક્ટલ કેન્સર પેશીઓના 156 કેસનો ઉપયોગ કર્યો હતો. પરિણામો સૂચવે છે કે ત્રણ પદ્ધતિઓ ક્લિનિકલ પરીક્ષણ માટે યોગ્ય હોવા છતાં, એચઆરએમની વિશ્વસનીયતા અન્ય બે પદ્ધતિઓ જેટલી સારી નથી.

6. અન્ય પદ્ધતિઓ:

ઉપરોક્ત પદ્ધતિઓ ઉપરાંત, અન્ય તપાસ પદ્ધતિઓમાં એપ્લિકેશનમાં તેમના પોતાના ફાયદા અને ગેરફાયદા છે, જેમ કે પીસીઆર-એસએસસીપી, ઉચ્ચ પ્રદર્શન પ્રવાહી ક્રોમેટોગ્રાફી, ફ્લોરોસન્ટ પીસીઆર-ઓપ્ટિમાઇઝ્ડ ઓલિગોન્યુક્લિયોટાઇડ પ્રોબ પદ્ધતિ, નેસ્ટેડ પીસીઆર અને એઆરએમએસ સંયોજનની પદ્ધતિ, કોલ્ડ-પીસીઆર પદ્ધતિ, વગેરે. ઉચ્ચ પ્રભાવ પ્રવાહી ક્રોમેટોગ્રાફીમાં મજબૂત વિશિષ્ટતા હોય છે, પરંતુ નમૂનાઓની માંગ મોટી છે; પીસીઆર-એસએસસીપી ખર્ચ અને આર્થિક ઓછું છે, પરંતુ કામગીરી જટિલ છે; ફ્લોરોસન્ટ પીસીઆર પર આધારિત પરિવર્તન શોધ તકનીકમાં મજબૂત વિશિષ્ટતા, ઉચ્ચ સંવેદનશીલતા અને સચોટ જથ્થાત્મક, સરળ કામગીરી, સંપૂર્ણ અવરોધિત પ્રતિક્રિયા અને અન્ય ફાયદા છે, પરંતુ બધાને જાણીતા પરિવર્તનના પ્રકાર અનુસાર પ્રાઇમર્સ અને પ્રોબ્સ ડિઝાઇન કરવાની જરૂર છે, તેથી ફક્ત વિશિષ્ટ સાઇટ્સ જ હોઈ શકે શોધી કા .્યું, અને બધા સંભવિત પરિવર્તન શોધી શકાતા નથી.

3. સારાંશ

સારાંશમાં, કારણ કે વિવિધ પ્રયોગશાળાઓમાં પરિવર્તનની સાઇટ્સ અને તપાસ પદ્ધતિઓ સમાન નથી, તેથી ગાંઠના નમુનાઓનું વિશ્લેષણ અને ડીએનએ નિષ્કર્ષણની ગુણવત્તા પણ અસમાન છે, પરિણામે પ્રયોગશાળાઓ વચ્ચેના મોટા અથવા નાના પ્રાયોગિક પરિણામોના અસ્તિત્વમાં તફાવત, માનકતા KRAS જનીન પરિવર્તનની તપાસ વિવિધ દેશોમાં ચિંતાનો વિષય છે. હાલમાં, કેઆરએએસ જનીનમાં પરિવર્તનને શોધવા માટેની ઘણી પદ્ધતિઓ છે. એઆરએમએસ, પાયરોસેક્વિન્સીંગ, એચઆરએમ, રીઅલ-ટાઇમ ક્વોન્ટિટેટિવ ​​પીસીઆર અને ડાયરેક્ટ સિક્વન્સીંગ એ ઉચ્ચથી નીચીથી સંવેદનશીલતા છે. ક્લિનિકલ વાસ્તવિકતામાંથી, ઓછી સંવેદનશીલતા ક્લિનિકલ સારવાર માટે અનુકૂળ નથી, પરંતુ ખૂબ સંવેદનશીલ પદ્ધતિઓ તપાસની વિશિષ્ટતાને ઘટાડવાનું કારણ બનશે, અને બિનજરૂરી ખોટા હકારાત્મક પરિણામો આવી શકે છે અને દર્દીની પછીની દવાઓની અસરને અસર કરી શકે છે. ઉપરોક્ત પાસાઓને ધ્યાનમાં લેતા, એફડીએ દ્વારા માન્ય પદ્ધતિ સાથે જોડાઈને, એઆરએમએસ પદ્ધતિની ભલામણ કરવામાં આવે છે. અલબત્ત, બજારના દ્રષ્ટિકોણથી, મોલેક્યુલર ડાયગ્નોસ્ટિક્સમાં મારા પર ભાર મૂકવો જોઈએ નહીં
થોડ્સ, પરંતુ અંતિમ સાચા પરિણામો પર ધ્યાન કેન્દ્રિત કરો. વિવિધ પ્રયોગશાળાઓ વાસ્તવિક પરિસ્થિતિ અનુસાર યોગ્ય પરીક્ષણ પદ્ધતિઓ અપનાવી શકે છે, પરંતુ જો તેમની પાસે સારી ઓપરેટર લાયકાત અને આંતરિક ગુણવત્તા નિયંત્રણ સિસ્ટમ હોય તો જ. વર્તમાન સ્થાનિક પ્રયોગશાળા પર્યાવરણીય પરિસ્થિતિઓ હેઠળ, પ્રમાણિત પીસીઆર પ્રયોગશાળામાં પરીક્ષણ હાથ ધરવા અને વિશ્વસનીય પ્રયોગશાળા પરીક્ષણ ગુણવત્તાની ખાતરી કરવા માટે સ્થાનિક અને આંતરરાષ્ટ્રીય આંતર-ખંડ ગુણવત્તા નિયંત્રણ પ્રવૃત્તિઓમાં ભાગ લેવો જરૂરી છે. સ્ટાન્ડર્ડાઇઝ્ડ મેનેજમેન્ટ એ સતત પરિણામોની ખાતરી કરવા માટે જરૂરી શરત છે. ચાઇનામાં, KRAS જનીનનાં ક્લિનિકલ પરીક્ષણને એકીકૃત અને પ્રમાણિત કરવાની તાતી જરૂરિયાત છે, અને વિવિધ જરૂરિયાતો અનુસાર પ્રમાણિત અને પ્રમાણિત પરીક્ષણ કાર્યક્રમ જનરેટ કરવાની, અને આ પ્રોગ્રામને BRAF, PIK23450_3CA, EGFR અને ની શોધ માટે વિસ્તૃત કરી શકાય છે. ક્લિનિકલ મોલેક્યુલર પેથોલોજી પરીક્ષણને પ્રોત્સાહન આપવા માટે અન્ય જનીનો.