Targeting drugs such as cetuximab and panitumumab have been widely used in clinic as effective therapeutic drugs for colorectal cancer. Clinical data show that patients with KRAS mutations have no significant effect on this monoclonal antibody drug, and only wild-type patients can benefit from it. Therefore, the KRAS gene mutation status is clinically regarded as an important therapeutic marker, which has a strong correlation with the prognosis and treatment effect of colorectal cancer. The 2009 National Cancer Comprehensive Network (NCCN) Colorectal Cancer Clinical Practice Guidelines stipulates that all patients with metastatic colorectal cancer must detect KRAS gene mutation status, and only KRAS wild type is recommended to receive EGFR targeted therapy. In the same year, the American Society of Clinical Oncology (ASCO) also issued the same clinical treatment recommendations as a molecular marker for tumor targeted therapy, which shows its important guiding significance. At present, KRAS genetic testing has been widely carried out clinically. We mainly evaluate the domestic KRAS gene mutation detection methods for reference in clinical selection.
1. కొలొరెక్టల్ క్యాన్సర్‌లో KRAS జన్యు పరివర్తన యొక్క సానుకూల రేటు
కొలొరెక్టల్ క్యాన్సర్‌లో, KRAS జన్యువు యొక్క మ్యుటేషన్ రేటు 35% నుండి 45% వరకు ఉంటుంది, మరియు అధిక-రిస్క్ మ్యుటేషన్ సైట్ ఎక్సోన్ 12 లో 13 మరియు 2 కోడన్లు, మరియు 61 మరియు 146 వంటి అరుదైనవి ఇప్పటికీ ఉన్నాయి. సైట్. డైరెక్ట్ సీక్వెన్సింగ్, హై రిజల్యూషన్ మెల్టింగ్ కర్వ్ ఎనాలిసిస్ (హెచ్‌ఆర్‌ఎం), పైరోక్సెన్సింగ్, క్వాంటిటేటివ్ పిసిఆర్, మ్యుటేషన్ యాంప్లిఫికేషన్ బ్లాక్ సిస్టమ్ (యాంప్లింక్ ఆటియో) నెఫ్రాక్టోరిముటేషన్ సిస్టమ్ (ఎఆర్ఎంఎస్), పరిమితి శకలం పొడవు పాలిమార్ఫిజం (ఆర్‌ఎఫ్‌ఎల్‌పి), పాలిమరేస్ చైన్ రియాక్షన్-సింగిల్-స్ట్రాండ్ కన్ఫర్మేషన్ పాలిమార్ఫిజం అనాలిసిస్ (పిసిఆర్-సింగిల్‌స్ట్రాండ్ కన్ఫోమేషన్ పాలిమార్ఫిజం (పిసిఆర్-ఎస్ఎస్సిపి), తక్కువ డీనాటరేషన్ టెంపరేచర్ పిసిఆర్ (కోల్డ్-పిసిఆర్) వద్ద సహ-విస్తరణ మరియు అధిక-పనితీరు గల లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ విశ్లేషణ మొదలైనవి.
2. KRAS మ్యుటేషన్ డిటెక్షన్ పద్ధతుల మూల్యాంకనం
1. డైరెక్ట్ సీక్వెన్సింగ్ పద్ధతి: ఇది KRAS జన్యు ఉత్పరివర్తనాలను గుర్తించడానికి అత్యంత క్లాసిక్ పద్ధతి, మరియు ఇది జన్యు ఉత్పరివర్తనాలను గుర్తించడానికి బంగారు ప్రమాణం. డిడియోక్సీ సీక్వెన్సింగ్ సూత్రం ఆధారంగా ప్రత్యక్ష సీక్వెన్సింగ్ పద్ధతి బేస్ పీక్ మ్యాప్ రూపంలో జన్యు శ్రేణి యొక్క మార్పును చాలా అకారణంగా చూపిస్తుంది. డిటెక్షన్ రకం మరింత సమగ్రమైనది మరియు ఇది మొట్టమొదటి అనువర్తిత మ్యుటేషన్ డిటెక్షన్ పద్ధతి. కొత్త తరం సీక్వెన్సింగ్ ప్లాట్‌ఫారమ్‌ల ఆవిర్భావం ఉన్నప్పటికీ, స్వదేశీ మరియు విదేశాలలో ఉన్న పండితులు కొత్త పద్ధతి యొక్క విశ్వసనీయతను కొలవడానికి మరియు నిర్ణయించడానికి ప్రత్యక్ష సీక్వెన్సింగ్ ఫలితాలను ఒక ప్రమాణంగా ఉపయోగిస్తున్నారు. గావో జింగ్ మరియు ఇతరులు. కొలొరెక్టల్ క్యాన్సర్ ఉన్న 966 మంది రోగులలో KRAS మరియు BRAF జన్యు ఉత్పరివర్తనాలను గుర్తించడానికి ప్రత్యక్ష సీక్వెన్సింగ్. సాహిత్యంలో నివేదించబడిన అతిపెద్ద దేశీయ నమూనాతో KRAS జన్యు పరివర్తన యొక్క విశ్లేషణ ఇది. ప్రతి జన్యువు యొక్క మ్యుటేషన్ స్థితిని అర్థం చేసుకోవడానికి ప్రత్యక్ష సీక్వెన్సింగ్ పద్ధతి అత్యంత ప్రత్యక్ష మరియు ప్రభావవంతమైన గుర్తింపు పద్ధతి అని లింగ్ యున్ మరియు ఇతరులు నమ్ముతారు, ఇది మ్యుటేషన్ రకాన్ని స్పష్టం చేస్తుంది, ముఖ్యంగా తెలియని ఉత్పరివర్తనాలను గుర్తించడం కోసం. ఈ పద్ధతి యొక్క సున్నితత్వం సాపేక్షంగా తక్కువగా ఉన్నప్పటికీ, కణితి కణాలను సుసంపన్నం చేయడానికి మైక్రోడిసెక్షన్ వంటి పద్ధతుల ద్వారా దీనిని మెరుగుపరచవచ్చు. ఇతర దేశీయ పరిశోధనా సమూహాలలో పెద్ద నమూనా పరిమాణాలను KRAS గుర్తించడానికి ప్రత్యక్ష సీక్వెన్సింగ్ పద్ధతి కూడా వర్తించబడింది. అయినప్పటికీ, తక్కువ సున్నితత్వం ప్రత్యక్ష శ్రేణి యొక్క అతిపెద్ద ప్రతికూలత. చైనాలో నివేదించబడిన ఫలితాల నుండి చూస్తే, ప్రత్యక్ష శ్రేణి ద్వారా మ్యుటేషన్ డిటెక్షన్ రేటు తక్కువగా ఉండదు. లియు జియాజింగ్ మరియు ఇతరులు. డైరెక్ట్ సీక్వెన్సింగ్ మరియు పెప్టైడ్ న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ క్లాంప్ పిసిఆర్ (పిఎన్ఎ-పిసిఆర్) తో పోల్చితే, KRAS జన్యు ఉత్పరివర్తనాల యొక్క 43 కేసులు డైరెక్ట్ సీక్వెన్సింగ్ ద్వారా కనుగొనబడ్డాయి. ఈ ఉత్పరివర్తనాలతో పాటు, PNA-PCR కూడా ప్రత్యక్ష క్రమం ద్వారా కనుగొనబడింది. అడవి రకంలో పది ఉత్పరివర్తనలు కనుగొనబడ్డాయి, మరియు పిసిఆర్ ద్వారా అడవి రకం రోగులను నిర్ణయించడానికి సూచనలు చేయబడ్డాయి మరియు ఉత్పరివర్తన చెందిన రోగులను నిర్ణయించడానికి ప్రత్యక్ష శ్రేణి పద్ధతి. క్యూ టియాన్ మరియు ఇతరులు. ఫ్లోరోసెంట్ పిసిఆర్-ఆప్టిమైజ్డ్ ఒలిగోన్యూక్లియోటైడ్ ప్రోబ్ పద్ధతి మరియు డైరెక్ట్ సీక్వెన్సింగ్ పద్ధతి ద్వారా 131 కొలొరెక్టల్ క్యాన్సర్ నమూనాలను కనుగొన్నారు, మరియు KRAS జన్యు ఉత్పరివర్తనాల యొక్క సానుకూల రేట్లు 41.2% (54/131) మరియు 40.5% (53/131). బాయి డోంగ్యూ వివిధ పద్ధతుల యొక్క గుర్తింపు సున్నితత్వాన్ని కూడా చర్చించారు. 200 కొలొరెక్టల్ క్యాన్సర్ రోగులలో, 63 మంది RT-qPCR ఉత్పరివర్తనాల ద్వారా కనుగొనబడ్డారు, మరియు మ్యుటేషన్ డిటెక్షన్ రేటు 31.5%; మ్యుటేషన్, మ్యుటేషన్ డిటెక్షన్ రేట్ 169% యొక్క ప్రత్యక్ష కేసుల ద్వారా 50 నమూనాలను విజయవంతంగా క్రమం చేశారు. ప్రత్యక్ష శ్రేణి పద్ధతి KRAS జన్యు పరివర్తన స్థితిని ఖచ్చితంగా, నిష్పాక్షికంగా మరియు ప్రత్యేకంగా గుర్తించగలిగినప్పటికీ, అధిక సాంకేతిక అవసరాలు, సంక్లిష్టమైన ఆపరేషన్ విధానాలు, క్రాస్-కాలుష్యాన్ని కలిగించడం సులభం, మరియు ఫలితాల యొక్క సమయం తీసుకునే మరియు శ్రమతో కూడిన వివరణ వంటి లోపాలు కూడా చాలా ఉన్నాయి స్పష్టంగా. తరచుగా సీక్వెన్సింగ్ పరికరాలు లేవు, మరియు నమూనాను పరీక్ష కోసం సంబంధిత సంస్థకు పంపాల్సిన అవసరం ఉంది, ఇది చాలా సమయం పడుతుంది మరియు అధిక వ్యయాన్ని కలిగి ఉంటుంది, కాబట్టి దీనికి గొప్ప పరిమితులు ఉన్నాయి.
పైరోక్సెన్సింగ్ పద్ధతి:
సీక్వెన్సింగ్ సున్నితత్వం, గుర్తించే ఖర్చు మరియు నివేదించడానికి సమయం పరంగా KRAS జన్యు పరివర్తనను గుర్తించడానికి పైరోక్సెన్సింగ్ పద్ధతి మరింత అనుకూలమైన పద్ధతి. ఈ పద్ధతి యొక్క పునరావృతం మంచిది. పొందిన పీక్ మ్యాప్ ప్రకారం, ఒక నిర్దిష్ట సైట్ యొక్క మ్యుటేషన్ ఫ్రీక్వెన్సీ యొక్క పరిమాణాత్మక అధ్యయనం మరియు వివిధ సైట్ల యొక్క మ్యుటేషన్ పౌన encies పున్యాల మధ్య పోలిక ఒక చూపులో స్పష్టంగా ఉంటుంది. ఇటీవలి సంవత్సరాలలో, ఒగినో మరియు ఇతరులు, హచిన్స్ మరియు ఇతరులు. పెద్దప్రేగు క్యాన్సర్ యొక్క పెద్ద నమూనాలతో రోగులలో KRAS ఉత్పరివర్తనాలను పరీక్షించడానికి పైరోక్సెన్సింగ్ టెక్నాలజీని ఉపయోగించారు. లక్ష్య చికిత్స కోసం రోగులను పరీక్షించడానికి పైరోక్సెన్సింగ్ టెక్నాలజీ ఒక శక్తివంతమైన సాధనం అని ఫలితాలు సూచిస్తున్నాయి. కణితి పరమాణు నిర్ధారణ విస్తృత అనువర్తన అవకాశాలను కలిగి ఉంది. దేశీయ పండితులు మంచి ఖచ్చితత్వం మరియు విశ్వసనీయతతో కొలొరెక్టల్ క్యాన్సర్‌లో KRAS ఉత్పరివర్తనాలను వైద్యపరంగా గుర్తించడానికి పైరోక్సెన్సింగ్ టెక్నాలజీని కూడా ఉపయోగించారు. ఈ పద్ధతి మంచి విశిష్టత మరియు అధిక సున్నితత్వాన్ని కలిగి ఉంటుంది. సుండ్స్ట్రోమ్ మరియు ఇతరులు. క్లినికల్ అనువర్తనాల్లో అల్లెలిక్-స్పెసిఫిక్ పిసిఆర్ మరియు పైరోక్సెన్సింగ్‌తో పోల్చినప్పుడు మరియు కొలొరెక్టల్ క్యాన్సర్ రోగులలో KRAS ఉత్పరివర్తనాల యొక్క 314 కేసులలో, పైరోక్సెన్సింగ్ యొక్క విశిష్టత యుగ్మ వికల్పాల కంటే మెరుగైనదని కనుగొన్నారు. పిసిఆర్, మరియు తక్కువ కణితి కణ కంటెంట్ కలిగిన కణజాలాలకు మంచి సున్నితత్వాన్ని కలిగి ఉంటుంది. కణితి కణాల నిష్పత్తిని 1.25% నుండి 2.5% వరకు తగ్గించండి. పైరోక్సెన్సింగ్ ఇప్పటికీ మ్యుటేషన్ సంకేతాలను గుర్తించగలదు. నమూనాలోని ఉత్పరివర్తన యుగ్మ వికల్పాల యొక్క కనీస కంటెంట్ సాంగర్ సీక్వెన్సింగ్ ద్వారా గుర్తించబడటానికి 20% కి చేరుకోవలసి వచ్చినప్పుడు, అది 10% కి చేరుకున్నప్పుడు HRM పద్ధతి ద్వారా కనుగొనవచ్చు మరియు పైరోక్సెన్సింగ్ కోసం ఉత్పరివర్తనలు మాత్రమే 5% ద్వారా కనుగొనబడతాయి. అల్లెల్స్. కొలొరెక్టల్ క్యాన్సర్ ఉన్న 717 మంది రోగులలో KRAS ఉత్పరివర్తనాలను గుర్తించడానికి మేము పైరోక్సెన్సింగ్‌ను ఉపయోగించాము మరియు KRAS ఉత్పరివర్తనాల పౌన frequency పున్యం 40.9% అని కనుగొన్నాము. కోడాన్ 12 యొక్క మ్యుటేషన్ రేటు 30.1%, కోడాన్ 13 యొక్క మ్యుటేషన్ రేటు 9.8%, మరియు కోడాన్ 61 యొక్క మ్యుటేషన్ రేటు 1.0%. పరీక్షకు ముందు మాన్యువల్ మైక్రోడిసెక్షన్ ద్వారా కణజాలాలను అధిక కణితితో సమృద్ధిగా చేసాము, ఫలితాలను మరింత నమ్మదగినదిగా చేస్తాము. ఈ పద్ధతి మంచి సున్నితత్వం మరియు విశిష్టతను కలిగి ఉంది మరియు క్లినికల్ ప్రాక్టీస్‌లో అభివృద్ధి చేయడం సులభం. పైరోక్సెన్సింగ్ యొక్క ప్రతికూలత గుర్తించే అధిక వ్యయం, మరియు నమూనాలను క్రమం చేయడానికి సింగిల్-స్ట్రాండ్డ్ DNA ను తయారుచేసే విధానం గజిబిజిగా ఉంటుంది. భవిష్యత్తులో, పైరోక్సెన్సింగ్ డబుల్ స్ట్రాండెడ్ పిసిఆర్ ఉత్పత్తులను ప్రత్యక్షంగా గుర్తించడానికి సాంకేతిక పరిజ్ఞానం అభివృద్ధికి కేటాయించవచ్చు, ఇది ఆపరేషన్‌ను చాలా సులభతరం చేస్తుంది. క్లినికల్ టెస్టింగ్ యొక్క సమగ్ర ప్రమోషన్ సాధించడానికి సీక్వెన్సింగ్ ఖర్చును సమర్థవంతంగా తగ్గించండి.
3. ARMS పద్ధతి:
ఈ సాంకేతికత అడవి-రకం మరియు ఉత్పరివర్తన జన్యువుల మధ్య తేడాను గుర్తించడానికి ప్రైమర్‌లను ఉపయోగిస్తుంది
ఇచ్ 1980 ల నాటికే నివేదించబడింది. ఈ పద్ధతి యొక్క అతిపెద్ద ప్రయోజనం ఏమిటంటే ఇది 1.0% వరకు సున్నితత్వాన్ని కలిగి ఉంటుంది మరియు 1.0% కంటే తక్కువ నమూనాలలో ఉత్పరివర్తన జన్యువులను గుర్తించగలదు. రూపకల్పనలో, లక్ష్య ఉత్పత్తి యొక్క పొడవును చాలా వరకు తగ్గించవచ్చు మరియు ఖచ్చితమైన గుర్తించే ఫలితాలను పొందలేము ఎందుకంటే పారాఫిన్-ఎంబెడెడ్ టిష్యూ స్పెసిమెన్ నుండి సేకరించిన DNA చాలా భాగం విచ్ఛిన్నమైంది. ఈ సాంకేతికత రియల్ టైమ్ పిసిఆర్ ప్లాట్‌ఫామ్‌ను మిళితం చేసి విస్తరణ సమయంలో క్లోజ్డ్-ట్యూబ్ ఆపరేషన్‌ను సాధిస్తుంది. ఆపరేషన్ సులభం మరియు ఉత్పత్తి యొక్క పోస్ట్-ప్రాసెసింగ్ అవసరం లేదు, ఇది విస్తరించిన ఉత్పత్తి యొక్క కాలుష్యాన్ని చాలా వరకు నివారించగలదు. ప్రస్తుతం, స్కార్పియన్ ప్రోబ్ మరియు యాంప్లిఫికేషన్ బ్లాక్ మ్యుటేషన్ సిస్టమ్‌ను కలిపే తేలు- ARMS పద్ధతి ప్రపంచంలో ఎక్కువగా ఉపయోగించబడుతుంది. రెండు సాంకేతిక పరిజ్ఞానాల కలయిక రెండు వైపుల సున్నితత్వం మరియు విశిష్టతను పెంచుతుంది. గావో జీ మరియు ఇతరులు. కొలొరెక్టల్ క్యాన్సర్ ఉన్న 167 మంది రోగులలో KRAS జన్యు ఉత్పరివర్తన స్థితిని గుర్తించడానికి ఈ పద్ధతిని ఉపయోగించారు, ఈ పద్ధతి నమ్మదగినది మరియు ఖచ్చితమైనది అని సూచిస్తుంది. వాంగ్ హుయ్ మరియు ఇతరులు. ఫార్మాల్డిహైడ్-ఫిక్స్‌డ్ మరియు పారాఫిన్-ఎంబెడెడ్ కణజాలాల 151 కేసులలో KRAS ఉత్పరివర్తనాలను గుర్తించడానికి ARMS ను కూడా ఉపయోగించారు. యునైటెడ్ స్టేట్స్లో, KRAS యొక్క క్లినికల్ పరీక్ష కోసం FDA చే ఆమోదించబడిన కోబాస్ కిట్ (రోచె) మరియు యూరోపియన్ యూనియన్ ఇన్ విట్రో డయాగ్నోస్టిక్స్ (CE-IVD) చేత ధృవీకరించబడిన థెరాస్క్రీన్ RGQ కిట్ (కియాగెన్) అన్నీ ARMS సూత్రాన్ని ఉపయోగిస్తాయి. సాధారణ పద్ధతులలో, ARMS పద్ధతి అత్యంత సున్నితమైనది మరియు ఖర్చు సాపేక్షంగా సహేతుకమైనది. అందువల్ల, స్వదేశంలో మరియు విదేశాలలో KRAS జన్యువులను క్లినికల్ డిటెక్షన్ చేయడంలో ఎక్కువ భాగం ARMS పద్ధతిని ఉపయోగిస్తున్నారు, అయితే ఈ పద్ధతి PCR సాంకేతిక పరిజ్ఞానంపై ఆధారపడి ఉన్నందున, దాని లోపం ఏమిటంటే ఇది తెలిసిన సైట్ ఉత్పరివర్తనాలను మాత్రమే కనుగొనగలదు.
4. రియల్ టైమ్ ఫ్లోరోసెన్స్ క్వాంటిటేటివ్ పిసిఆర్ పద్ధతి:
It is a PCR-based detection method to determine the mutation by Ct value. It has the advantages of strong specificity, high sensitivity, accurate quantification, easy operation, and fully closed reaction. Many experimental groups have adopted this method for the detection of KRAS mutations in colorectal cancer. Compared with the direct sequencing method, quantitative PCR occupies a greater advantage in sensitivity. Most scholars comparing the two methods believe that quantitative PCR is more sensitive. Liu Wei et al. Used two methods to make a detailed analysis of the detection results of 280 cases of colorectal cancer KRAS gene mutations, 94 cases of KRAS gene sequencing mutations, the positive rate was 33.57% (94/280), of which, real-time fluorescence quantitative PCR was positive 91 cases had a sensitivity of 96.8% (91/94). Of the 186 gene sequencing wild-type cases, 184 were negative by real-time quantitative PCR, with a specificity of 98.9% (184/186). The coincidence rate between real-time fluorescence quantitative PCR method and direct gene sequencing method was 98.2%. In the two detection methods, the positive and negative coincidence rates of each mutation site were above 90%, and the coincidence rate of four sites reached 100%. The detection results of the two methods were highly consistent, indicating fluorescent quantitative PCR It is a more reliable method for mutation detection. However, PCR-based methods need to design primers and probes based on known mutation types, so all possible mutations cannot be detected, and only specific sites can be detected. If a certain site is not included in the detection range of the kit, even if there is actually a mutation, the kit result is still negative. In addition, although the sensitivity of quantitative PCR is high, whether there are false positives still needs to be verified by DNA sequencing technology, or retrospective and prospective clinical experiments with large sample sizes to confirm the correlation between KRAS mutation status and the efficacy of targeted drugs . Therefore, the high sensitivity of mutation detection should not be pursued blindly, while the specificity and accuracy of detection should be ignored. Under different laboratory conditions, the optimal method for mutation detection in specimens may also be different. For specimens with a higher proportion of mutations, Sanger sequencing method has a higher accuracy in detecting gene mutations, while for specimens with a lower proportion of mutations, Sanger sequencing method False negatives may occur, and the detection method using fluorescent PCR as the technical platform can be characterized by high sensitivity.
5. HRM పద్ధతి:
ఇటీవలి సంవత్సరాలలో ఎక్కువగా ఉపయోగించే జన్యు గుర్తింపు పద్ధతుల్లో ఇది ఒకటి. కాలుష్యాన్ని నివారించడానికి ఇది సాధారణ, వేగవంతమైన, సున్నితమైన మరియు సింగిల్ ట్యూబ్ యొక్క ప్రయోజనాలను కలిగి ఉంది. క్లినికల్ టెస్టింగ్‌లో దాని ఉపయోగం యొక్క సాధ్యాసాధ్యాలను అన్వేషించడానికి, లియు లికిన్ మరియు ఇతరులు కొలొరెక్టల్ క్యాన్సర్‌తో బాధపడుతున్న 64 మంది రోగులలో KRAS జన్యు ఉత్పరివర్తనాలను గుర్తించడానికి HRM పద్ధతిని ఉపయోగించారు, ఆపై ఫలితాలను ధృవీకరించడానికి ప్రత్యక్ష శ్రేణిని ఉపయోగించారు. HRM మరియు డైరెక్ట్ సీక్వెన్సింగ్ యొక్క ఫలితాలు స్థిరంగా ఉన్నట్లు కనుగొనబడింది. ప్రత్యక్ష శ్రేణితో పోలిస్తే, HRM చేత KRAS జన్యు ఉత్పరివర్తనాలను గుర్తించడం సరళమైనది మరియు ఖచ్చితమైనది, ఇది క్లినికల్ పరీక్షకు అనువైన నమ్మదగిన పద్ధతి అని సూచిస్తుంది. చెన్ జిహాంగ్ మరియు ఇతరులు. వారి సున్నితత్వాన్ని అంచనా వేయడానికి KRAS ఉత్పరివర్తన ప్లాస్మిడ్‌ల యొక్క విభిన్న నిష్పత్తులను కలిగి ఉన్న మిశ్రమ నమూనాల శ్రేణిని పరీక్షించడానికి HRM పద్ధతిని ఉపయోగించారు. మిశ్రమ నమూనాలలో ప్లాస్మిడ్ ఉత్పరివర్తనాల నిష్పత్తి 10%, మరియు సున్నితత్వం 10% కి చేరుకున్నట్లు కనుగొనబడింది. తదనంతరం, 60 కొలొరెక్టల్ క్యాన్సర్ కణజాల నమూనాలలో KRAS జన్యు ఉత్పరివర్తనాలను గుర్తించడానికి ఈ పద్ధతి ఉపయోగించబడింది. డైరెక్ట్ సీక్వెన్సింగ్ పద్ధతిలో పోలిస్తే, HRM పద్ధతి యొక్క సున్నితత్వం 100%, మరియు విశిష్టత 96% (43/45). HRM పద్ధతి యొక్క ప్రతికూలత ఏమిటంటే నిర్దిష్ట మ్యుటేషన్ రకాన్ని ఖచ్చితంగా అందించడం అసాధ్యం మరియు ఏ కోడాన్ పరివర్తనం చెందింది. ద్రవీభవన వక్రంలో అసాధారణత కనుగొనబడితే, మ్యుటేషన్ రకాన్ని నిర్ణయించడానికి సీక్వెన్సింగ్ పద్ధతి అవసరం. ఫ్లోరోసెంట్ PCR, ARMS మరియు HRM పద్ధతులను పోల్చడానికి హార్లే పరిశోధనా బృందం కొలొరెక్టల్ క్యాన్సర్ కణజాలం యొక్క 156 కేసులను ఉపయోగించింది. మూడు పద్ధతులు క్లినికల్ పరీక్షకు అనుకూలంగా ఉన్నప్పటికీ, HRM యొక్క విశ్వసనీయత ఇతర రెండు పద్ధతుల వలె మంచిది కాదని ఫలితాలు సూచిస్తున్నాయి.
6. ఇతర పద్ధతులు:
పైన పేర్కొన్న పద్ధతులతో పాటు, పిసిఆర్-ఎస్ఎస్సిపి, హై పెర్ఫార్మెన్స్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ, ఫ్లోరోసెంట్ పిసిఆర్-ఆప్టిమైజ్డ్ ఒలిగోన్యూక్లియోటైడ్ ప్రోబ్ మెథడ్, నెస్టెడ్ పిసిఆర్ మరియు ఎఆర్ఎంఎస్ కాంబినేషన్, కోల్డ్-పిసిఆర్ వంటి ఇతర డిటెక్షన్ పద్ధతులు అనువర్తనంలో వాటి స్వంత ప్రయోజనాలు మరియు అప్రయోజనాలు ఉన్నాయి. పద్ధతి, మొదలైనవి. అధిక పనితీరు గల ద్రవ క్రోమాటోగ్రఫీకి బలమైన విశిష్టత ఉంది, అయితే నమూనాల డిమాండ్ పెద్దది; PCR-SSCP తక్కువ ఖర్చుతో మరియు ఆర్థికంగా ఉంటుంది, కానీ ఆపరేషన్ సంక్లిష్టంగా ఉంటుంది; ఫ్లోరోసెంట్ పిసిఆర్ ఆధారంగా మ్యుటేషన్ డిటెక్షన్ టెక్నాలజీ బలమైన విశిష్టత, అధిక సున్నితత్వం మరియు ఖచ్చితమైన పరిమాణాత్మక, సులువు ఆపరేషన్, పూర్తిగా నిరోధించబడిన ప్రతిచర్య మరియు ఇతర ప్రయోజనాలను కలిగి ఉంది, అయితే అందరికీ తెలిసిన మ్యుటేషన్ రకం ప్రకారం ప్రైమర్లు మరియు ప్రోబ్స్ రూపకల్పన అవసరం, కాబట్టి నిర్దిష్ట సైట్లు మాత్రమే ఉంటాయి కనుగొనబడింది మరియు సాధ్యమయ్యే అన్ని ఉత్పరివర్తనలు కనుగొనబడవు.
3. సారాంశం
సారాంశంలో, వివిధ ప్రయోగశాలలలోని మ్యుటేషన్ సైట్లు మరియు డిటెక్షన్ పద్ధతులు ఏకరీతిగా లేనందున, కణితి నమూనాల పరిమాణం మరియు DNA వెలికితీత యొక్క నాణ్యత కూడా అసమానంగా ఉంటాయి, దీని ఫలితంగా ప్రయోగశాలల మధ్య పెద్ద లేదా చిన్న ప్రయోగాత్మక ఫలితాల ఉనికి తేడాలు, ప్రామాణీకరణ KRAS జన్యు ఉత్పరివర్తన గుర్తింపు వివిధ దేశాలలో ఆందోళన కలిగించే క్లినికల్ డిటెక్షన్ సమస్యగా మారింది. ప్రస్తుతం, KRAS జన్యువులో ఉత్పరివర్తనాలను గుర్తించడానికి అనేక పద్ధతులు ఉన్నాయి. అధిక నుండి తక్కువ వరకు సున్నితత్వం ARMS, పైరోక్సెన్సింగ్, HRM, రియల్ టైమ్ క్వాంటిటేటివ్ PCR మరియు డైరెక్ట్ సీక్వెన్సింగ్. క్లినికల్ రియాలిటీ నుండి, తక్కువ సున్నితత్వం క్లినికల్ చికిత్సకు అనుకూలంగా ఉండదు, కానీ చాలా సున్నితమైన పద్ధతులు గుర్తించే విశిష్టత క్షీణించడానికి కారణమవుతాయి మరియు అనవసరమైన తప్పుడు సానుకూల ఫలితాలు సంభవించవచ్చు మరియు రోగి యొక్క తదుపరి మందుల నియమావళిని ప్రభావితం చేస్తాయి. పై అంశాలను పరిశీలిస్తే, FDA చే ఆమోదించబడిన పద్ధతిలో కలిపి, ARMS పద్ధతి సిఫార్సు చేయబడింది. వాస్తవానికి, మార్కెట్ కోణం నుండి, మాలిక్యులర్ డయాగ్నస్టిక్స్ నన్ను నొక్కి చెప్పకూడదు
థడ్స్, కానీ తుది సరైన ఫలితాలపై దృష్టి పెట్టండి. వివిధ ప్రయోగశాలలు వాస్తవ పరిస్థితికి అనుగుణంగా తగిన పరీక్షా పద్ధతులను అవలంబించగలవు, అయితే అవి మంచి ఆపరేటర్ అర్హతలు మరియు అంతర్గత నాణ్యత నియంత్రణ వ్యవస్థలను కలిగి ఉంటే మాత్రమే. ప్రస్తుత దేశీయ ప్రయోగశాల పర్యావరణ పరిస్థితులలో, విశ్వసనీయమైన ప్రయోగశాల పరీక్ష నాణ్యతను నిర్ధారించడానికి ప్రామాణిక PCR ప్రయోగశాలలో పరీక్షను నిర్వహించడం మరియు దేశీయ మరియు అంతర్జాతీయ ఇంటర్-రూమ్ నాణ్యత నియంత్రణ కార్యకలాపాలలో పాల్గొనడం అవసరం. స్థిరమైన ఫలితాలను నిర్ధారించడానికి ప్రామాణిక నిర్వహణ అనేది అవసరమైన షరతు. చైనాలో, KRAS జన్యువు యొక్క క్లినికల్ టెస్టింగ్‌ను ఏకీకృతం చేయడం మరియు ప్రామాణీకరించడం మరియు వివిధ అవసరాలకు అనుగుణంగా ప్రామాణికమైన మరియు ప్రామాణిక పరీక్ష ప్రోగ్రామ్‌ను రూపొందించడం అత్యవసరం, మరియు ఈ ప్రోగ్రామ్‌ను BRAF, PIK23450_3CA, EGFR మరియు గుర్తించే వరకు విస్తరించవచ్చు. క్లినికల్ మాలిక్యులర్ పాథాలజీ పరీక్షను ప్రోత్సహించడానికి ఇతర జన్యువులు.
