እንደ ሴቱክሲማብ እና ፓኒቱማብ ያሉ መድኃኒቶችን ማነጣጠር ለኮሎሬክታል ካንሰር ውጤታማ የሕክምና መድኃኒቶች በክሊኒክ ውስጥ በሰፊው ጥቅም ላይ ውለዋል። ክሊኒካዊ መረጃዎች እንደሚያሳዩት የ KRAS ሚውቴሽን ያለባቸው ታካሚዎች በዚህ ሞኖክሎናል ፀረ እንግዳ አካላት ላይ ምንም አይነት ተፅዕኖ አይኖራቸውም, እና የዱር ህመምተኞች ብቻ ሊጠቀሙ ይችላሉ. ስለዚህ, የ KRAS ጂን ሚውቴሽን ሁኔታ በክሊኒካዊ መልኩ እንደ አስፈላጊ የሕክምና ምልክት ተደርጎ ይቆጠራል, እሱም ከኮሎሬክታል ካንሰር ትንበያ እና የሕክምና ውጤት ጋር ጠንካራ ግንኙነት አለው. እ.ኤ.አ. የ 2009 ብሄራዊ የካንሰር አጠቃላይ አውታረ መረብ (NCCN) የኮሎሬክታል ካንሰር ክሊኒካዊ ልምምድ መመሪያዎች ሁሉም የሜታስታቲክ ኮሎሬክታል ካንሰር ያለባቸው ታካሚዎች የKRAS ጂን ሚውቴሽን ሁኔታን መለየት እንዳለባቸው ይደነግጋል እና የ KRAS የዱር ዝርያ ብቻ EGFR ዒላማ የተደረገ ሕክምናን እንዲወስድ ይመከራል። በዚያው ዓመት የአሜሪካ የክሊኒካል ኦንኮሎጂ ማኅበር (ASCO) እንደ ሞለኪውላር ምልክት ለዕጢ ዒላማ የተደረገ ሕክምና ተመሳሳይ ክሊኒካዊ የሕክምና ምክሮችን ሰጥቷል፣ ይህም ጠቃሚ የመመሪያውን ጠቀሜታ ያሳያል። በአሁኑ ጊዜ የ KRAS የጄኔቲክ ምርመራ በክሊኒካዊ መልኩ በስፋት ተካሂዷል. በክሊኒካዊ ምርጫ ውስጥ ለመጥቀስ በዋናነት የሀገር ውስጥ KRAS ጂን ሚውቴሽን መፈለጊያ ዘዴዎችን እንገመግማለን።
1. በኮሎሬክታል ካንሰር ውስጥ የ KRAS ጂን ሚውቴሽን አወንታዊ መጠን
በአንጀት አንጀት ካንሰር ውስጥ የ KRAS ዘረ-መል (ጅን) ለውጥ መጠን ከ 35% እስከ 45% ከፍ ያለ ሲሆን ለአደጋ የተጋለጡ ሚውቴሽን ሥፍራዎች በቁጥር 12 እና 13 ላይ ናቸው ፣ እናም አሁንም ድረስ እንደ 2 እና 61 ያሉ ያልተለመዱ አሉ ፡፡ ጣቢያ ቀጥተኛ ቅደም ተከተል ፣ ከፍተኛ ጥራት ያለው የማቅለጥ ኩርባ ትንተና (ኤች.አር.ኤም.) ፣ ፒሮኪንግ ፣ የቁጥር ፒሲአር ፣ ሚውቴሽን ማጉላት የማገጃ ስርዓት (አምፕሊን አቲዮ) የአሠራር ለውጥ ስርዓት (አርኤምኤስ) ፣ እገዳ ቁርጥራጭ ርዝመት ፖሊሞርፊዝም (አርኤፍኤልፒ) ፣ ለ KRAS ጂን ሚውቴሽን ብዙ የመመርመሪያ ዘዴዎች አሉ ፡፡ የፖሊሜሬዝ ሰንሰለት ምላሽ-ነጠላ-ክር ተስተካካይ ፖሊሞርፊዝም ትንተና (PCR-singlestrand confomation polymorphism (PCR-SSCP) ፣ በታችኛው ዲታቴሽን የሙቀት መጠን PCR (COLD-PCR) እና ከፍተኛ አፈፃፀም ያለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ትንተና ፣ ወዘተ.
2. የ KRAS ሚውቴሽን ማወቂያ ዘዴዎች ግምገማ
1. ቀጥተኛ ቅደም ተከተል ዘዴ-የ KRAS ጂን ሚውቴሽን ለመፈለግ በጣም ጥንታዊው ዘዴ ነው ፣ እንዲሁም የጂን ሚውተሮችን ለመለየት የወርቅ መስፈርት ነው ፡፡ በዲዲዮክሲክ ቅደም ተከተል መርሆ ላይ የተመሠረተ የቀጥታ ቅደም ተከተል ዘዴ በመሠረቱ እጅግ ከፍተኛ በሆነ የካርታ ካርታ መልክ የጂን ቅደም ተከተል ለውጥን በትክክል ሊረዳ ይችላል ፡፡ የመመርመሪያው ዓይነት የበለጠ አጠቃላይ ነው ፣ እንዲሁም ቀደም ሲል የተተገበረው ሚውቴሽን መመርመሪያ ዘዴ ነው። የአዳዲስ ትውልድ ቅደም ተከተል መድረኮች ብቅ ቢሉም በአገር ውስጥ እና በውጭ ያሉ ምሁራን አሁንም የአዲሱን ዘዴ አስተማማኝነት ለመለካት እና ለመወሰን የቀጥታ ቅደም ተከተል ውጤቶችን እንደ ሚዛን ይጠቀማሉ ፡፡ ጋኦ ጂንግ እና ሌሎች. የኮሎሬክታል ካንሰር ባለባቸው 966 ታካሚዎች የ KRAS እና BRAF ጂን ሚውቴሽን ለመለየት ቀጥተኛ ቅደም ተከተል ተተግብሯል ፡፡ ይህ እንዲሁ በስነ-ጽሁፉ ውስጥ ከተጠቀሰው ትልቁ የቤት ናሙና ጋር የ KRAS ጂን ሚውቴሽን ትንታኔ ነው ፡፡ ሊንግ ዩን እና ሌሎች የቀጥታ ቅደም ተከተል ዘዴ የእያንዳንዱን ጂን የመለዋወጥ ሁኔታ ለመረዳት በጣም ቀጥተኛ እና ውጤታማ የመመርመሪያ ዘዴ ነው ብለው ያምናሉ ፣ ሚውቴሽን ዓይነትን ግልጽ ሊያደርግ ይችላል ፣ በተለይም ያልታወቁ ሚውቴሽኖችን ለመለየት ፡፡ ምንም እንኳን የዚህ ዘዴ ትብነት በአንፃራዊነት ዝቅተኛ ቢሆንም ፣ እንደ ህዋሳት ህዋሳትን ለማበልፀግ እንደ ማይክሮዲሴሽን ባሉ ዘዴዎች ሊሻሻል ይችላል ፡፡ የቀጥታ ቅደም ተከተል ዘዴው በሌሎች የአገር ውስጥ የምርምር ቡድኖች ውስጥ ትላልቅ የናሙና መጠኖችን በ KRAS ምርመራ ላይም ተተግብሯል ፡፡ ሆኖም ፣ ዝቅተኛ የስሜታዊነት ቀጥተኛ ቅደም ተከተል ትልቁ ኪሳራ ነው ፡፡ በቻይና ከተዘገበው ውጤት በመነሳት በቀጥታ በቅደም ተከተል የመለዋወጥ ለውጥ መጠን ዝቅተኛ አይደለም ፡፡ Liu Xiaojing እና ሌሎች. የቀጥታ ቅደም ተከተል እና የፔፕታይድ ኑክሊክ አሲድ መቆንጠጫ PCR (PNA-PCR) ጋር ሲነፃፀር እና የ 43 KRAS ጂን ሚውቴሽን ቀጥተኛ ቅደም ተከተል ተገኝቷል ፡፡ ከእነዚህ ሚውቴሽኖች በተጨማሪ PNA-PCR እንዲሁ በቀጥታ በቅደም ተከተል ተገኝቷል ፡፡ በዱር ዓይነት ውስጥ አስር ሚውቴሽን የተገኘ ሲሆን የዱር ህመምተኞችን በፒሲአር ለመወሰን እና የቀጥታ ቅደም ተከተል ዘዴ ተለዋጭ ህሙማንን ለመለየት አስተያየቶች ተሰጥተዋል ፡፡ ኪዩ ቲያን እና ሌሎች. በ 131 የኮሎሬክታል ካንሰር ናሙናዎች በፍሎረሰንት ፒሲአር በተመቻቸ የኦሊጉኑክሊዮታይድ ምርመራ ዘዴ እና ቀጥተኛ ቅደም ተከተል ዘዴ የተገኘ ሲሆን የ KRAS ጂን ሚውቴሽን አዎንታዊ ምጣኔዎች 41.2% (54/131) እና 40.5% (53/131) ነበሩ ፡፡ ቤይ ዶንግዩ እንዲሁ የተለያዩ ዘዴዎችን የመለየት ችሎታን ተወያይቷል ፡፡ ከ 200 የአንጀት አንጀት ካንሰር ህመምተኞች መካከል 63 ቱ በ RT-qPCR ሚውቴሽን ተገኝተዋል ፣ እና ሚውቴሽን የመለየት መጠን 31.5% ነበር ፡፡ 169 ናሙናዎች 50 በሚውቴሽን ፣ በሚውቴሽን ምርመራ መጠን 29.6% በቀጥታ በቅደም ተከተል በቅደም ተከተል ቅደም ተከተል ተይዘዋል ፡፡ ምንም እንኳን የቀጥታ ቅደም ተከተል ዘዴው በትክክል ፣ በተጨባጭ እና በተለይም የ KRAS ዘረመል ለውጥ ሁኔታን መለየት ይችላል ፣ እንደ ከፍተኛ የቴክኒክ መስፈርቶች ፣ የተወሳሰበ የአሠራር ሂደቶች ፣ እንደ ብክለት በቀላሉ የሚከሰት ፣ እና ጊዜ የሚወስድ እና አድካሚ ውጤቶችን የመለየት ድክመቶች እንዲሁ በጣም ግልጽ ብዙውን ጊዜ የቅደም ተከተል መሣሪያዎች የሉም ፣ እና ናሙናው ወደ ተጓዳኝ ኩባንያ ለሙከራ መላክ ያስፈልጋል ፣ ረጅም ጊዜ የሚወስድ እና ከፍተኛ ወጪ የሚጠይቅ ስለሆነም ከፍተኛ ገደቦች አሉት ፡፡
የፒዮሮኪንግ ዘዴ
የፒዮሮኪንግ ዘዴ እንዲሁ በቅደም ተከተል የመነካካት ስሜትን ፣ የምርመራ ወጪን እና ሪፖርት የማድረግ ጊዜን በተመለከተ ለ KRAS ጂን ሚውቴሽን ለመለየት የበለጠ አመቺ ዘዴ ነው ፡፡ የዚህ ዘዴ ተደጋጋሚነት የተሻለ ነው። በተገኘው ከፍተኛ ካርታ መሠረት የአንድ የተወሰነ ጣቢያ ሚውቴሽን ድግግሞሽ መጠናዊ ጥናት እና በተለያዩ ጣቢያዎች በሚውቴሽን ድግግሞሾች መካከል ያለው ንፅፅር በጨረፍታ ግልጽ ነው ፡፡ ከቅርብ ዓመታት ወዲህ ኦጊኖ እና ሌሎች ፣ ሁትኪንስ እና ሌሎች. የአንጀት አንጀት ካንሰር ትልቅ ናሙና ባላቸው ታካሚዎች ላይ የ KRAS ሚውቴሽን ለመፈተሽ ፒሮኪውኪንግ ቴክኖሎጂን ተጠቅመዋል ፡፡ ውጤቶቹ እንደሚያመለክቱት ፒሮይኪንግኪንግ ቴክኖሎጂ የታካሚዎችን ዒላማ ያደረገ ሕክምና ለመመርመር ኃይለኛ መሣሪያ ነው ፡፡ ዕጢ ሞለኪውላዊ ምርመራ ሰፊ የመተግበሪያ ተስፋዎች አሉት ፡፡ የሀገር ውስጥ ምሁራን ደግሞ ያለስሜት ጥሩ ትክክለኛነት እና አስተማማኝነት ጋር, colorectal ካንሰር ውስጥ KRAS ሚውቴሽን እንዲፈትሹ ለማድረግ ቴክኖሎጂ pyrosequencing ተጠቅመዋል. ይህ ዘዴ የተሻለ ዝርዝር እና ከፍተኛ የስሜት ችሎታ አለው ፡፡ ሰንደስትሮም እና ሌሎች. ክሊኒክ-ተኮር PCR ን እና ክሊኒካዊ መተግበሪያዎችን በተመለከተ ፒሮኪውኪንግን በማነፃፀር እና በ 314 ውስጥ በ ‹KRAS› ለውጦች ውስጥ በቀኝ-ካንሰር ህመምተኞች ላይ ፣ ‹‹››››››››››››››››››››››››››››››››››››››››››› ፒሲአር ፣ እና ዝቅተኛ ዕጢ ህዋስ ይዘት ላላቸው ሕብረ ሕዋሶች ጥሩ ስሜት አለው ፡፡ የእጢ ሕዋሳትን መጠን ከ 1.25% ወደ 2.5% ይቀንሱ ፡፡ ፒሮኪኪንግ አሁንም የሚውቴሽን ምልክቶችን መለየት ይችላል ፡፡ በናሙናው ውስጥ ያለው የሚውቴሽን አሌል ዝቅተኛ ይዘት በሳንግር ቅደም ተከተል እንዲታይ 20% መድረስ ሲያስፈልገው 10% ሲደርስ በኤችአርኤም ዘዴ ሊገኝ ይችላል ፣ እና ለ ‹pyrosequenceence› ሚውቴሽን ብቻ በ 5% ሊገኝ ይችላል ፡፡ ሀሌሎች በ 717 ታካሚዎች የአንጀት ቀውስ ካንሰር ውስጥ የ ‹KRAS› ለውጦችን ለመለየት ፒሮኪውኪንግን ተጠቅመን የ KRAS ሚውቴሽን ድግግሞሽ መጠን 40.9% መሆኑን አገኘን ፡፡ የኮዶን 12 ሚውቴሽን መጠን 30.1% ፣ የኮዶን 13 ሚውቴሽን መጠን 9.8% ሲሆን የኮዶን 61 ሚውቴሽን መጠን 1.0% ነበር ፡፡ ውጤቱን የበለጠ አስተማማኝ በማድረግ ህብረ ሕዋሳቱን ከፍ ባለ ዕጢ ይዘት በእጅ ከመሞከር በፊት በእጅ በማዳቀል አበልጽገናል ፡፡ ዘዴው ጥሩ ስሜታዊነት እና ልዩነት አለው ፣ እና በክሊኒካዊ ልምምድ ውስጥ ለማዳበር ቀላል ነው። የፒሮኪውኪንግ ኪሳራ ከፍተኛ የመመርመሪያ ወጪ ነው ፣ እና ለምርመራ ናሙናዎች ነጠላ-ፈትል ዲ ኤን ኤ የማዘጋጀት ሂደት ከባድ ነው ፡፡ ለወደፊቱ ፒሮኪኪንግ በድርብ የተጠመዱ የፒ.ሲ.አር. ምርቶችን በቀጥታ ለመመርመር ለቴክኖሎጂ ልማት መሰጠት ይችላል ፣ ይህም ክዋኔውን በእጅጉ ያመቻቻል ፡፡ እና የክሊኒካዊ ሙከራን አጠቃላይ ማስተዋወቅ ለማሳካት የቅደም ተከተል ዋጋን ውጤታማ በሆነ መንገድ ይቀንሱ ፡፡
3. የ ARMS ዘዴ
ይህ ቴክኖሎጂ የዱር ዝርያዎችን እና ተለዋዋጭ ጂኖችን ለመለየት ፕራይመሮችን ይጠቀማል ፣ wh
ኢች እስከ 1980 ዎቹ መጀመሪያ ድረስ ሪፖርት ተደርጓል ፡፡ የዚህ ዘዴ ትልቁ ጥቅም እስከ 1.0% የሚደርስ ስሜታዊነት ያለው እና እስከ 1.0% ባነሰ ናሙናዎች ውስጥ የሚውጡ ጂኖችን መለየት መቻሉ ነው ፡፡ በዲዛይን ውስጥ የታለመው ምርት ርዝመት በከፍተኛ መጠን ሊታጠር ይችላል ፣ እናም በፓራፊን ውስጥ ከተካተተው የሕብረ ሕዋስ ናሙና የተወሰደው አብዛኛው ዲ ኤን ኤ የተከፋፈለ በመሆኑ ትክክለኛ የምርመራ ውጤቶችን ማግኘት አይቻልም። በማጉላት ወቅት የዝግ-ቧንቧ ሥራን ለማሳካት ይህ ቴክኖሎጂ የእውነተኛ ጊዜውን የ PCR መድረክን ያጣምራል ፡፡ ክዋኔው ቀላል እና የተሻሻለውን ምርት ብክለትን በከፍተኛ ደረጃ ለማስወገድ የሚያስችለውን የምርት ድህረ-ሂደት አያስፈልገውም። በአሁኑ ጊዜ ጊንጥ-አርኤምኤስ የጊንጥ ምርመራ እና የማጉላት ማገጃ ሚውቴሽን ስርዓትን በማጣመር በዓለም ላይ በብዛት ጥቅም ላይ ውሏል ፡፡ የሁለቱ ቴክኖሎጂዎች ጥምረት የሁለቱን ወገኖች ትብነት እና ልዩነት ከፍ ሊያደርግ ይችላል ፡፡ ጋዎ ጂ እና ሌሎች. ይህ ዘዴ አስተማማኝ እና ትክክለኛ መሆኑን መናገሩ, colorectal ካንሰር ጋር 167 በሽተኞች ውስጥ KRAS ጂን የሚውቴሽን ሁኔታ ለማወቅ ይህንን ዘዴ ተጠቅሟል. ዋንግ ሁይ እና ሌሎች. እንዲሁም በ 151 ፎርማኔልዴይድ በተስተካከለ እና በፓራፊን ውስጥ በተካተቱ ሕብረ ሕዋሳት ውስጥ የ KRAS ሚውቴሽንን ለመለየት ARMS ጥቅም ላይ ውሏል ፡፡ በአሜሪካ ውስጥ የ “KBAS” ኪት (ሮቼ) በ KRAS ክሊኒካዊ ምርመራ እና በአውሮፓ ህብረት በ ‹ቪትሮ ዲያግኖስቲክስ› (CE-IVD) የተረጋገጠው የቴራስክሪን RGQ ኪት (ኪያገን) በፀደቀው በኤ.ዲ.ኤስ. ከተለመዱት ዘዴዎች መካከል የ ARMS ዘዴ በጣም ስሜታዊ ነው እናም ዋጋው በአንፃራዊነት ተመጣጣኝ ነው። ስለዚህ ፣ በአገር ውስጥ እና በውጭ የሚገኙ የ KRAS ጂኖች ክሊኒካዊ ምርመራ አንድ ትልቅ ክፍል የ ARMS ዘዴን እየተጠቀመ ነው ፣ ግን ዘዴው በፒሲአር ቴክኖሎጂ ላይ የተመሠረተ ስለሆነ ፣ የእሱ ጉድለት ሊታወቅ የሚችለው የታወቁ የጣቢያ ሚውቴሽን ብቻ ነው ፡፡
4. በእውነተኛ ጊዜ የፍሎረሰንስ ብዛት PCR ዘዴ
ሚውቴሽን በሲቲ እሴት ለመወሰን PCR ላይ የተመሰረተ የመፈለጊያ ዘዴ ነው። የጠንካራ ልዩነት ፣ ከፍተኛ ስሜታዊነት ፣ ትክክለኛ መጠን ፣ ቀላል አሰራር እና ሙሉ በሙሉ የተዘጋ ምላሽ ጥቅሞች አሉት። በኮሎሬክታል ካንሰር ውስጥ የKRAS ሚውቴሽንን ለመለየት ብዙ የሙከራ ቡድኖች ይህንን ዘዴ ወስደዋል። ከቀጥታ ቅደም ተከተል ዘዴ ጋር ሲነጻጸር፣ መጠናዊ PCR በስሜታዊነት የበለጠ ጥቅም ይይዛል። ሁለቱን ዘዴዎች የሚያወዳድሩ አብዛኞቹ ምሁራን መጠናዊ PCR የበለጠ ስሱ እንደሆነ ያምናሉ። Liu Wei እና ሌሎች. ሁለት ዘዴዎችን በመጠቀም 280 የኮሎሬክታል ካንሰር KRAS ጂን ሚውቴሽን ፣ 94 የ KRAS ጂን ቅደም ተከተል ሚውቴሽን የምርመራ ውጤቶችን ዝርዝር ትንታኔ ለማድረግ ፣ አወንታዊው መጠን 33.57% (94/280) ነበር ፣ ከእነዚህም ውስጥ ፣ የእውነተኛ ጊዜ የፍሎረሰንት መጠን። PCR አዎንታዊ ነበር 91 ጉዳዮች 96.8% (91/94) የስሜት ሕዋሳት ነበራቸው። ከ186ቱ የጂን ቅደም ተከተሎች የዱር አይነት ጉዳዮች፣ 184ቱ በእውነተኛ ጊዜ መጠናዊ PCR አሉታዊ ነበሩ፣ የተወሰነው 98.9% (184/186)። በእውነተኛ ጊዜ የፍሎረሰንት መጠናዊ PCR ዘዴ እና ቀጥተኛ የጂን ቅደም ተከተል ዘዴ መካከል ያለው የአጋጣሚ ነገር 98.2 በመቶ ነበር። በሁለቱ የፍተሻ ዘዴዎች የእያንዳንዱ ሚውቴሽን ጣቢያ አወንታዊ እና አሉታዊ የአጋጣሚዎች መጠን ከ90% በላይ ሲሆን የአራት ሳይቶች የአጋጣሚነት መጠን 100% ደርሷል። የሁለቱ ዘዴዎች የማወቂያ ውጤቶች በጣም ወጥነት ያላቸው ነበሩ፣ ይህም የፍሎረሰንት መጠናዊ PCRን የሚያመለክት ነው ሚውቴሽን ለመለየት የበለጠ አስተማማኝ ዘዴ ነው። ነገር ግን በ PCR ላይ የተመሰረቱ ዘዴዎች በሚታወቁ ሚውቴሽን ዓይነቶች ላይ ተመስርተው ፕሪመር እና መመርመሪያዎችን መንደፍ ያስፈልጋቸዋል, ስለዚህ ሁሉም ሚውቴሽን ሊገኙ አይችሉም, እና የተወሰኑ ጣቢያዎች ብቻ ሊገኙ ይችላሉ. አንድ የተወሰነ ጣቢያ በመሳሪያው መፈለጊያ ክልል ውስጥ ካልተካተተ፣ ምንም እንኳን ሚውቴሽን ቢኖርም፣ የኪቱ ውጤቱ አሁንም አሉታዊ ነው። በተጨማሪም፣ የቁጥር PCR ስሜታዊነት ከፍ ያለ ቢሆንም፣ የውሸት አወንታዊ መረጃዎች መኖራቸውን አሁንም በዲኤንኤ ቅደም ተከተል ቴክኖሎጂ ማረጋገጥ ያስፈልጋል፣ ወይም በ KRAS ሚውቴሽን ሁኔታ እና በታለመው ውጤታማነት መካከል ያለውን ትስስር ለማረጋገጥ ወደ ኋላ መለስ ብለው እና ትልቅ ናሙና ያላቸው ክሊኒካዊ ሙከራዎች። መድሃኒቶች . ስለዚህ, ሚውቴሽንን የመለየት ከፍተኛ ስሜት በጭፍን መከተል የለበትም, ልዩነቱ እና የመለየት ትክክለኛነት ግን ችላ ሊባል ይገባል. በተለያዩ የላቦራቶሪ ሁኔታዎች ውስጥ በናሙናዎች ውስጥ ሚውቴሽንን ለመለየት በጣም ጥሩው ዘዴ እንዲሁ የተለየ ሊሆን ይችላል። ከፍተኛ መጠን ያለው ሚውቴሽን ላሉት ናሙናዎች የሳንገር ቅደም ተከተል ዘዴ የጂን ሚውቴሽን በመለየት ረገድ ከፍተኛ ትክክለኝነት ያለው ሲሆን አነስተኛ መጠን ያለው ሚውቴሽን ላላቸው ናሙናዎች ደግሞ የሳንገር ቅደም ተከተል ዘዴ የውሸት አሉታዊ ነገሮች ሊከሰቱ ይችላሉ እና የፍሎረሰንት PCRን እንደ ቴክኒካል መድረክ በመጠቀም የመለየት ዘዴ በከፍተኛ ስሜት ሊታወቅ ይችላል.
5. የኤችአርኤም ዘዴ
በቅርብ ዓመታት ውስጥ በጣም በተለምዶ ጥቅም ላይ ከሚውሉት የጂን ምርመራ ዘዴዎች አንዱ ነው ፡፡ ብክለትን ለማስወገድ ቀላል ፣ ፈጣን ፣ ስሜታዊ እና ነጠላ ቱቦ ጥቅሞች አሉት ፡፡ ሊዩ ሊኪን እና ሌሎች በክሊኒካዊ ሙከራ ውስጥ የመጠቀምን አዋጭነት ለመመርመር የ ‹HRM› ዘዴን በመጠቀም በ 64 ታካሚዎች የአንጀት ቀውስ ካንሰር ጋር የ KRAS ጂን ሚውቴሽን ለመለየት እና ውጤቱን ለማጣራት ቀጥተኛ ቅደም ተከተል ተጠቅመዋል ፡፡ የኤችአርኤም እና የቀጥታ ቅደም ተከተል ውጤቶች ወጥነት ያላቸው ሆነው ተገኝተዋል ፡፡ ከቀጥታ ቅደም ተከተል ጋር ሲነፃፀር የ KRAS ጂን ሚውቴሽን በኤችአርኤም መገኘቱ ቀላል እና ትክክለኛ ነው ፣ ይህም ለክሊኒካዊ ምርመራ ተስማሚ የሆነ አስተማማኝ ዘዴ ነው ፡፡ ቼን ዚሂንግ እና ሌሎች. ትብነታቸውን ለመገምገም የተለያዩ የ KRAS ተለዋጭ የፕላዝማዎችን መጠን ያላቸውን ተከታታይ ድብልቅ ናሙናዎችን ለመሞከር የኤችአርኤም ዘዴን ይጠቀሙ ነበር ፡፡ በተቀላቀሉት ናሙናዎች ውስጥ የፕላዝሚድ ሚውቴሽን መጠን 10% ሆኖ ተገኝቷል ፣ እናም ስሜታዊነቱ 10% ደርሷል ፡፡ በመቀጠልም ዘዴው በ 60 የኮሎሬክታል ካንሰር ህብረ ህዋስ ናሙናዎች ውስጥ የ KRAS የዘር ለውጥን ለመለየት ጥቅም ላይ ውሏል ፡፡ ከቀጥታ ቅደም ተከተል ዘዴ ጋር ሲነፃፀር የኤች.አር.ኤም. ዘዴ ስሜታዊነት 100% ነበር ፣ እና ልዩነቱ 96% (43/45) ነበር ፡፡ የኤች.አር.ኤም.ኤም ዘዴ ኪሳራ የተወሰነውን ሚውቴሽን ዓይነት እና የትኛው ኮዶን እንደተለወጠ በትክክል ለማቅረብ የማይቻል መሆኑ ነው ፡፡ በማቅለጫው ኩርባ ላይ ያልተለመደ ሁኔታ ከተገኘ ፣ ሚውቴሽን ዓይነትን ለመለየት የቅደም ተከተል ዘዴ ያስፈልጋል ፡፡ የሃርሌ የምርምር ቡድን የፍሎረሰንት PCR ፣ ARMS እና HRM ዘዴዎችን ለማነፃፀር 156 ጉዳዮችን የኮሎሬክታል ካንሰር ቲሹ ተጠቅሟል ፡፡ ውጤቶቹ እንደሚጠቁሙት ሦስቱ ዘዴዎች ለህክምና ምርመራ ተስማሚ ቢሆኑም የኤች.አር.ኤም አስተማማኝነት እንደ ሌሎቹ ሁለት ዘዴዎች ጥሩ አይደለም ፡፡
6. ሌሎች ዘዴዎች
ከላይ ከተጠቀሱት ዘዴዎች በተጨማሪ ሌሎች የመመርመሪያ ዘዴዎች እንደ PCR-SSCP ፣ ከፍተኛ አፈፃፀም ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ፣ ፍሎረሰንት ፒ.ሲ.አር.-የተመቻቸ የኦሊጉኑክሊዮትድ ምርመራ ዘዴ ፣ የጎጆ PCR እና የ ARMS ጥምረት ዘዴ ፣ ቀዝቃዛ-ፒ.ሲ.አር. እንደ ትግበራ የራሳቸው ጥቅሞች እና ጉዳቶች አሏቸው ፡፡ ዘዴ ፣ ወዘተ ከፍተኛ አፈፃፀም ያለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ጠንካራ ልዩነት አለው ፣ ግን ለናሙናዎች ያለው ፍላጎት ትልቅ ነው ፡፡ PCR-SSCP አነስተኛ ዋጋ እና ኢኮኖሚያዊ ነው ፣ ግን ክዋኔው ውስብስብ ነው; በፍሎረሰንት PCR ላይ የተመሠረተ ሚውቴሽን መፈለጊያ ቴክኖሎጂ ጠንካራ ልዩነት ፣ ከፍተኛ ትብነት እና ትክክለኛ መጠናዊነት አለው ፣ ቀላል አሠራር ፣ ሙሉ በሙሉ የታገደ ምላሽ እና ሌሎች ጥቅሞች አሉት ፣ ግን ሁሉም በሚታወቀው ሚውቴሽን ዓይነት መሠረት ፕሪመር እና ምርመራዎችን ማዘጋጀት አለባቸው ፣ ስለሆነም የተወሰኑ ጣቢያዎች ብቻ ሊሆኑ ይችላሉ ተገኝቷል ፣ እና ሊሆኑ የሚችሉ ሚውቴሽኖች ሁሉ ሊገኙ አይችሉም።
3. ማጠቃለያ
በማጠቃለያው ፣ በተለያዩ ላቦራቶሪዎች ውስጥ የሚውቴሽን ጣቢያዎች እና የመለየት ዘዴዎች ተመሳሳይ ስላልሆኑ ፣ የተተነተነው ዕጢው ናሙና መጠን እና የዲ ኤን ኤ የማውጣቱ ጥራት እንዲሁ ያልተስተካከለ ነው ፣ ይህም በቤተ ሙከራዎች መካከል ትልቅ ወይም ትንሽ የሙከራ ውጤቶች እንዲኖሩ ምክንያት ሆኗል ፡፡ የ KRAS ዘረ-መል (ጅን) ለውጥ በተለያዩ ሀገሮች አሳሳቢ የሆነ ክሊኒካዊ ምርመራ ጉዳይ ሆኗል ፡፡ በአሁኑ ጊዜ በ KRAS ዘረመል ውስጥ ሚውቴሽን ለመለየት ብዙ ዘዴዎች አሉ ፡፡ ከከፍተኛ እስከ ዝቅተኛ ያለው ትብነት ARMS ፣ ፒሮኪውኪንግንግ ፣ ኤችአርኤም ፣ በእውነተኛ ጊዜ የመጠን ፒሲአር እና ቀጥተኛ ቅደም ተከተል ነው ፡፡ ከሕክምናው እውነታ አንጻር ዝቅተኛ ትብነት ለክሊኒካዊ ሕክምና አይመችም ፣ ግን በጣም ስሜታዊ የሆኑ ዘዴዎች የመመርመሪያውን ልዩነት እንዲቀንሱ ያደርጉታል ፣ እና አላስፈላጊ የሐሰት አዎንታዊ ውጤቶች ሊከሰቱ እና የታካሚውን ቀጣይ የመድኃኒት ስርዓት ላይ ተጽዕኖ ሊያሳድሩ ይችላሉ ፡፡ ከላይ የተጠቀሱትን ገጽታዎች ከግምት ውስጥ በማስገባት በኤፍዲኤ ከፀደቀው ዘዴ ጋር ተደምሮ የ ARMS ዘዴ ይመከራል ፡፡ በእርግጥ ከገበያ እይታ አንፃር ሞለኪውላዊ ዲያግኖስቲክስ እኔን አፅንዖት መስጠት የለበትም
thods, ነገር ግን በመጨረሻው ትክክለኛ ውጤቶች ላይ አተኩር. የተለያዩ ላቦራቶሪዎች እንደ ተጨባጭ ሁኔታ ተገቢውን የመፈተሻ ዘዴዎችን ሊወስዱ ይችላሉ, ነገር ግን ጥሩ የኦፕሬተር ብቃቶች እና የውስጥ የጥራት ቁጥጥር ስርዓቶች ካላቸው ብቻ ነው. አሁን ባለው የሀገር ውስጥ የላቦራቶሪ የአካባቢ ሁኔታዎች ውስጥ አስተማማኝ የላብራቶሪ ምርመራ ጥራትን ለማረጋገጥ ደረጃውን የጠበቀ PCR ላቦራቶሪ ውስጥ ምርመራ ማካሄድ እና በሀገር ውስጥ እና በአለም አቀፍ የክፍል ውስጥ የጥራት ቁጥጥር ስራዎች ውስጥ መሳተፍ አስፈላጊ ነው. ቋሚ ውጤቶችን ለማረጋገጥ ደረጃውን የጠበቀ አስተዳደር አስፈላጊ ሁኔታ ነው. በቻይና የ KRAS ጂን ክሊኒካዊ ምርመራን አንድ ማድረግ እና ደረጃውን የጠበቀ እና ደረጃውን የጠበቀ እና ደረጃውን የጠበቀ የሙከራ መርሃ ግብር በተለያዩ ፍላጎቶች መሠረት ማመንጨት አስቸኳይ ፍላጎት አለ እና ይህ ፕሮግራም BRAF ፣ PIK23450_3CA ፣ EGFR እና መለየት ይቻላል ። ሌሎች ጂኖች ክሊኒካዊ ሞለኪውላር ፓቶሎጂ ምርመራን ለማበረታታት.
