Targeting drugs such as cetuximab and panitumumab have been widely used in clinic as effective therapeutic drugs for colorectal cancer. Clinical data show that patients with KRAS mutations have no significant effect on this monoclonal antibody drug, and only wild-type patients can benefit from it. Therefore, the KRAS gene mutation status is clinically regarded as an important therapeutic marker, which has a strong correlation with the prognosis and treatment effect of colorectal cancer. The 2009 National Cancer Comprehensive Network (NCCN) Colorectal Cancer Clinical Practice Guidelines stipulates that all patients with metastatic colorectal cancer must detect KRAS gene mutation status, and only KRAS wild type is recommended to receive EGFR targeted therapy. In the same year, the American Society of Clinical Oncology (ASCO) also issued the same clinical treatment recommendations as a molecular marker for tumor targeted therapy, which shows its important guiding significance. At present, KRAS genetic testing has been widely carried out clinically. We mainly evaluate the domestic KRAS gene mutation detection methods for reference in clinical selection.
1. பெருங்குடல் புற்றுநோயில் KRAS மரபணு மாற்றத்தின் நேர்மறை வீதம்
பெருங்குடல் புற்றுநோயில், KRAS மரபணுவின் பிறழ்வு விகிதம் 35% முதல் 45% வரை அதிகமாக உள்ளது, மேலும் அதிக ஆபத்துள்ள பிறழ்வு தளம் எக்ஸான் 12 இல் 13 மற்றும் 2 கோடன்கள் ஆகும், மேலும் 61 மற்றும் 146 போன்ற அரிதானவை இன்னும் உள்ளன. பிறழ்வு தளம். நேரடி வரிசைமுறை, உயர் தெளிவுத்திறன் உருகும் வளைவு பகுப்பாய்வு (HRM), பைரோசிசென்சிங், அளவு பி.சி.ஆர், பிறழ்வு பெருக்கம் தொகுதி அமைப்பு (ஆம்ப்ளிங்க் ஏடியோ) நெஃப்ராக்டரிமுட்டேஷன் சிஸ்டம் (ARMS), கட்டுப்பாடு துண்டு நீளம் பாலிமார்பிசம் (RFLP), உள்ளிட்ட KRAS மரபணு மாற்றங்களுக்கான பல கண்டறிதல் முறைகள் உள்ளன. பாலிமரேஸ் சங்கிலி எதிர்வினை-ஒற்றை-ஸ்ட்ராண்ட் இணக்க பாலிமார்பிசம் பகுப்பாய்வு (பி.சி.ஆர்-சிங்கிள்ஸ்ட்ராண்ட் கன்ஃபோமேஷன் பாலிமார்பிசம் (பி.சி.ஆர்-எஸ்.எஸ்.சி.பி), குறைந்த டெனடரேஷன் டெம்பரேட்டர் பி.சி.ஆர் (கோல்ட்-பி.சி.ஆர்) மற்றும் உயர் செயல்திறன் கொண்ட திரவ குரோமடோகிராபி பகுப்பாய்வு போன்றவற்றில் இணை-பெருக்கம்.
2. KRAS பிறழ்வு கண்டறிதல் முறைகளின் மதிப்பீடு
1. நேரடி வரிசைமுறை முறை: இது KRAS மரபணு பிறழ்வுகளைக் கண்டறிவதற்கான மிகவும் உன்னதமான முறையாகும், மேலும் இது மரபணு பிறழ்வுகளைக் கண்டறிவதற்கான தங்கத் தரமாகும். டைடியோக்ஸி வரிசைமுறையின் கொள்கையின் அடிப்படையில் நேரடி வரிசைமுறை முறை அடிப்படை உச்ச வரைபடத்தின் வடிவத்தில் மரபணு வரிசையின் மாற்றத்தை மிகவும் உள்ளுணர்வாகக் காட்ட முடியும். கண்டறிதல் வகை மிகவும் விரிவானது, மேலும் இது ஆரம்பத்தில் பயன்படுத்தப்பட்ட பிறழ்வு கண்டறிதல் முறையாகும். புதிய தலைமுறை வரிசைமுறை தளங்கள் தோன்றினாலும், உள்நாட்டிலும் வெளிநாட்டிலும் உள்ள அறிஞர்கள் புதிய முறையின் நம்பகத்தன்மையை அளவிடுவதற்கும் தீர்மானிப்பதற்கும் நேரடி வரிசைமுறைகளின் முடிவுகளை ஒரு அளவாகப் பயன்படுத்துகின்றனர். காவ் ஜிங் மற்றும் பலர். பெருங்குடல் புற்றுநோயால் பாதிக்கப்பட்ட 966 நோயாளிகளில் KRAS மற்றும் BRAF மரபணு பிறழ்வுகளைக் கண்டறிவதற்கான நேரடி வரிசைமுறை பயன்படுத்தப்பட்டது. இது இலக்கியத்தில் அறிக்கையிடப்பட்ட மிகப்பெரிய உள்நாட்டு மாதிரியுடன் KRAS மரபணு மாற்றத்தின் பகுப்பாய்வாகும். ஒவ்வொரு மரபணுவின் பிறழ்வு நிலையைப் புரிந்துகொள்வதற்கான நேரடி வரிசைமுறை முறை மிகவும் நேரடி மற்றும் பயனுள்ள கண்டறிதல் முறையாகும் என்று லிங் யூன் மற்றும் பிறர் நம்புகின்றனர், இது பிறழ்வு வகையை தெளிவுபடுத்துகிறது, குறிப்பாக அறியப்படாத பிறழ்வுகளைக் கண்டறிவதற்கு. இந்த முறையின் உணர்திறன் ஒப்பீட்டளவில் குறைவாக இருந்தாலும், கட்டி செல்களை வளப்படுத்த மைக்ரோடிசெக்ஷன் போன்ற முறைகளால் இதை மேம்படுத்தலாம். பிற உள்நாட்டு ஆராய்ச்சி குழுக்களில் பெரிய மாதிரி அளவுகளை KRAS கண்டறிவதற்கும் நேரடி வரிசைமுறை முறை பயன்படுத்தப்பட்டுள்ளது. இருப்பினும், குறைந்த உணர்திறன் நேரடி வரிசையின் மிகப்பெரிய தீமை ஆகும். சீனாவில் அறிக்கையிடப்பட்ட முடிவுகளிலிருந்து ஆராயும்போது, நேரடி வரிசைமுறையின் மூலம் பிறழ்வு கண்டறிதல் வீதம் குறைவாக இல்லை. லியு சியாஜிங் மற்றும் பலர். நேரடி வரிசைமுறை மற்றும் பெப்டைட் நியூக்ளிக் அமில கிளாம்ப் பி.சி.ஆர் (பி.என்.ஏ-பி.சி.ஆர்) உடன் ஒப்பிடும்போது, KRAS மரபணு மாற்றங்களின் 43 வழக்குகள் நேரடி வரிசைமுறையால் கண்டறியப்பட்டன. இந்த பிறழ்வுகளுக்கு மேலதிகமாக, பி.என்.ஏ-பி.சி.ஆரும் நேரடி வரிசைமுறையால் கண்டறியப்பட்டது. காட்டு வகைகளில் பத்து பிறழ்வுகள் காணப்பட்டன, மேலும் காட்டு வகை நோயாளிகளை பி.சி.ஆரால் தீர்மானிக்க பரிந்துரைகள் செய்யப்பட்டன மற்றும் பிறழ்ந்த நோயாளிகளை தீர்மானிக்க நேரடி வரிசைமுறை முறை. கியு தியான் மற்றும் பலர். ஃப்ளோரசன்ட் பி.சி.ஆர்-உகந்த ஒலிகோணுக்ளியோடைடு ஆய்வு முறை மற்றும் நேரடி வரிசைமுறை முறை மூலம் 131 பெருங்குடல் புற்றுநோய் மாதிரிகள் கண்டறியப்பட்டன, மேலும் KRAS மரபணு மாற்றங்களின் நேர்மறையான விகிதங்கள் 41.2% (54/131) மற்றும் 40.5% (53/131) ஆகும். பாய் டோங்யூ வெவ்வேறு முறைகளின் கண்டறிதல் உணர்திறன் குறித்தும் விவாதித்தார். 200 பெருங்குடல் புற்றுநோய் நோயாளிகளில், 63 பேர் RT-qPCR பிறழ்வுகளால் கண்டறியப்பட்டனர், மேலும் பிறழ்வு கண்டறிதல் வீதம் 31.5%; 169 மாதிரிகள் வெற்றிகரமாக வரிசைப்படுத்தப்பட்டன, 50 வழக்குகள் பிறழ்வு, பிறழ்வு கண்டறிதல் வீதம் 29.6%. நேரடி வரிசைமுறை முறை KRAS மரபணு பிறழ்வு நிலையை துல்லியமாகவும், புறநிலையாகவும், குறிப்பாகவும் கண்டறிய முடியும் என்றாலும், உயர் தொழில்நுட்ப தேவைகள், சிக்கலான செயல்பாட்டு நடைமுறைகள், குறுக்கு மாசுபாட்டை ஏற்படுத்த எளிதானது, மற்றும் முடிவுகளின் நேரத்தை எடுத்துக்கொள்வது மற்றும் உழைப்பு விளக்கம் போன்ற அதன் குறைபாடுகள் மிகவும் வெளிப்படையானது. பெரும்பாலும் வரிசைப்படுத்தும் கருவிகள் எதுவும் இல்லை, மேலும் மாதிரியை சோதனைக்கு தொடர்புடைய நிறுவனத்திற்கு அனுப்ப வேண்டும், இது நீண்ட நேரம் எடுக்கும் மற்றும் அதிக செலவைக் கொண்டுள்ளது, எனவே இது பெரிய வரம்புகளைக் கொண்டுள்ளது.
பைரோசென்சிங் முறை:
தொடர்ச்சியான உணர்திறன், கண்டறிதல் செலவு மற்றும் புகாரளிக்கும் நேரம் ஆகியவற்றின் அடிப்படையில் KRAS மரபணு மாற்றத்தைக் கண்டறிவதற்கு பைரோசென்சிங் முறை மிகவும் வசதியான முறையாகும். இந்த முறையின் மீண்டும் நிகழ்தகவு சிறந்தது. பெறப்பட்ட உச்ச வரைபடத்தின்படி, ஒரு குறிப்பிட்ட தளத்தின் பிறழ்வு அதிர்வெண் பற்றிய அளவு ஆய்வு மற்றும் வெவ்வேறு தளங்களின் பிறழ்வு அதிர்வெண்களுக்கு இடையிலான ஒப்பீடு ஆகியவை ஒரே பார்வையில் தெளிவாக உள்ளன. சமீபத்திய ஆண்டுகளில், ஓகினோ மற்றும் பலர், ஹட்சின்ஸ் மற்றும் பலர். பெருங்குடல் புற்றுநோயின் பெரிய மாதிரிகள் உள்ள நோயாளிகளுக்கு KRAS பிறழ்வுகளை சோதிக்க பைரோசென்சிங் தொழில்நுட்பத்தைப் பயன்படுத்தியிருக்கிறீர்கள். இலக்கு சிகிச்சைக்காக நோயாளிகளைத் திரையிடுவதற்கு பைரோசென்சிங் தொழில்நுட்பம் ஒரு சக்திவாய்ந்த கருவியாகும் என்று முடிவுகள் குறிப்பிடுகின்றன. கட்டி மூலக்கூறு நோயறிதல் பரந்த பயன்பாட்டு வாய்ப்புகளைக் கொண்டுள்ளது. உள்நாட்டு அறிஞர்கள் பெருங்குடல் புற்றுநோயில் KRAS பிறழ்வுகளை மருத்துவ ரீதியாகக் கண்டறிய பைரோசென்சிங் தொழில்நுட்பத்தைப் பயன்படுத்தினர், நல்ல துல்லியம் மற்றும் நம்பகத்தன்மையுடன். இந்த முறை சிறந்த விவரக்குறிப்பு மற்றும் அதிக உணர்திறன் கொண்டது. சன்ட்ஸ்ட்ரோம் மற்றும் பலர். அலெலிக்-குறிப்பிட்ட பி.சி.ஆர் மற்றும் மருத்துவ பயன்பாடுகளில் பைரோசென்சிங் ஆகியவற்றுடன் ஒப்பிடும்போது, பெருங்குடல் புற்றுநோயாளிகளில் கே.ஆர்.ஏ.எஸ் பிறழ்வுகளின் 314 நிகழ்வுகளில், பைரோசென்சிங்கின் தனித்தன்மை அல்லீல்களை விட உயர்ந்தது என்பதைக் கண்டறிந்தது. பி.சி.ஆர், மற்றும் குறைந்த கட்டி உயிரணு உள்ளடக்கம் கொண்ட திசுக்களுக்கு நல்ல உணர்திறன் உள்ளது. கட்டி உயிரணுக்களின் விகிதத்தை 1.25% முதல் 2.5% வரை நீர்த்துப்போகச் செய்யுங்கள். பைரோசென்சிங் இன்னும் பிறழ்வு சமிக்ஞைகளைக் கண்டறிய முடியும். மாதிரியில் உள்ள பிறழ்ந்த அலீல்களின் குறைந்தபட்ச உள்ளடக்கம் சாங்கர் வரிசைமுறையால் கண்டறிய 20% ஐ எட்ட வேண்டியிருக்கும் போது, அது 10% ஐ எட்டும்போது HRM முறையால் கண்டறிய முடியும், மேலும் பைரோசென்சிங்கிற்கு 5% மட்டுமே பிறழ்வுகளைக் கண்டறிய முடியும். அலீல்ஸ். பெருங்குடல் புற்றுநோயால் பாதிக்கப்பட்ட 717 நோயாளிகளில் KRAS பிறழ்வுகளைக் கண்டறிய பைரோசென்சிங்கைப் பயன்படுத்தினோம், மேலும் KRAS பிறழ்வுகளின் அதிர்வெண் 40.9% என்பதைக் கண்டறிந்தோம். கோடான் 12 இன் பிறழ்வு வீதம் 30.1% ஆகவும், கோடான் 13 இன் பிறழ்வு வீதம் 9.8% ஆகவும், கோடான் 61 இன் பிறழ்வு வீதம் 1.0% ஆகவும் இருந்தது. சோதனைக்கு முன் கையேடு மைக்ரோடிசெக்ஷன் மூலம் அதிக கட்டி உள்ளடக்கம் கொண்ட திசுக்களை வளப்படுத்தினோம், இதன் முடிவுகள் மிகவும் நம்பகமானவை. இந்த முறை நல்ல உணர்திறன் மற்றும் தனித்துவத்தைக் கொண்டுள்ளது, மேலும் மருத்துவ நடைமுறையில் உருவாக்குவது எளிது. பைரோசென்சிங்கின் குறைபாடு கண்டறிதலுக்கான அதிக செலவு ஆகும், மேலும் மாதிரிகளை வரிசைப்படுத்துவதற்கு ஒற்றை-தனிமைப்படுத்தப்பட்ட டி.என்.ஏவைத் தயாரிக்கும் செயல்முறை சிக்கலானது. எதிர்காலத்தில், பைரோசென்சிங் என்பது இரட்டை அடுக்கு பி.சி.ஆர் தயாரிப்புகளை நேரடியாகக் கண்டறிவதற்கான தொழில்நுட்பத்தின் வளர்ச்சிக்கு அர்ப்பணிக்கப்படலாம், இது செயல்பாட்டை பெரிதும் எளிதாக்கும். மருத்துவ பரிசோதனையின் விரிவான விளம்பரத்தை அடைய வரிசைப்படுத்துவதற்கான செலவை திறம்பட குறைக்கவும்.
3. ARMS முறை:
இந்த தொழில்நுட்பம் காட்டு-வகை மற்றும் பிறழ்ந்த மரபணுக்களை வேறுபடுத்துவதற்கு ப்ரைமர்களைப் பயன்படுத்துகிறது
ich 1980 களின் முற்பகுதியில் அறிவிக்கப்பட்டது. இந்த முறையின் மிகப்பெரிய நன்மை என்னவென்றால், இது 1.0% வரை உணர்திறன் கொண்டது மற்றும் மாதிரிகளில் பிறழ்ந்த மரபணுக்களை 1.0% வரை குறைவாகக் கண்டறிய முடியும். வடிவமைப்பில், இலக்கு உற்பத்தியின் நீளத்தை மிகப் பெரிய அளவில் சுருக்கலாம், மேலும் துல்லியமான கண்டறிதல் முடிவுகளைப் பெற முடியாது, ஏனெனில் பாரஃபின்-உட்பொதிக்கப்பட்ட திசு மாதிரியிலிருந்து பிரித்தெடுக்கப்பட்ட பெரும்பாலான டி.என்.ஏ துண்டு துண்டாக உள்ளது. இந்த தொழில்நுட்பம் நிகழ்நேர பி.சி.ஆர் தளத்தை ஒருங்கிணைத்து பெருக்கத்தின் போது மூடிய-குழாய் செயல்பாட்டை அடைகிறது. செயல்பாடு எளிதானது மற்றும் தயாரிப்பின் பிந்தைய செயலாக்கம் தேவையில்லை, இது பெருக்கப்பட்ட பொருளின் மாசுபாட்டை மிகப் பெரிய அளவில் தவிர்க்கலாம். தற்போது, தேள் ஆய்வு மற்றும் பெருக்க தொகுதி பிறழ்வு முறையை இணைக்கும் ஸ்கார்பியன்-ஏஆர்எம்எஸ் முறை உலகில் பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது. இரண்டு தொழில்நுட்பங்களின் கலவையானது இரு தரப்பினரின் உணர்திறன் மற்றும் தனித்துவத்தை அதிகரிக்க முடியும். காவ் ஜீ மற்றும் பலர். பெருங்குடல் புற்றுநோயால் பாதிக்கப்பட்ட 167 நோயாளிகளில் KRAS மரபணு மாற்ற நிலையை கண்டறிய இந்த முறையைப் பயன்படுத்தியது, இந்த முறை நம்பகமானதாகவும் துல்லியமாகவும் இருப்பதாகக் கூறுகிறது. வாங் ஹுய் மற்றும் பலர். ஃபார்மால்டிஹைட்-நிலையான மற்றும் பாரஃபின்-உட்பொதிக்கப்பட்ட திசுக்களின் 151 நிகழ்வுகளில் KRAS பிறழ்வுகளைக் கண்டறிய ARMS ஐப் பயன்படுத்தியது. யுனைடெட் ஸ்டேட்ஸில், KRAS இன் மருத்துவ பரிசோதனைக்காக FDA ஆல் அங்கீகரிக்கப்பட்ட கோபாஸ் கிட் (ரோச்) மற்றும் ஐரோப்பிய ஒன்றியம் இன் விட்ரோ டையக்னாஸ்டிக்ஸ் (CE-IVD) சான்றளித்த தெராஸ்கிரீன் RGQ கிட் (கியாஜென்) அனைத்தும் ARMS கொள்கையைப் பயன்படுத்துகின்றன. பொதுவான முறைகளில், ARMS முறை மிகவும் உணர்திறன் வாய்ந்தது மற்றும் செலவு ஒப்பீட்டளவில் நியாயமானதாகும். ஆகையால், உள்நாட்டிலும் வெளிநாட்டிலும் உள்ள KRAS மரபணுக்களின் மருத்துவக் கண்டுபிடிப்பின் பெரும்பகுதி ARMS முறையைப் பயன்படுத்துகிறது, ஆனால் இந்த முறை பி.சி.ஆர் தொழில்நுட்பத்தை அடிப்படையாகக் கொண்டிருப்பதால், அதன் குறைபாடு என்னவென்றால், அறியப்பட்ட தள பிறழ்வுகளை மட்டுமே கண்டறிய முடியும்.
4. நிகழ்நேர ஒளிரும் அளவு பி.சி.ஆர் முறை:
It is a PCR-based detection method to determine the mutation by Ct value. It has the advantages of strong specificity, high sensitivity, accurate quantification, easy operation, and fully closed reaction. Many experimental groups have adopted this method for the detection of KRAS mutations in colorectal cancer. Compared with the direct sequencing method, quantitative PCR occupies a greater advantage in sensitivity. Most scholars comparing the two methods believe that quantitative PCR is more sensitive. Liu Wei et al. Used two methods to make a detailed analysis of the detection results of 280 cases of colorectal cancer KRAS gene mutations, 94 cases of KRAS gene sequencing mutations, the positive rate was 33.57% (94/280), of which, real-time fluorescence quantitative PCR was positive 91 cases had a sensitivity of 96.8% (91/94). Of the 186 gene sequencing wild-type cases, 184 were negative by real-time quantitative PCR, with a specificity of 98.9% (184/186). The coincidence rate between real-time fluorescence quantitative PCR method and direct gene sequencing method was 98.2%. In the two detection methods, the positive and negative coincidence rates of each mutation site were above 90%, and the coincidence rate of four sites reached 100%. The detection results of the two methods were highly consistent, indicating fluorescent quantitative PCR It is a more reliable method for mutation detection. However, PCR-based methods need to design primers and probes based on known mutation types, so all possible mutations cannot be detected, and only specific sites can be detected. If a certain site is not included in the detection range of the kit, even if there is actually a mutation, the kit result is still negative. In addition, although the sensitivity of quantitative PCR is high, whether there are false positives still needs to be verified by DNA sequencing technology, or retrospective and prospective clinical experiments with large sample sizes to confirm the correlation between KRAS mutation status and the efficacy of targeted drugs . Therefore, the high sensitivity of mutation detection should not be pursued blindly, while the specificity and accuracy of detection should be ignored. Under different laboratory conditions, the optimal method for mutation detection in specimens may also be different. For specimens with a higher proportion of mutations, Sanger sequencing method has a higher accuracy in detecting gene mutations, while for specimens with a lower proportion of mutations, Sanger sequencing method False negatives may occur, and the detection method using fluorescent PCR as the technical platform can be characterized by high sensitivity.
5. HRM முறை:
சமீபத்திய ஆண்டுகளில் பொதுவாக பயன்படுத்தப்படும் மரபணு கண்டறிதல் முறைகளில் இதுவும் ஒன்றாகும். மாசுபாட்டைத் தவிர்க்க எளிய, வேகமான, உணர்திறன் மற்றும் ஒற்றை குழாயின் நன்மைகள் இதில் உள்ளன. மருத்துவ பரிசோதனையில் அதன் பயன்பாட்டின் சாத்தியத்தை ஆராய்வதற்காக, லியு லிக்கின் மற்றும் பிறர் பெருங்குடல் புற்றுநோயால் பாதிக்கப்பட்ட 64 நோயாளிகளில் KRAS மரபணு பிறழ்வுகளைக் கண்டறிய HRM முறையைப் பயன்படுத்தினர், பின்னர் முடிவுகளை சரிபார்க்க நேரடி வரிசைமுறையைப் பயன்படுத்தினர். HRM மற்றும் நேரடி வரிசைப்படுத்துதலின் முடிவுகள் சீரானதாகக் காணப்படுகின்றன. நேரடி வரிசைமுறையுடன் ஒப்பிடுகையில், HRM ஆல் KRAS மரபணு பிறழ்வுகளைக் கண்டறிவது எளிமையானது மற்றும் துல்லியமானது, இது மருத்துவ பரிசோதனைக்கு ஏற்ற நம்பகமான முறையாகும் என்று கூறுகிறது. சென் ஜிஹோங் மற்றும் பலர். அவற்றின் உணர்திறனை மதிப்பிடுவதற்கு KRAS பிறழ்ந்த பிளாஸ்மிட்களின் வெவ்வேறு விகிதாச்சாரங்களைக் கொண்ட தொடர்ச்சியான கலப்பு மாதிரிகள் சோதிக்க HRM முறையைப் பயன்படுத்தியது. கலப்பு மாதிரிகளில் பிளாஸ்மிட் பிறழ்வுகளின் விகிதம் 10% என்றும், உணர்திறன் 10% ஐ எட்டியது என்றும் கண்டறியப்பட்டது. பின்னர், 60 பெருங்குடல் புற்றுநோய் திசு மாதிரிகளில் KRAS மரபணு பிறழ்வுகளைக் கண்டறிய இந்த முறை பயன்படுத்தப்பட்டது. நேரடி வரிசைமுறை முறையுடன் ஒப்பிடும்போது, HRM முறையின் உணர்திறன் 100%, மற்றும் தனித்தன்மை 96% (43/45) ஆகும். HRM முறையின் தீமை என்னவென்றால், குறிப்பிட்ட பிறழ்வு வகையை துல்லியமாக வழங்குவது சாத்தியமில்லை, எந்த கோடான் பிறழ்ந்தது. உருகும் வளைவில் ஒரு அசாதாரண தன்மை காணப்பட்டால், பிறழ்வு வகையைத் தீர்மானிக்க வரிசைமுறை முறை தேவைப்படுகிறது. ஃப்ளோரசன்ட் பி.சி.ஆர், ஏ.ஆர்.எம்.எஸ் மற்றும் எச்.ஆர்.எம் முறைகளை ஒப்பிட்டுப் பார்க்க ஹார்லே ஆராய்ச்சி குழு 156 பெருங்குடல் புற்றுநோய் திசுக்களைப் பயன்படுத்தியது. மூன்று முறைகள் மருத்துவ பரிசோதனைக்கு பொருத்தமானவை என்றாலும், HRM இன் நம்பகத்தன்மை மற்ற இரண்டு முறைகளைப் போல நல்லதல்ல என்று முடிவுகள் தெரிவிக்கின்றன.
6. பிற முறைகள்:
மேலே குறிப்பிட்டுள்ள முறைகளுக்கு மேலதிகமாக, பிற கண்டறிதல் முறைகள் அவற்றின் சொந்த நன்மைகள் மற்றும் தீமைகள் உள்ளன, அதாவது பி.சி.ஆர்-எஸ்.எஸ்.சி.பி, உயர் செயல்திறன் திரவ குரோமடோகிராபி, ஃப்ளோரசன்ட் பி.சி.ஆர்-உகந்த ஒலிகோநியூக்ளியோடைடு ஆய்வு முறை, உள்ளமை பி.சி.ஆர் மற்றும் ஏ.ஆர்.எம்.எஸ் கலவையின் முறை, கோல்ட்-பி.சி.ஆர் முறை, முதலியன உயர் செயல்திறன் திரவ நிறமூர்த்தம் வலுவான தனித்துவத்தைக் கொண்டுள்ளது, ஆனால் மாதிரிகளுக்கான தேவை பெரியது; பி.சி.ஆர்-எஸ்.எஸ்.சி.பி செலவு குறைவாகவும் சிக்கனமாகவும் உள்ளது, ஆனால் செயல்பாடு சிக்கலானது; ஃப்ளோரசன்ட் பி.சி.ஆரை அடிப்படையாகக் கொண்ட பிறழ்வு கண்டறிதல் தொழில்நுட்பம் வலுவான விவரக்குறிப்பு, அதிக உணர்திறன் மற்றும் துல்லியமான அளவு, எளிதான செயல்பாடு, முழுமையாகத் தடுக்கப்பட்ட எதிர்வினை மற்றும் பிற நன்மைகளைக் கொண்டுள்ளது, ஆனால் அனைவருக்கும் தெரிந்த பிறழ்வு வகைக்கு ஏற்ப ப்ரைமர்கள் மற்றும் ஆய்வுகளை வடிவமைக்க வேண்டும், எனவே குறிப்பிட்ட தளங்கள் மட்டுமே இருக்க முடியும் கண்டறியப்பட்டது, மேலும் சாத்தியமான அனைத்து பிறழ்வுகளையும் கண்டறிய முடியாது.
3. சுருக்கம்
சுருக்கமாக, வெவ்வேறு ஆய்வகங்களில் பிறழ்வு தளங்கள் மற்றும் கண்டறிதல் முறைகள் ஒரே மாதிரியாக இல்லாததால், பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்ட கட்டி மாதிரிகளின் அளவு மற்றும் டி.என்.ஏ பிரித்தெடுக்கும் தரம் ஆகியவை சீரற்றவை, இதன் விளைவாக ஆய்வகங்களுக்கு இடையில் பெரிய அல்லது சிறிய சோதனை முடிவுகள் உள்ளன வேறுபாடுகள், தரப்படுத்தல் KRAS மரபணு மாற்றத்தைக் கண்டறிதல் என்பது பல்வேறு நாடுகளில் மருத்துவக் கண்டறிதல் பிரச்சினையாக மாறியுள்ளது. தற்போது, KRAS மரபணுவில் பிறழ்வுகளைக் கண்டறிய பல முறைகள் உள்ளன. ஏ.ஆர்.எம்.எஸ், பைரோசென்சிங், எச்.ஆர்.எம், நிகழ்நேர அளவு பி.சி.ஆர் மற்றும் நேரடி வரிசைமுறை ஆகியவை உயர் முதல் குறைந்த வரையிலான உணர்திறன் ஆகும். மருத்துவ யதார்த்தத்திலிருந்து, குறைந்த உணர்திறன் மருத்துவ சிகிச்சைக்கு உகந்ததல்ல, ஆனால் மிகவும் உணர்திறன் வாய்ந்த முறைகள் கண்டறிதல் விவரக்குறிப்பு குறைய வழிவகுக்கும், மேலும் தேவையற்ற தவறான நேர்மறையான முடிவுகள் ஏற்படக்கூடும் மற்றும் நோயாளியின் அடுத்தடுத்த மருந்து முறையை பாதிக்கலாம். மேலே உள்ள அம்சங்களைக் கருத்தில் கொண்டு, FDA ஆல் அங்கீகரிக்கப்பட்ட முறையுடன் இணைந்து, ARMS முறை பரிந்துரைக்கப்படுகிறது. நிச்சயமாக, சந்தைக் கண்ணோட்டத்தில், மூலக்கூறு கண்டறிதல் என்னை வலியுறுத்தக்கூடாது
முறைகள், ஆனால் இறுதி சரியான முடிவுகளில் கவனம் செலுத்துங்கள். வெவ்வேறு ஆய்வகங்கள் உண்மையான சூழ்நிலைக்கு ஏற்ப பொருத்தமான சோதனை முறைகளைப் பின்பற்றலாம், ஆனால் அவை நல்ல ஆபரேட்டர் தகுதிகள் மற்றும் உள் தரக் கட்டுப்பாட்டு அமைப்புகள் இருந்தால் மட்டுமே. தற்போதைய உள்நாட்டு ஆய்வக சுற்றுச்சூழல் நிலைமைகளின் கீழ், தரப்படுத்தப்பட்ட PCR ஆய்வகத்தில் சோதனைகளை மேற்கொள்வது மற்றும் நம்பகமான ஆய்வக சோதனை தரத்தை உறுதிப்படுத்த உள்நாட்டு மற்றும் சர்வதேச அறைகளுக்கிடையேயான தரக் கட்டுப்பாட்டு நடவடிக்கைகளில் பங்கேற்பது அவசியம். நிலையான முடிவுகளை உறுதிப்படுத்த தரப்படுத்தப்பட்ட மேலாண்மை ஒரு அவசியமான நிபந்தனையாகும். சீனாவில், KRAS மரபணுவின் மருத்துவப் பரிசோதனையை ஒருங்கிணைத்து தரப்படுத்த வேண்டிய அவசரத் தேவை உள்ளது, மேலும் பல்வேறு தேவைகளுக்கு ஏற்ப ஒரு தரப்படுத்தப்பட்ட மற்றும் தரப்படுத்தப்பட்ட சோதனைத் திட்டத்தை உருவாக்க வேண்டும், மேலும் இந்தத் திட்டத்தை BRAF, PIK23450_3CA, EGFR மற்றும் கண்டறியும் வரை நீட்டிக்க முடியும். மருத்துவ மூலக்கூறு நோயியல் சோதனையை ஊக்குவிக்க மற்ற மரபணுக்கள்.
