ಕೊಲೊರೆಕ್ಟಲ್ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ಗಾಗಿ ಕೆಆರ್ಎಎಸ್ ಜೀನ್ ರೂಪಾಂತರ ವಿಧಾನದ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್ ಮತ್ತು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ

ಕೋಲೋರೆಕ್ಟಲ್ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್‌ಗೆ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಚಿಕಿತ್ಸಕ ಔಷಧಿಗಳಾಗಿ ಸೆಟುಕ್ಸಿಮಾಬ್ ಮತ್ತು ಪ್ಯಾನಿಟುಮುಮಾಬ್‌ನಂತಹ ಗುರಿಪಡಿಸುವ ಔಷಧಗಳನ್ನು ಕ್ಲಿನಿಕ್‌ನಲ್ಲಿ ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. KRAS ರೂಪಾಂತರಗಳೊಂದಿಗಿನ ರೋಗಿಗಳು ಈ ಮೊನೊಕ್ಲೋನಲ್ ಪ್ರತಿಕಾಯ ಔಷಧದ ಮೇಲೆ ಯಾವುದೇ ಮಹತ್ವದ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವುದಿಲ್ಲ ಎಂದು ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಡೇಟಾ ತೋರಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಕಾಡು-ಮಾದರಿಯ ರೋಗಿಗಳು ಮಾತ್ರ ಅದರಿಂದ ಪ್ರಯೋಜನ ಪಡೆಯಬಹುದು. ಆದ್ದರಿಂದ, KRAS ಜೀನ್ ರೂಪಾಂತರ ಸ್ಥಿತಿಯನ್ನು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕವಾಗಿ ಪ್ರಮುಖ ಚಿಕಿತ್ಸಕ ಮಾರ್ಕರ್ ಎಂದು ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಕೊಲೊರೆಕ್ಟಲ್ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ನ ಮುನ್ನರಿವು ಮತ್ತು ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ಪರಿಣಾಮದೊಂದಿಗೆ ಬಲವಾದ ಸಂಬಂಧವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ. 2009 ರ ರಾಷ್ಟ್ರೀಯ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಸಮಗ್ರ ನೆಟ್‌ವರ್ಕ್ (NCCN) ಕೊಲೊರೆಕ್ಟಲ್ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಪ್ರಾಕ್ಟೀಸ್ ಗೈಡ್‌ಲೈನ್ಸ್ ಮೆಟಾಸ್ಟಾಟಿಕ್ ಕೊಲೊರೆಕ್ಟಲ್ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಹೊಂದಿರುವ ಎಲ್ಲಾ ರೋಗಿಗಳು KRAS ಜೀನ್ ರೂಪಾಂತರ ಸ್ಥಿತಿಯನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಬೇಕು ಮತ್ತು EGFR ಉದ್ದೇಶಿತ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯನ್ನು ಪಡೆಯಲು KRAS ವೈಲ್ಡ್ ಪ್ರಕಾರವನ್ನು ಮಾತ್ರ ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ. ಅದೇ ವರ್ಷದಲ್ಲಿ, ಅಮೇರಿಕನ್ ಸೊಸೈಟಿ ಆಫ್ ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಆಂಕೊಲಾಜಿ (ASCO) ಟ್ಯೂಮರ್ ಉದ್ದೇಶಿತ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗಾಗಿ ಆಣ್ವಿಕ ಮಾರ್ಕರ್‌ನಂತೆ ಅದೇ ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಚಿಕಿತ್ಸಾ ಶಿಫಾರಸುಗಳನ್ನು ನೀಡಿತು, ಇದು ಅದರ ಪ್ರಮುಖ ಮಾರ್ಗದರ್ಶಿ ಮಹತ್ವವನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. ಪ್ರಸ್ತುತ, KRAS ಆನುವಂಶಿಕ ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕವಾಗಿ ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ನಡೆಸಲಾಗಿದೆ. ವೈದ್ಯಕೀಯ ಆಯ್ಕೆಯಲ್ಲಿ ಉಲ್ಲೇಖಕ್ಕಾಗಿ ದೇಶೀಯ KRAS ಜೀನ್ ರೂಪಾಂತರ ಪತ್ತೆ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ನಾವು ಮುಖ್ಯವಾಗಿ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡುತ್ತೇವೆ.

1. ಕೊಲೊರೆಕ್ಟಲ್ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ನಲ್ಲಿ ಕೆಆರ್ಎಎಸ್ ಜೀನ್ ರೂಪಾಂತರದ ಸಕಾರಾತ್ಮಕ ದರ

ಕೊಲೊರೆಕ್ಟಲ್ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ನಲ್ಲಿ, ಕೆಆರ್ಎಎಸ್ ಜೀನ್‌ನ ರೂಪಾಂತರದ ಪ್ರಮಾಣವು 35% ರಿಂದ 45% ರಷ್ಟಿದೆ, ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ಅಪಾಯದ ರೂಪಾಂತರದ ತಾಣವು ಎಕ್ಸಾನ್ 12 ರಂದು 13 ಮತ್ತು 2 ಕೋಡಾನ್‌ಗಳಾಗಿವೆ, ಮತ್ತು ಇನ್ನೂ 61 ಮತ್ತು 146 ನಂತಹ ಅಪರೂಪದವುಗಳಿವೆ. ಸೈಟ್. ನೇರ ಅನುಕ್ರಮ, ಹೆಚ್ಚಿನ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಕರಗುವ ಕರ್ವ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ (ಎಚ್‌ಆರ್‌ಎಂ), ಪೈರೋಕ್ಸೆನ್ಸಿಂಗ್, ಕ್ವಾಂಟಿಟೇಟಿವ್ ಪಿಸಿಆರ್, ಮ್ಯುಟೇಶನ್ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಷನ್ ಬ್ಲಾಕ್ ಸಿಸ್ಟಮ್ (ಆಂಪ್ಲಿಂಕ್ ಆಟಿಯೊ) ನ್ರೆಫ್ರ್ಯಾಕ್ಟರಿಮ್ಯುಟೇಶನ್ ಸಿಸ್ಟಮ್ (ಎಆರ್ಎಂಎಸ್), ನಿರ್ಬಂಧದ ತುಣುಕು ಉದ್ದದ ಬಹುರೂಪತೆ (ಆರ್‌ಎಫ್‌ಎಲ್‌ಪಿ), ಸೇರಿದಂತೆ ಕೆಆರ್‌ಎಎಸ್ ಜೀನ್ ರೂಪಾಂತರಗಳಿಗೆ ಅನೇಕ ಪತ್ತೆ ವಿಧಾನಗಳಿವೆ. ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಚೈನ್ ರಿಯಾಕ್ಷನ್-ಸಿಂಗಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಕನ್ಫಾರ್ಮೇಶನ್ ಪಾಲಿಮಾರ್ಫಿಸ್ ಅನಾಲಿಸಿಸ್ (ಪಿಸಿಆರ್-ಸಿಂಗಲ್‌ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಕನ್ಫೊಮೇಶನ್ ಪಾಲಿಮಾರ್ಫಿಸ್ಮ್ (ಪಿಸಿಆರ್-ಎಸ್‌ಎಸ್‌ಸಿಪಿ), ಕಡಿಮೆ ಡಿನಾಟರೇಶನ್ ಟೆಂಪರಟೂರ್ ಪಿಸಿಆರ್ (ಕೋಲ್ಡ್-ಪಿಸಿಆರ್) ನಲ್ಲಿ ಸಹ-ವರ್ಧನೆ ಮತ್ತು ಉನ್ನತ-ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆಯ ದ್ರವ ವರ್ಣರೇಖನ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ ಇತ್ಯಾದಿ.

2. ಕೆಆರ್ಎಎಸ್ ರೂಪಾಂತರ ಪತ್ತೆ ವಿಧಾನಗಳ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ

1. ನೇರ ಅನುಕ್ರಮ ವಿಧಾನ: ಇದು ಕೆಆರ್ಎಎಸ್ ಜೀನ್ ರೂಪಾಂತರಗಳನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಅತ್ಯಂತ ಶ್ರೇಷ್ಠ ವಿಧಾನವಾಗಿದೆ, ಮತ್ತು ಇದು ಜೀನ್ ರೂಪಾಂತರಗಳನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಚಿನ್ನದ ಮಾನದಂಡವಾಗಿದೆ. ಡೈಡಿಯೊಕ್ಸಿ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್ ತತ್ವವನ್ನು ಆಧರಿಸಿದ ನೇರ ಅನುಕ್ರಮ ವಿಧಾನವು ಜೀನ್ ಅನುಕ್ರಮದ ಬದಲಾವಣೆಯನ್ನು ಬೇಸ್ ಪೀಕ್ ನಕ್ಷೆಯ ರೂಪದಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚು ಅಂತರ್ಬೋಧೆಯಿಂದ ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. ಪತ್ತೆ ಪ್ರಕಾರವು ಹೆಚ್ಚು ವಿಸ್ತಾರವಾಗಿದೆ, ಮತ್ತು ಇದು ಆರಂಭಿಕ ಅನ್ವಯಿಕ ರೂಪಾಂತರ ಪತ್ತೆ ವಿಧಾನವಾಗಿದೆ. ಹೊಸ ತಲೆಮಾರಿನ ಅನುಕ್ರಮ ವೇದಿಕೆಗಳ ಹೊರಹೊಮ್ಮುವಿಕೆಯ ಹೊರತಾಗಿಯೂ, ದೇಶ ಮತ್ತು ವಿದೇಶಗಳಲ್ಲಿನ ವಿದ್ವಾಂಸರು ಹೊಸ ವಿಧಾನದ ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹತೆಯನ್ನು ಅಳೆಯಲು ಮತ್ತು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ನೇರ ಅನುಕ್ರಮದ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಒಂದು ಮಾಪಕವಾಗಿ ಬಳಸುತ್ತಾರೆ. ಗಾವೊ ಜಿಂಗ್ ಮತ್ತು ಇತರರು. ಕೊಲೊರೆಕ್ಟಲ್ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಹೊಂದಿರುವ 966 ರೋಗಿಗಳಲ್ಲಿ ಕೆಆರ್ಎಎಸ್ ಮತ್ತು ಬಿಆರ್ಎಎಫ್ ಜೀನ್ ರೂಪಾಂತರಗಳನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ನೇರ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಅನ್ವಯಿಸಲಾಗಿದೆ. ಇದು ಸಾಹಿತ್ಯದಲ್ಲಿ ವರದಿಯಾದ ಅತಿದೊಡ್ಡ ದೇಶೀಯ ಮಾದರಿಯೊಂದಿಗೆ KRAS ಜೀನ್ ರೂಪಾಂತರದ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಾಗಿದೆ. ಪ್ರತಿ ಜೀನ್‌ನ ರೂಪಾಂತರದ ಸ್ಥಿತಿಯನ್ನು ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು ನೇರ ಅನುಕ್ರಮ ವಿಧಾನವು ಅತ್ಯಂತ ನೇರ ಮತ್ತು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಪತ್ತೆ ವಿಧಾನವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಲಿಂಗ್ ಯುನ್ ಮತ್ತು ಇತರರು ನಂಬುತ್ತಾರೆ, ಇದು ರೂಪಾಂತರದ ಪ್ರಕಾರವನ್ನು ಸ್ಪಷ್ಟಪಡಿಸುತ್ತದೆ, ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಅಪರಿಚಿತ ರೂಪಾಂತರಗಳ ಪತ್ತೆಗಾಗಿ. ಈ ವಿಧಾನದ ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯು ತುಲನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಇದ್ದರೂ, ಗೆಡ್ಡೆಯ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಉತ್ಕೃಷ್ಟಗೊಳಿಸಲು ಮೈಕ್ರೊಡಿಸೆಕ್ಷನ್ ನಂತಹ ವಿಧಾನಗಳಿಂದ ಇದನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಬಹುದು. ಇತರ ದೇಶೀಯ ಸಂಶೋಧನಾ ಗುಂಪುಗಳಲ್ಲಿ ದೊಡ್ಡ ಮಾದರಿ ಗಾತ್ರಗಳ KRAS ಪತ್ತೆಗೆ ನೇರ ಅನುಕ್ರಮ ವಿಧಾನವನ್ನು ಸಹ ಅನ್ವಯಿಸಲಾಗಿದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಕಡಿಮೆ ಸಂವೇದನೆಯು ನೇರ ಅನುಕ್ರಮದ ದೊಡ್ಡ ಅನಾನುಕೂಲವಾಗಿದೆ. ಚೀನಾದಲ್ಲಿ ವರದಿಯಾದ ಫಲಿತಾಂಶಗಳಿಂದ ನಿರ್ಣಯಿಸಿದರೆ, ನೇರ ಅನುಕ್ರಮದ ಮೂಲಕ ರೂಪಾಂತರ ಪತ್ತೆ ಪ್ರಮಾಣವು ಕಡಿಮೆಯಾಗಿಲ್ಲ. ಲಿಯು ಕ್ಸಿಯೋಜಿಂಗ್ ಮತ್ತು ಇತರರು. ನೇರ ಅನುಕ್ರಮ ಮತ್ತು ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ಕ್ಲ್ಯಾಂಪ್ ಪಿಸಿಆರ್ (ಪಿಎನ್ಎ-ಪಿಸಿಆರ್) ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಮತ್ತು ಕೆಆರ್ಎಎಸ್ ಜೀನ್ ರೂಪಾಂತರದ 43 ಪ್ರಕರಣಗಳನ್ನು ನೇರ ಅನುಕ್ರಮದಿಂದ ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲಾಗಿದೆ ಎಂದು ಕಂಡುಹಿಡಿದಿದೆ. ಈ ರೂಪಾಂತರಗಳ ಜೊತೆಗೆ, ಪಿಎನ್‌ಎ-ಪಿಸಿಆರ್ ಅನ್ನು ನೇರ ಅನುಕ್ರಮದಿಂದ ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲಾಯಿತು. ಕಾಡು ಪ್ರಕಾರದಲ್ಲಿ ಹತ್ತು ರೂಪಾಂತರಗಳು ಕಂಡುಬಂದವು, ಮತ್ತು ಕಾಡು ಪ್ರಕಾರದ ರೋಗಿಗಳನ್ನು ಪಿಸಿಆರ್ ಮತ್ತು ರೂಪಾಂತರಿತ ರೋಗಿಗಳನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ನೇರ ಅನುಕ್ರಮ ವಿಧಾನದಿಂದ ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಸಲಹೆಗಳನ್ನು ನೀಡಲಾಯಿತು. ಕಿಯು ಟಿಯಾನ್ ಮತ್ತು ಇತರರು. ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಪಿಸಿಆರ್-ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ಡ್ ಆಲಿಗೊನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್ ಪ್ರೋಬ್ ವಿಧಾನ ಮತ್ತು ನೇರ ಅನುಕ್ರಮ ವಿಧಾನದಿಂದ 131 ಕೊಲೊರೆಕ್ಟಲ್ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಪತ್ತೆ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ, ಮತ್ತು ಕೆಆರ್ಎಎಸ್ ಜೀನ್ ರೂಪಾಂತರಗಳ ಸಕಾರಾತ್ಮಕ ದರಗಳು 41.2% (54/131) ಮತ್ತು 40.5% (53/131). ಬಾಯಿ ಡೊಂಗ್ಯು ವಿವಿಧ ವಿಧಾನಗಳ ಪತ್ತೆ ಸಂವೇದನೆಯ ಬಗ್ಗೆಯೂ ಚರ್ಚಿಸಿದರು. 200 ಕೊಲೊರೆಕ್ಟಲ್ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ರೋಗಿಗಳಲ್ಲಿ, 63 ಜನರನ್ನು ಆರ್ಟಿ-ಕ್ಯೂಪಿಸಿಆರ್ ರೂಪಾಂತರಗಳಿಂದ ಪತ್ತೆ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ, ಮತ್ತು ರೂಪಾಂತರ ಪತ್ತೆ ಪ್ರಮಾಣ 31.5%; ರೂಪಾಂತರದ 169 ಪ್ರಕರಣಗಳು, ರೂಪಾಂತರ ಪತ್ತೆ ಪ್ರಮಾಣ 50% ನೇರ ಅನುಕ್ರಮದಿಂದ 29.6 ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಯಶಸ್ವಿಯಾಗಿ ಅನುಕ್ರಮಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ. ನೇರ ಅನುಕ್ರಮ ವಿಧಾನವು ಕೆಆರ್ಎಎಸ್ ಜೀನ್ ರೂಪಾಂತರದ ಸ್ಥಿತಿಯನ್ನು ನಿಖರವಾಗಿ, ವಸ್ತುನಿಷ್ಠವಾಗಿ ಮತ್ತು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಬಹುದಾದರೂ, ಅದರ ನ್ಯೂನತೆಗಳಾದ ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಂತ್ರಿಕ ಅವಶ್ಯಕತೆಗಳು, ಸಂಕೀರ್ಣ ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳು, ಅಡ್ಡ-ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುವುದು ಸುಲಭ, ಮತ್ತು ಫಲಿತಾಂಶಗಳ ಸಮಯ ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುವ ಮತ್ತು ಪ್ರಯಾಸಕರವಾದ ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಗಳು ಸಹ ಬಹಳ ಸ್ಪಷ್ಟ. ಆಗಾಗ್ಗೆ ಯಾವುದೇ ಅನುಕ್ರಮ ಸಾಧನಗಳಿಲ್ಲ, ಮತ್ತು ಮಾದರಿಯನ್ನು ಪರೀಕ್ಷೆಗೆ ಅನುಗುಣವಾದ ಕಂಪನಿಗೆ ಕಳುಹಿಸಬೇಕಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಬಹಳ ಸಮಯ ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ವೆಚ್ಚವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಇದು ಹೆಚ್ಚಿನ ಮಿತಿಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.

ಪೈರೋಕ್ಸೆನ್ಸಿಂಗ್ ವಿಧಾನ:

ಅನುಕ್ರಮ ಸಂವೇದನೆ, ಪತ್ತೆ ವೆಚ್ಚ ಮತ್ತು ವರದಿ ಮಾಡುವ ಸಮಯದ ವಿಷಯದಲ್ಲಿ ಕೆಆರ್ಎಎಸ್ ಜೀನ್ ರೂಪಾಂತರ ಪತ್ತೆಗಾಗಿ ಪೈರೋಕ್ಸೆನ್ಸಿಂಗ್ ವಿಧಾನವು ಹೆಚ್ಚು ಅನುಕೂಲಕರ ವಿಧಾನವಾಗಿದೆ. ಈ ವಿಧಾನದ ಪುನರಾವರ್ತನೀಯತೆ ಉತ್ತಮವಾಗಿದೆ. ಪಡೆದ ಗರಿಷ್ಠ ನಕ್ಷೆಯ ಪ್ರಕಾರ, ಒಂದು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಸೈಟ್‌ನ ರೂಪಾಂತರದ ಆವರ್ತನದ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ ಅಧ್ಯಯನ ಮತ್ತು ವಿಭಿನ್ನ ಸೈಟ್‌ಗಳ ರೂಪಾಂತರ ಆವರ್ತನಗಳ ನಡುವಿನ ಹೋಲಿಕೆ ಒಂದು ನೋಟದಲ್ಲಿ ಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿರುತ್ತದೆ. ಇತ್ತೀಚಿನ ವರ್ಷಗಳಲ್ಲಿ, ಒಗಿನೋ ಮತ್ತು ಇತರರು, ಹಚಿನ್ಸ್ ಮತ್ತು ಇತರರು. ಕೊಲೊರೆಕ್ಟಲ್ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ನ ದೊಡ್ಡ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ರೋಗಿಗಳಲ್ಲಿ ಕೆಆರ್ಎಎಸ್ ರೂಪಾಂತರಗಳನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲು ಪೈರೋಕ್ಸೆನ್ಸಿಂಗ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವನ್ನು ಬಳಸಿದ್ದೀರಿ. ಉದ್ದೇಶಿತ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗಾಗಿ ರೋಗಿಗಳನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲು ಪೈರೋಕ್ಸೆನ್ಸಿಂಗ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವು ಪ್ರಬಲ ಸಾಧನವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ. ಗೆಡ್ಡೆಯ ಆಣ್ವಿಕ ರೋಗನಿರ್ಣಯವು ವಿಶಾಲವಾದ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್ ನಿರೀಕ್ಷೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ. ದೇಶೀಯ ವಿದ್ವಾಂಸರು ಕೊಲೊರೆಕ್ಟಲ್ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ನಲ್ಲಿ ಕೆಆರ್ಎಎಸ್ ರೂಪಾಂತರಗಳನ್ನು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕವಾಗಿ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಪೈರೋಕ್ಸೆನ್ಸಿಂಗ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವನ್ನು ಬಳಸಿದ್ದಾರೆ, ಉತ್ತಮ ನಿಖರತೆ ಮತ್ತು ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹತೆಯೊಂದಿಗೆ. ಈ ವಿಧಾನವು ಉತ್ತಮ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ. ಸುಂಡ್ಸ್ಟ್ರಾಮ್ ಮತ್ತು ಇತರರು. ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಅಲ್ಲೆಲಿಕ್-ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪಿಸಿಆರ್ ಮತ್ತು ಪೈರೋಕ್ಸೆನ್ಸಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಮತ್ತು ಕೊಲೊರೆಕ್ಟಲ್ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ರೋಗಿಗಳಲ್ಲಿ ಕೆಆರ್ಎಎಸ್ ರೂಪಾಂತರದ 314 ಪ್ರಕರಣಗಳಲ್ಲಿ, ಪೈರೋಕ್ಸೆನ್ಸಿಂಗ್‌ನ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯು ಆಲೀಲ್‌ಗಳಿಗಿಂತ ಉತ್ತಮವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಕಂಡುಹಿಡಿದಿದೆ. ಪಿಸಿಆರ್, ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆ ಗೆಡ್ಡೆಯ ಕೋಶದ ಅಂಶ ಹೊಂದಿರುವ ಅಂಗಾಂಶಗಳಿಗೆ ಉತ್ತಮ ಸಂವೇದನೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ. ಗೆಡ್ಡೆಯ ಕೋಶಗಳ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು 1.25% ರಿಂದ 2.5% ಗೆ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಿ. ಪೈರೋಕ್ಸೆನ್ಸಿಂಗ್ ಇನ್ನೂ ರೂಪಾಂತರ ಸಂಕೇತಗಳನ್ನು ಪತ್ತೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಸ್ಯಾಂಗರ್ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್‌ನಿಂದ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಸ್ಯಾಂಪಲ್‌ನಲ್ಲಿನ ರೂಪಾಂತರಿತ ಆಲೀಲ್‌ಗಳ ಕನಿಷ್ಠ ವಿಷಯವು 20% ತಲುಪಬೇಕಾದಾಗ, ಅದು 10% ತಲುಪಿದಾಗ ಅದನ್ನು ಎಚ್‌ಆರ್‌ಎಂ ವಿಧಾನದಿಂದ ಕಂಡುಹಿಡಿಯಬಹುದು, ಮತ್ತು ಪೈರೋಕ್ಸೆನ್ಸಿಂಗ್‌ಗಾಗಿ ಕೇವಲ ರೂಪಾಂತರಗಳನ್ನು 5% ರಷ್ಟು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಬಹುದು. ಅಲ್ಲೆಲ್ಸ್. ಕೊಲೊರೆಕ್ಟಲ್ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಹೊಂದಿರುವ 717 ರೋಗಿಗಳಲ್ಲಿ ಕೆಆರ್ಎಎಸ್ ರೂಪಾಂತರಗಳನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲು ನಾವು ಪೈರೋಕ್ಸೆನ್ಸಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು ಕೆಆರ್ಎಎಸ್ ರೂಪಾಂತರಗಳ ಆವರ್ತನ 40.9% ಎಂದು ನಾವು ಕಂಡುಕೊಂಡಿದ್ದೇವೆ. ಕೋಡಾನ್ 12 ರ ರೂಪಾಂತರ ದರವು 30.1%, ಕೋಡಾನ್ 13 ರ ರೂಪಾಂತರದ ಪ್ರಮಾಣ 9.8%, ಮತ್ತು ಕೋಡಾನ್ 61 ರ ರೂಪಾಂತರದ ಪ್ರಮಾಣ 1.0% ಆಗಿತ್ತು. ಪರೀಕ್ಷಿಸುವ ಮೊದಲು ಹಸ್ತಚಾಲಿತ ಮೈಕ್ರೊಡಿಸೆಕ್ಷನ್ ಮೂಲಕ ಹೆಚ್ಚಿನ ಗೆಡ್ಡೆಯ ಅಂಶವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಅಂಗಾಂಶಗಳನ್ನು ನಾವು ಶ್ರೀಮಂತಗೊಳಿಸಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಹೆಚ್ಚು ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹವಾಗಿಸುತ್ತೇವೆ. ಈ ವಿಧಾನವು ಉತ್ತಮ ಸಂವೇದನೆ ಮತ್ತು ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಮತ್ತು ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಅಭ್ಯಾಸದಲ್ಲಿ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸುವುದು ಸುಲಭ. ಪೈರೋಕ್ಸೆನ್ಸಿಂಗ್‌ನ ಅನಾನುಕೂಲವೆಂದರೆ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವಿಕೆಯ ಹೆಚ್ಚಿನ ವೆಚ್ಚ, ಮತ್ತು ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಅನುಕ್ರಮಗೊಳಿಸಲು ಏಕ-ಎಳೆಯ ಡಿಎನ್‌ಎ ತಯಾರಿಸುವ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯು ತೊಡಕಾಗಿದೆ. ಭವಿಷ್ಯದಲ್ಲಿ, ಪೈರೋಕ್ಸೆನ್ಸಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಡಬಲ್ ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ನೇರವಾಗಿ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ತಂತ್ರಜ್ಞಾನದ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಗೆ ಮೀಸಲಿಡಬಹುದು, ಇದು ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚು ಸರಳಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ. ಮತ್ತು ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಪರೀಕ್ಷೆಯ ಸಮಗ್ರ ಪ್ರಚಾರವನ್ನು ಸಾಧಿಸಲು ಅನುಕ್ರಮ ವೆಚ್ಚವನ್ನು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿ.

3. ARMS ವಿಧಾನ:

ಈ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವು ಕಾಡು-ಪ್ರಕಾರ ಮತ್ತು ರೂಪಾಂತರಿತ ಜೀನ್‌ಗಳ ನಡುವೆ ವ್ಯತ್ಯಾಸವನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲು ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ
ich 1980 ರ ದಶಕದ ಹಿಂದೆಯೇ ವರದಿಯಾಗಿದೆ. ಈ ವಿಧಾನದ ಅತಿದೊಡ್ಡ ಪ್ರಯೋಜನವೆಂದರೆ ಇದು 1.0% ವರೆಗಿನ ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಮತ್ತು ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ರೂಪಾಂತರಿತ ವಂಶವಾಹಿಗಳನ್ನು 1.0% ಕ್ಕಿಂತ ಕಡಿಮೆ ಪತ್ತೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ವಿನ್ಯಾಸದಲ್ಲಿ, ಉದ್ದೇಶಿತ ಉತ್ಪನ್ನದ ಉದ್ದವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿನ ಮಟ್ಟಕ್ಕೆ ಮೊಟಕುಗೊಳಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಪ್ಯಾರಾಫಿನ್-ಎಂಬೆಡೆಡ್ ಅಂಗಾಂಶ ಮಾದರಿಯಿಂದ ಹೊರತೆಗೆಯಲಾದ ಹೆಚ್ಚಿನ ಡಿಎನ್‌ಎ .ಿದ್ರಗೊಂಡಿರುವುದರಿಂದ ನಿಖರವಾದ ಪತ್ತೆ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ. ವರ್ಧನೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಮುಚ್ಚಿದ-ಟ್ಯೂಬ್ ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯನ್ನು ಸಾಧಿಸಲು ಈ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವು ನೈಜ-ಸಮಯದ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ಲಾಟ್‌ಫಾರ್ಮ್ ಅನ್ನು ಸಂಯೋಜಿಸುತ್ತದೆ. ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯು ಸರಳವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಉತ್ಪನ್ನದ ನಂತರದ ಸಂಸ್ಕರಣೆಯ ಅಗತ್ಯವಿರುವುದಿಲ್ಲ, ಇದು ವರ್ಧಿತ ಉತ್ಪನ್ನದ ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರಮಾಣದಲ್ಲಿ ತಪ್ಪಿಸಬಹುದು. ಪ್ರಸ್ತುತ, ಚೇಳಿನ ತನಿಖೆ ಮತ್ತು ವರ್ಧನೆ ಬ್ಲಾಕ್ ರೂಪಾಂತರ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಸಂಯೋಜಿಸುವ ಚೇಳು-ಎಆರ್ಎಂಎಸ್ ವಿಧಾನವನ್ನು ಜಗತ್ತಿನಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಎರಡು ತಂತ್ರಜ್ಞಾನಗಳ ಸಂಯೋಜನೆಯು ಎರಡೂ ಬದಿಗಳ ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆ ಮತ್ತು ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ. ಗಾವೊ ಜೀ ಮತ್ತು ಇತರರು. ಕೊಲೊರೆಕ್ಟಲ್ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಹೊಂದಿರುವ 167 ರೋಗಿಗಳಲ್ಲಿ ಕೆಆರ್ಎಎಸ್ ಜೀನ್ ರೂಪಾಂತರದ ಸ್ಥಿತಿಯನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲು ಈ ವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸಲಾಗಿದೆ, ಈ ವಿಧಾನವು ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹ ಮತ್ತು ನಿಖರವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ವಾಂಗ್ ಹುಯಿ ಮತ್ತು ಇತರರು. ಫಾರ್ಮಾಲ್ಡಿಹೈಡ್-ಸ್ಥಿರ ಮತ್ತು ಪ್ಯಾರಾಫಿನ್-ಎಂಬೆಡೆಡ್ ಅಂಗಾಂಶಗಳ 151 ಪ್ರಕರಣಗಳಲ್ಲಿ ಕೆಆರ್ಎಎಸ್ ರೂಪಾಂತರಗಳನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲು ARMS ಅನ್ನು ಸಹ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಯುನೈಟೆಡ್ ಸ್ಟೇಟ್ಸ್ನಲ್ಲಿ, ಕೆಆರ್ಎಎಸ್ನ ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಪರೀಕ್ಷೆಗಾಗಿ ಎಫ್ಡಿಎ ಅನುಮೋದಿಸಿದ ಕೋಬಾಸ್ ಕಿಟ್ (ರೋಚೆ) ಮತ್ತು ಯುರೋಪಿಯನ್ ಯೂನಿಯನ್ ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಡಯಾಗ್ನೋಸ್ಟಿಕ್ಸ್ (ಸಿಇ-ಐವಿಡಿ) ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಿದ ಥೆರಾಸ್ಕ್ರೀನ್ ಆರ್ಜಿಕ್ಯು ಕಿಟ್ (ಕಿಯಾಜೆನ್) ಎಲ್ಲರೂ ಎಆರ್ಎಂಎಸ್ ತತ್ವವನ್ನು ಬಳಸುತ್ತಾರೆ. ಸಾಮಾನ್ಯ ವಿಧಾನಗಳಲ್ಲಿ, ARMS ವಿಧಾನವು ಅತ್ಯಂತ ಸೂಕ್ಷ್ಮವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ವೆಚ್ಚವು ತುಲನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಸಮಂಜಸವಾಗಿದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ, ದೇಶ ಮತ್ತು ವಿದೇಶಗಳಲ್ಲಿ ಕೆಆರ್ಎಎಸ್ ವಂಶವಾಹಿಗಳ ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವಿಕೆಯ ಹೆಚ್ಚಿನ ಭಾಗವು ಎಆರ್ಎಂಎಸ್ ವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸುತ್ತಿದೆ, ಆದರೆ ಈ ವಿಧಾನವು ಪಿಸಿಆರ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವನ್ನು ಆಧರಿಸಿರುವುದರಿಂದ, ಇದರ ನ್ಯೂನತೆಯೆಂದರೆ ಅದನ್ನು ತಿಳಿದಿರುವ ಸೈಟ್ ರೂಪಾಂತರಗಳನ್ನು ಮಾತ್ರ ಕಂಡುಹಿಡಿಯಬಹುದು.

4. ನೈಜ-ಸಮಯದ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ ಪಿಸಿಆರ್ ವಿಧಾನ:

Ct ಮೌಲ್ಯದಿಂದ ರೂಪಾಂತರವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಇದು PCR-ಆಧಾರಿತ ಪತ್ತೆ ವಿಧಾನವಾಗಿದೆ. ಇದು ಬಲವಾದ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ, ಹೆಚ್ಚಿನ ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆ, ನಿಖರವಾದ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ, ಸುಲಭ ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆ ಮತ್ತು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಮುಚ್ಚಿದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಪ್ರಯೋಜನಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ. ಕೊಲೊರೆಕ್ಟಲ್ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ನಲ್ಲಿ KRAS ರೂಪಾಂತರಗಳನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಅನೇಕ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಗುಂಪುಗಳು ಈ ವಿಧಾನವನ್ನು ಅಳವಡಿಸಿಕೊಂಡಿವೆ. ನೇರ ಅನುಕ್ರಮ ವಿಧಾನದೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ PCR ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರಯೋಜನವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ. ಎರಡು ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಹೋಲಿಸುವ ಹೆಚ್ಚಿನ ವಿದ್ವಾಂಸರು ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ ಪಿಸಿಆರ್ ಹೆಚ್ಚು ಸಂವೇದನಾಶೀಲವಾಗಿದೆ ಎಂದು ನಂಬುತ್ತಾರೆ. ಲಿಯು ವೀ ಮತ್ತು ಇತರರು. ಕೊಲೊರೆಕ್ಟಲ್ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ KRAS ಜೀನ್ ರೂಪಾಂತರಗಳ 280 ಪ್ರಕರಣಗಳ ಪತ್ತೆ ಫಲಿತಾಂಶಗಳ ವಿವರವಾದ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಮಾಡಲು ಎರಡು ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಬಳಸಲಾಗಿದೆ, KRAS ಜೀನ್ ಅನುಕ್ರಮ ರೂಪಾಂತರಗಳ 94 ಪ್ರಕರಣಗಳು, ಧನಾತ್ಮಕ ದರವು 33.57% (94/280), ಇದರಲ್ಲಿ ನೈಜ-ಸಮಯದ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕವಾಗಿದೆ ಪಿಸಿಆರ್ ಧನಾತ್ಮಕ 91 ಪ್ರಕರಣಗಳು 96.8% (91/94) ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದ್ದವು. 186 ಜೀನ್ ಅನುಕ್ರಮ ವೈಲ್ಡ್-ಟೈಪ್ ಪ್ರಕರಣಗಳಲ್ಲಿ, 184 ನೈಜ-ಸಮಯದ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ PCR ನಿಂದ ಋಣಾತ್ಮಕವಾಗಿದ್ದು, 98.9% (184/186) ನ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ. ನೈಜ-ಸಮಯದ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ PCR ವಿಧಾನ ಮತ್ತು ನೇರ ಜೀನ್ ಅನುಕ್ರಮ ವಿಧಾನದ ನಡುವಿನ ಕಾಕತಾಳೀಯ ದರವು 98.2% ಆಗಿತ್ತು. ಎರಡು ಪತ್ತೆ ವಿಧಾನಗಳಲ್ಲಿ, ಪ್ರತಿ ರೂಪಾಂತರದ ಸೈಟ್‌ನ ಧನಾತ್ಮಕ ಮತ್ತು ಋಣಾತ್ಮಕ ಕಾಕತಾಳೀಯ ದರಗಳು 90% ಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿವೆ ಮತ್ತು ನಾಲ್ಕು ಸೈಟ್‌ಗಳ ಕಾಕತಾಳೀಯ ದರವು 100% ತಲುಪಿದೆ. ಎರಡು ವಿಧಾನಗಳ ಪತ್ತೆ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಹೆಚ್ಚು ಸ್ಥಿರವಾಗಿದ್ದು, ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ PCR ಅನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ ಇದು ರೂಪಾಂತರ ಪತ್ತೆಗೆ ಹೆಚ್ಚು ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹ ವಿಧಾನವಾಗಿದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, PCR-ಆಧಾರಿತ ವಿಧಾನಗಳು ತಿಳಿದಿರುವ ರೂಪಾಂತರದ ಪ್ರಕಾರಗಳ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ರೋಬ್‌ಗಳನ್ನು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸುವ ಅಗತ್ಯವಿದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಎಲ್ಲಾ ಸಂಭಾವ್ಯ ರೂಪಾಂತರಗಳನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ ಮತ್ತು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಸೈಟ್‌ಗಳನ್ನು ಮಾತ್ರ ಕಂಡುಹಿಡಿಯಬಹುದು. ಒಂದು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಸೈಟ್ ಅನ್ನು ಕಿಟ್‌ನ ಪತ್ತೆ ಶ್ರೇಣಿಯಲ್ಲಿ ಸೇರಿಸದಿದ್ದರೆ, ವಾಸ್ತವವಾಗಿ ರೂಪಾಂತರವಿದ್ದರೂ ಸಹ, ಕಿಟ್ ಫಲಿತಾಂಶವು ಇನ್ನೂ ನಕಾರಾತ್ಮಕವಾಗಿರುತ್ತದೆ. ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ PCR ನ ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯು ಅಧಿಕವಾಗಿದ್ದರೂ, ತಪ್ಪು ಧನಾತ್ಮಕ ಅಂಶಗಳಿವೆಯೇ ಎಂಬುದನ್ನು ಇನ್ನೂ DNA ಅನುಕ್ರಮ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನದಿಂದ ಪರಿಶೀಲಿಸಬೇಕಾಗಿದೆ, ಅಥವಾ KRAS ರೂಪಾಂತರ ಸ್ಥಿತಿ ಮತ್ತು ಗುರಿಯ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿತ್ವದ ನಡುವಿನ ಪರಸ್ಪರ ಸಂಬಂಧವನ್ನು ದೃಢೀಕರಿಸಲು ದೊಡ್ಡ ಮಾದರಿ ಗಾತ್ರಗಳೊಂದಿಗೆ ಹಿಂದಿನ ಮತ್ತು ನಿರೀಕ್ಷಿತ ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಪ್ರಯೋಗಗಳು ಔಷಧಗಳು . ಆದ್ದರಿಂದ, ರೂಪಾಂತರದ ಪತ್ತೆಯ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯನ್ನು ಕುರುಡಾಗಿ ಅನುಸರಿಸಬಾರದು, ಆದರೆ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವಿಕೆಯ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ ಮತ್ತು ನಿಖರತೆಯನ್ನು ನಿರ್ಲಕ್ಷಿಸಬೇಕು. ವಿಭಿನ್ನ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ, ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ರೂಪಾಂತರವನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಸೂಕ್ತವಾದ ವಿಧಾನವು ವಿಭಿನ್ನವಾಗಿರಬಹುದು. ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರಮಾಣದ ರೂಪಾಂತರಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಮಾದರಿಗಳಿಗೆ, ಜೀನ್ ರೂಪಾಂತರಗಳನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವಲ್ಲಿ ಸ್ಯಾಂಗರ್ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್ ವಿಧಾನವು ಹೆಚ್ಚಿನ ನಿಖರತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಆದರೆ ಕಡಿಮೆ ಪ್ರಮಾಣದ ರೂಪಾಂತರಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಮಾದರಿಗಳಿಗೆ, ಸ್ಯಾಂಗರ್ ಅನುಕ್ರಮ ವಿಧಾನ ತಪ್ಪು ನಿರಾಕರಣೆಗಳು ಸಂಭವಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಪ್ರತಿದೀಪಕ PCR ಅನ್ನು ತಾಂತ್ರಿಕ ವೇದಿಕೆಯಾಗಿ ಬಳಸುವ ಪತ್ತೆ ವಿಧಾನ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂವೇದನೆಯಿಂದ ನಿರೂಪಿಸಬಹುದು.

5. ಎಚ್‌ಆರ್‌ಎಂ ವಿಧಾನ:

ಇತ್ತೀಚಿನ ವರ್ಷಗಳಲ್ಲಿ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಬಳಸುವ ಜೀನ್ ಪತ್ತೆ ವಿಧಾನಗಳಲ್ಲಿ ಇದು ಒಂದು. ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು ಇದು ಸರಳ, ವೇಗದ, ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಮತ್ತು ಏಕ ಕೊಳವೆಯ ಅನುಕೂಲಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ. ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಪರೀಕ್ಷೆಯಲ್ಲಿ ಇದರ ಬಳಕೆಯ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ಅನ್ವೇಷಿಸುವ ಸಲುವಾಗಿ, ಲಿಯು ಲಿಕಿನ್ ಮತ್ತು ಇತರರು ಕೊಲೊರೆಕ್ಟಲ್ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಹೊಂದಿರುವ 64 ರೋಗಿಗಳಲ್ಲಿ ಕೆಆರ್ಎಎಸ್ ಜೀನ್ ರೂಪಾಂತರಗಳನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲು ಎಚ್‌ಆರ್‌ಎಂ ವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸಿದರು ಮತ್ತು ನಂತರ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸಲು ನೇರ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಬಳಸಿದರು. ಎಚ್‌ಆರ್‌ಎಂ ಮತ್ತು ನೇರ ಅನುಕ್ರಮದ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಸ್ಥಿರವಾಗಿರುವುದು ಕಂಡುಬರುತ್ತದೆ. ನೇರ ಅನುಕ್ರಮದೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, ಎಚ್‌ಆರ್‌ಎಂನಿಂದ ಕೆಆರ್‌ಎಎಸ್ ಜೀನ್ ರೂಪಾಂತರಗಳನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯುವುದು ಸರಳ ಮತ್ತು ನಿಖರವಾಗಿದೆ, ಇದು ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಪರೀಕ್ಷೆಗೆ ಸೂಕ್ತವಾದ ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹ ವಿಧಾನವೆಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಚೆನ್ hi ಿಹೋಂಗ್ ಮತ್ತು ಇತರರು. ಅವುಗಳ ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲು ಕೆಆರ್ಎಎಸ್ ರೂಪಾಂತರಿತ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್‌ಗಳ ವಿಭಿನ್ನ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಮಿಶ್ರ ಮಾದರಿಗಳ ಸರಣಿಯನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲು ಎಚ್‌ಆರ್‌ಎಂ ವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸಲಾಗಿದೆ. ಮಿಶ್ರ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿನ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ರೂಪಾಂತರಗಳ ಪ್ರಮಾಣವು 10%, ಮತ್ತು ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯು 10% ತಲುಪಿದೆ ಎಂದು ಕಂಡುಬಂದಿದೆ. ತರುವಾಯ, 60 ಕೊಲೊರೆಕ್ಟಲ್ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಅಂಗಾಂಶ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ಕೆಆರ್ಎಎಸ್ ಜೀನ್ ರೂಪಾಂತರಗಳನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲು ಈ ವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸಲಾಯಿತು. ನೇರ ಅನುಕ್ರಮ ವಿಧಾನದೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, ಎಚ್‌ಆರ್‌ಎಂ ವಿಧಾನದ ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯು 100%, ಮತ್ತು ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯು 96% (43/45) ಆಗಿತ್ತು. ಎಚ್‌ಆರ್‌ಎಂ ವಿಧಾನದ ಅನಾನುಕೂಲವೆಂದರೆ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ರೂಪಾಂತರ ಪ್ರಕಾರವನ್ನು ನಿಖರವಾಗಿ ಒದಗಿಸುವುದು ಅಸಾಧ್ಯ ಮತ್ತು ಯಾವ ಕೋಡಾನ್ ರೂಪಾಂತರಗೊಂಡಿದೆ. ಕರಗುವ ವಕ್ರರೇಖೆಯಲ್ಲಿ ಅಸಹಜತೆ ಕಂಡುಬಂದರೆ, ರೂಪಾಂತರದ ಪ್ರಕಾರವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಅನುಕ್ರಮ ವಿಧಾನದ ಅಗತ್ಯವಿದೆ. ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಪಿಸಿಆರ್, ಎಆರ್ಎಂಎಸ್ ಮತ್ತು ಎಚ್‌ಆರ್‌ಎಂ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಹೋಲಿಸಲು ಹಾರ್ಲೆ ಸಂಶೋಧನಾ ಗುಂಪು ಕೊಲೊರೆಕ್ಟಲ್ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಅಂಗಾಂಶದ 156 ಪ್ರಕರಣಗಳನ್ನು ಬಳಸಿದೆ. ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಮೂರು ವಿಧಾನಗಳು ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಪರೀಕ್ಷೆಗೆ ಸೂಕ್ತವಾಗಿದ್ದರೂ, ಎಚ್‌ಆರ್‌ಎಂನ ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹತೆಯು ಇತರ ಎರಡು ವಿಧಾನಗಳಂತೆ ಉತ್ತಮವಾಗಿಲ್ಲ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.

6. ಇತರ ವಿಧಾನಗಳು:

ಮೇಲೆ ತಿಳಿಸಿದ ವಿಧಾನಗಳ ಜೊತೆಗೆ, ಪಿಸಿಆರ್-ಎಸ್‌ಎಸ್‌ಸಿಪಿ, ಹೆಚ್ಚಿನ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆಯ ಲಿಕ್ವಿಡ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ, ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಪಿಸಿಆರ್-ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ಡ್ ಆಲಿಗೊನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್ ಪ್ರೋಬ್ ವಿಧಾನ, ನೆಸ್ಟೆಡ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಮತ್ತು ಎಆರ್ಎಂಎಸ್ ಸಂಯೋಜನೆಯ ವಿಧಾನ, ಕೋಲ್ಡ್-ಪಿಸಿಆರ್ ನಂತಹ ಇತರ ಪತ್ತೆ ವಿಧಾನಗಳು ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್‌ನಲ್ಲಿ ತಮ್ಮದೇ ಆದ ಅನುಕೂಲಗಳು ಮತ್ತು ಅನಾನುಕೂಲಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ. ವಿಧಾನ, ಇತ್ಯಾದಿ. ಹೆಚ್ಚಿನ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆಯ ದ್ರವ ವರ್ಣರೇಖನವು ಬಲವಾದ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಆದರೆ ಮಾದರಿಗಳ ಬೇಡಿಕೆ ದೊಡ್ಡದಾಗಿದೆ; ಪಿಸಿಆರ್-ಎಸ್‌ಎಸ್‌ಸಿಪಿ ವೆಚ್ಚ ಮತ್ತು ಆರ್ಥಿಕವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ, ಆದರೆ ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆ ಸಂಕೀರ್ಣವಾಗಿದೆ; ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಪಿಸಿಆರ್ ಆಧಾರಿತ ರೂಪಾಂತರ ಪತ್ತೆ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವು ಬಲವಾದ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ, ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂವೇದನೆ ಮತ್ತು ನಿಖರವಾದ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ, ಸುಲಭ ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆ, ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ನಿರ್ಬಂಧಿತ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಮತ್ತು ಇತರ ಅನುಕೂಲಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಆದರೆ ಎಲ್ಲರೂ ತಿಳಿದಿರುವ ರೂಪಾಂತರ ಪ್ರಕಾರಕ್ಕೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ಪ್ರೈಮರ್ ಮತ್ತು ಪ್ರೋಬ್‌ಗಳನ್ನು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಬೇಕಾಗಿದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಸೈಟ್‌ಗಳು ಮಾತ್ರ ಆಗಿರಬಹುದು ಪತ್ತೆಯಾಗಿದೆ, ಮತ್ತು ಸಂಭವನೀಯ ಎಲ್ಲಾ ರೂಪಾಂತರಗಳನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ.

3. ಸಾರಾಂಶ

ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತವಾಗಿ ಹೇಳುವುದಾದರೆ, ವಿಭಿನ್ನ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯಗಳಲ್ಲಿನ ರೂಪಾಂತರದ ತಾಣಗಳು ಮತ್ತು ಪತ್ತೆ ವಿಧಾನಗಳು ಏಕರೂಪವಾಗಿಲ್ಲದ ಕಾರಣ, ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಿದ ಗೆಡ್ಡೆಯ ಮಾದರಿಗಳ ಗಾತ್ರ ಮತ್ತು ಡಿಎನ್‌ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಯ ಗುಣಮಟ್ಟವೂ ಅಸಮವಾಗಿರುತ್ತದೆ, ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯಗಳ ನಡುವೆ ದೊಡ್ಡ ಅಥವಾ ಸಣ್ಣ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಫಲಿತಾಂಶಗಳ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳು, ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ KRAS ನ ಜೀನ್ ರೂಪಾಂತರ ಪತ್ತೆ ವಿವಿಧ ದೇಶಗಳಲ್ಲಿ ಕಾಳಜಿಯ ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಪತ್ತೆ ಸಮಸ್ಯೆಯಾಗಿದೆ. ಪ್ರಸ್ತುತ, ಕೆಆರ್ಎಎಸ್ ಜೀನ್‌ನಲ್ಲಿ ರೂಪಾಂತರಗಳನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲು ಹಲವು ವಿಧಾನಗಳಿವೆ. ARMS, ಪೈರೋಕ್ಸೆನ್ಸಿಂಗ್, HRM, ನೈಜ-ಸಮಯದ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ PCR, ಮತ್ತು ನೇರ ಅನುಕ್ರಮಣಿಕೆಯು ಹೆಚ್ಚಿನದರಿಂದ ಕೆಳಕ್ಕೆ ಸಂವೇದನೆ. ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ರಿಯಾಲಿಟಿ ಯಿಂದ, ಕಡಿಮೆ ಸಂವೇದನೆ ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗೆ ಅನುಕೂಲಕರವಾಗಿಲ್ಲ, ಆದರೆ ತುಂಬಾ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ವಿಧಾನಗಳು ಪತ್ತೆ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಕುಸಿಯಲು ಕಾರಣವಾಗುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಅನಗತ್ಯ ಸುಳ್ಳು ಸಕಾರಾತ್ಮಕ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಸಂಭವಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ರೋಗಿಯ ನಂತರದ ation ಷಧಿ ಕಟ್ಟುಪಾಡುಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರಬಹುದು. ಮೇಲಿನ ಅಂಶಗಳನ್ನು ಪರಿಗಣಿಸಿ, ಎಫ್ಡಿಎ ಅನುಮೋದಿಸಿದ ವಿಧಾನದೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸಿ, ARMS ವಿಧಾನವನ್ನು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ. ಸಹಜವಾಗಿ, ಮಾರುಕಟ್ಟೆ ದೃಷ್ಟಿಕೋನದಿಂದ, ಆಣ್ವಿಕ ರೋಗನಿರ್ಣಯವು ನನಗೆ ಒತ್ತು ನೀಡಬಾರದು
ವಿಧಾನಗಳು, ಆದರೆ ಅಂತಿಮ ಸರಿಯಾದ ಫಲಿತಾಂಶಗಳ ಮೇಲೆ ಕೇಂದ್ರೀಕರಿಸಿ. ವಿಭಿನ್ನ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯಗಳು ವಾಸ್ತವಿಕ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ಸೂಕ್ತವಾದ ಪರೀಕ್ಷಾ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಅಳವಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಬಹುದು, ಆದರೆ ಅವುಗಳು ಉತ್ತಮ ಆಪರೇಟರ್ ಅರ್ಹತೆಗಳು ಮತ್ತು ಆಂತರಿಕ ಗುಣಮಟ್ಟ ನಿಯಂತ್ರಣ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದ್ದರೆ ಮಾತ್ರ. ಪ್ರಸ್ತುತ ದೇಶೀಯ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದ ಪರಿಸರ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ, ಪ್ರಮಾಣಿತ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದಲ್ಲಿ ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಕೈಗೊಳ್ಳುವುದು ಮತ್ತು ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯ ಪರೀಕ್ಷೆಯ ಗುಣಮಟ್ಟವನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು ದೇಶೀಯ ಮತ್ತು ಅಂತರಾಷ್ಟ್ರೀಯ ಅಂತರ-ಕೋಣೆ ಗುಣಮಟ್ಟ ನಿಯಂತ್ರಣ ಚಟುವಟಿಕೆಗಳಲ್ಲಿ ಭಾಗವಹಿಸುವುದು ಅವಶ್ಯಕ. ಸ್ಥಿರವಾದ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು ಪ್ರಮಾಣಿತ ನಿರ್ವಹಣೆಯು ಅಗತ್ಯವಾದ ಸ್ಥಿತಿಯಾಗಿದೆ. ಚೀನಾದಲ್ಲಿ, KRAS ಜೀನ್‌ನ ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಏಕೀಕರಿಸುವ ಮತ್ತು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸುವ ತುರ್ತು ಅವಶ್ಯಕತೆಯಿದೆ, ಮತ್ತು ವಿವಿಧ ಅಗತ್ಯಗಳಿಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ಪ್ರಮಾಣಿತ ಮತ್ತು ಪ್ರಮಾಣಿತ ಪರೀಕ್ಷಾ ಕಾರ್ಯಕ್ರಮವನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು, ಮತ್ತು ಈ ಪ್ರೋಗ್ರಾಂ ಅನ್ನು BRAF, PIK23450_3CA, EGFR ಮತ್ತು ಪತ್ತೆಗೆ ವಿಸ್ತರಿಸಬಹುದು. ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಆಣ್ವಿಕ ರೋಗಶಾಸ್ತ್ರ ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸಲು ಇತರ ಜೀನ್‌ಗಳು.