ការដាក់ពាក្យនិងវាយតម្លៃវិធីសាស្ត្រផ្លាស់ប្តូរហ្សែនខេអរអេសចំពោះជំងឺមហារីកពោះវៀនធំ

ថ្នាំដែលកំណត់គោលដៅដូចជា cetuximab និង panitumumab ត្រូវបានគេប្រើប្រាស់យ៉ាងទូលំទូលាយនៅក្នុងគ្លីនិកថាជាថ្នាំព្យាបាលដ៏មានប្រសិទ្ធភាពសម្រាប់ជំងឺមហារីកពោះវៀនធំ។ ទិន្នន័យគ្លីនិកបង្ហាញថាអ្នកជំងឺដែលមានការផ្លាស់ប្តូរ KRAS មិនមានឥទ្ធិពលខ្លាំងលើថ្នាំអង់ទីករ monoclonal នេះទេ ហើយមានតែអ្នកជំងឺប្រភេទព្រៃប៉ុណ្ណោះដែលអាចទទួលបានអត្ថប្រយោជន៍ពីវា។ ដូច្នេះ ស្ថានភាពនៃការផ្លាស់ប្តូរហ្សែន KRAS ត្រូវបានគេចាត់ទុកថា ជាសញ្ញាសម្គាល់ព្យាបាលដ៏សំខាន់ ដែលមានទំនាក់ទំនងយ៉ាងរឹងមាំជាមួយនឹងការព្យាករណ៍ និងប្រសិទ្ធភាពព្យាបាលនៃជំងឺមហារីកពោះវៀនធំ។ បណ្តាញទូលំទូលាយនៃជំងឺមហារីកជាតិឆ្នាំ 2009 (NCCN) គោលការណ៍ណែនាំស្តីពីការអនុវត្តគ្លីនិកមហារីកពោះវៀនធំកំណត់ថាអ្នកជំងឺទាំងអស់ដែលមានជំងឺមហារីកពោះវៀនធំត្រូវតែរកឃើញស្ថានភាពនៃការផ្លាស់ប្តូរហ្សែន KRAS ហើយមានតែប្រភេទ KRAS ប៉ុណ្ណោះដែលត្រូវបានណែនាំអោយទទួលការព្យាបាលតាមគោលដៅ EGFR ។ ក្នុងឆ្នាំដដែលនោះ សមាគមន៍ជំងឺមហារីកគ្លីនិកអាមេរិក (ASCO) ក៏បានចេញនូវការណែនាំអំពីការព្យាបាលតាមគ្លីនិកដូចគ្នា ដែលជាសញ្ញាសម្គាល់ម៉ូលេគុលសម្រាប់ការព្យាបាលដុំសាច់ ដែលបង្ហាញពីសារៈសំខាន់នៃការណែនាំដ៏សំខាន់របស់វា។ នាពេលបច្ចុប្បន្ន ការធ្វើតេស្តហ្សែន KRAS ត្រូវបានអនុវត្តយ៉ាងទូលំទូលាយតាមគ្លីនិក។ យើងវាយតម្លៃជាចម្បងនូវវិធីសាស្ត្ររកឃើញការផ្លាស់ប្តូរហ្សែន KRAS ក្នុងស្រុកសម្រាប់ជាឯកសារយោងក្នុងការជ្រើសរើសគ្លីនិក។

1. អត្រាវិជ្ជមាននៃការផ្លាស់ប្តូរហ្សែន KRAS ក្នុងជំងឺមហារីកពោះវៀនធំ

នៅក្នុងមហារីកពោះវៀនធំ អត្រានៃការផ្លាស់ប្តូរហ្សែន KRAS គឺខ្ពស់រហូតដល់ 35% ទៅ 45% ហើយកន្លែងផ្លាស់ប្តូរដែលមានហានិភ័យខ្ពស់គឺ codons 12 និង 13 នៅលើ exon 2 ហើយនៅមានកម្រមួយចំនួនដូចជា 61 និង 146។ ការផ្លាស់ប្តូរ គេហទំព័រ។ មានវិធីសាស្រ្តរាវរកជាច្រើនសម្រាប់ការផ្លាស់ប្តូរហ្សែន KRAS រួមទាំងការបន្តផ្ទាល់ ការវិភាគខ្សែកោងរលាយខ្ពស់ (HRM) ការធ្វើ pyrosequencing បរិមាណ PCR ប្រព័ន្ធបំប្លែងបំរែបំរួលបំរែបំរួល (amplinc atio) ប្រព័ន្ធ nrefractorymutation (ARMS) ការរឹតបន្តឹងប្រវែងប៉ូលីម័រហ្វីស (RFLP) ។ polymerase chain reaction-single-strand conformation polymorphism analysis (PCR-singlestrand confomation polymorphism (PCR-SSCP), co-amplification at low denaturation temperatur PCR (COLD-PCR) and high-performance liquid chromatography analysis ល។

2. ការវាយតម្លៃវិធីសាស្រ្តរកឃើញការផ្លាស់ប្តូរ KRAS

1. វិធីសាស្ត្របន្តផ្ទាល់៖ វាគឺជាវិធីសាស្ត្របុរាណបំផុតសម្រាប់ការរកឃើញការផ្លាស់ប្តូរហ្សែន KRAS ហើយវាក៏ជាស្តង់ដារមាសសម្រាប់ការរកឃើញការផ្លាស់ប្តូរហ្សែនផងដែរ។ វិធីសាស្រ្តបន្តផ្ទាល់ដោយផ្អែកលើគោលការណ៍នៃលំដាប់ Dideoxy អាចបង្ហាញវិចារណញាណបំផុតអំពីការផ្លាស់ប្តូរនៃលំដាប់ហ្សែនក្នុងទម្រង់នៃផែនទីកំពូលគោល។ ប្រភេទនៃការរកឃើញគឺមានលក្ខណៈទូលំទូលាយជាង ហើយវាក៏ជាវិធីសាស្ត្ររកឃើញការផ្លាស់ប្តូរដែលបានអនុវត្តដំបូងបំផុតផងដែរ។ ទោះបីជាមានការលេចឡើងនៃវេទិកាលំដាប់លំដោយជំនាន់ថ្មីក៏ដោយ ក៏អ្នកប្រាជ្ញក្នុងប្រទេស និងក្រៅប្រទេសនៅតែប្រើប្រាស់លទ្ធផលនៃការបន្តផ្ទាល់ជាមាត្រដ្ឋានដើម្បីវាស់វែង និងកំណត់ភាពជឿជាក់នៃវិធីសាស្ត្រថ្មី។ Gao Jing et al ។ បានអនុវត្តការបន្តផ្ទាល់ទៅនឹងការរកឃើញនៃការផ្លាស់ប្តូរហ្សែន KRAS និង BRAF នៅក្នុងអ្នកជំងឺ 966 នាក់ដែលមានជំងឺមហារីកពោះវៀនធំ។ នេះក៏ជាការវិភាគនៃការផ្លាស់ប្តូរហ្សែន KRAS ជាមួយនឹងគំរូក្នុងស្រុកដ៏ធំបំផុតដែលបានរាយការណ៍នៅក្នុងអក្សរសិល្ប៍។ Ling Yun និងអ្នកផ្សេងទៀតជឿថា វិធីសាស្ត្របន្តផ្ទាល់ គឺជាវិធីសាស្ត្ររកឃើញដោយផ្ទាល់ និងមានប្រសិទ្ធភាពបំផុតសម្រាប់ការយល់ដឹងអំពីស្ថានភាពនៃការផ្លាស់ប្តូរហ្សែននីមួយៗ ដែលអាចបញ្ជាក់អំពីប្រភេទនៃការផ្លាស់ប្តូរ ជាពិសេសសម្រាប់ការរកឃើញនៃការផ្លាស់ប្តូរដែលមិនស្គាល់។ ទោះបីជាភាពប្រែប្រួលនៃវិធីសាស្រ្តនេះគឺមានកម្រិតទាបក៏ដោយ វាអាចត្រូវបានកែលម្អដោយវិធីសាស្រ្តដូចជា microdissection ដើម្បីបង្កើនកោសិកាដុំសាច់។ វិធីសាស្រ្តបន្តផ្ទាល់ក៏ត្រូវបានអនុវត្តចំពោះការរកឃើញ KRAS នៃទំហំគំរូធំជាងនៅក្នុងក្រុមស្រាវជ្រាវក្នុងស្រុកផ្សេងទៀត។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ភាពប្រែប្រួលទាបគឺជាគុណវិបត្តិដ៏ធំបំផុតនៃការបន្តផ្ទាល់។ ដោយវិនិច្ឆ័យពីលទ្ធផលដែលបានរាយការណ៍នៅក្នុងប្រទេសចិន អត្រានៃការរកឃើញការផ្លាស់ប្តូរដោយការបន្តផ្ទាល់គឺមិនទាបទេ។ Liu Xiaojing et al ។ ប្រៀបធៀបការបន្តផ្ទាល់ និងការគៀបអាស៊ីត peptide nucleic acid PCR (PNA-PCR) ហើយបានរកឃើញថា 43 ករណីនៃការផ្លាស់ប្តូរហ្សែន KRAS ត្រូវបានរកឃើញដោយការបន្តផ្ទាល់។ បន្ថែមពីលើការផ្លាស់ប្តូរទាំងនេះ PNA-PCR ក៏ត្រូវបានរកឃើញដោយការបន្តផ្ទាល់។ ការផ្លាស់ប្តូរចំនួន 10 ត្រូវបានរកឃើញនៅក្នុងប្រភេទសត្វព្រៃ ហើយការផ្តល់យោបល់ត្រូវបានធ្វើឡើងដើម្បីកំណត់អ្នកជំងឺប្រភេទព្រៃដោយ PCR និងវិធីសាស្ត្របន្តផ្ទាល់ដើម្បីកំណត់អ្នកជំងឺដែលផ្លាស់ប្តូរ។ Qiu Tian et al ។ បានរកឃើញគំរូមហារីកពោះវៀនធំចំនួន 131 ដោយវិធីសាស្ត្រ fluorescent PCR-optimized oligonucleotide probe និងវិធីសាស្ត្របន្តផ្ទាល់ ហើយអត្រាវិជ្ជមាននៃការផ្លាស់ប្តូរហ្សែន KRAS គឺ 41.2% (54/131) និង 40.5% (53/131) ។ Bai Dongyu ក៏បានពិភាក្សាអំពីភាពរសើបនៃការរកឃើញនៃវិធីសាស្រ្តផ្សេងៗ។ ក្នុងចំណោមអ្នកជំងឺមហារីកពោះវៀនធំ 200 នាក់ 63 នាក់ត្រូវបានរកឃើញដោយការផ្លាស់ប្តូរ RT-qPCR ហើយអត្រានៃការរកឃើញការផ្លាស់ប្តូរគឺ 31.5% ។ គំរូ 169 ត្រូវបានបន្តដោយជោគជ័យដោយការបន្តផ្ទាល់ 50 ករណីនៃការផ្លាស់ប្តូរ អត្រារកឃើញការផ្លាស់ប្តូរ 29.6% ។ ទោះបីជាវិធីសាស្រ្តបន្តបន្ទាប់គ្នាអាចរកឃើញយ៉ាងត្រឹមត្រូវ វត្ថុបំណង និងជាពិសេសរកឃើញស្ថានភាពនៃការផ្លាស់ប្តូរហ្សែន KRAS ក៏ដោយ ក៏ការខ្វះខាតរបស់វាដូចជាតម្រូវការបច្ចេកទេសខ្ពស់ នីតិវិធីប្រតិបត្តិការដ៏ស្មុគស្មាញ ងាយបង្កឱ្យមានការចម្លងរោគ និងការបកស្រាយលទ្ធផលដែលចំណាយពេលច្រើន និងការពិបាកយល់ផងដែរ។ ជាក់ស្តែង។ ជារឿយៗមិនមានគ្រឿងបរិក្ខារតាមលំដាប់លំដោយទេ ហើយសំណាកត្រូវបញ្ជូនទៅកាន់ក្រុមហ៊ុនដែលត្រូវគ្នាដើម្បីធ្វើតេស្ត ដែលត្រូវចំណាយពេលយូរ និងមានតម្លៃថ្លៃខ្ពស់ ដូច្នេះវាមានកម្រិតខ្លាំង។

វិធីសាស្ត្រ Pyrosequencing៖

វិធីសាស្ត្រ Pyrosequencing ក៏ជាវិធីសាស្រ្តងាយស្រួលជាងសម្រាប់ការរកឃើញការផ្លាស់ប្តូរហ្សែន KRAS ទាក់ទងនឹងភាពប្រែប្រួលតាមលំដាប់ ការចំណាយលើការរកឃើញ និងពេលវេលាដើម្បីរាយការណ៍។ ការធ្វើម្តងទៀតនៃវិធីសាស្រ្តនេះគឺប្រសើរជាង។ យោងតាមផែនទីកំពូលដែលទទួលបាន ការសិក្សាបរិមាណនៃប្រេកង់បំរែបំរួលនៃគេហទំព័រជាក់លាក់មួយ និងការប្រៀបធៀបរវាងប្រេកង់ផ្លាស់ប្តូរនៃគេហទំព័រផ្សេងៗគ្នាគឺច្បាស់ភ្លាមៗ។ ក្នុងប៉ុន្មានឆ្នាំថ្មីៗនេះ Ogino et al ។ , Hutchins et al ។ បានប្រើបច្ចេកវិទ្យា pyrosequencing ដើម្បីធ្វើតេស្តការផ្លាស់ប្តូរ KRAS ចំពោះអ្នកជំងឺដែលមានគំរូមហារីកពោះវៀនធំ។ លទ្ធផលបង្ហាញថា បច្ចេកវិទ្យា pyrosequencing គឺជាឧបករណ៍ដ៏មានអានុភាពសម្រាប់ពិនិត្យអ្នកជំងឺសម្រាប់ការព្យាបាលតាមគោលដៅ។ ការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យម៉ូលេគុលដុំសាច់មានលទ្ធភាពប្រើប្រាស់ទូលំទូលាយ។ អ្នកប្រាជ្ញក្នុងស្រុកក៏បានប្រើបច្ចេកវិជ្ជា pyrosequencing ដើម្បីរកឱ្យឃើញនូវការផ្លាស់ប្តូរ KRAS នៅក្នុងជំងឺមហារីកពោះវៀនធំ ជាមួយនឹងភាពត្រឹមត្រូវ និងភាពជឿជាក់ល្អ។ វិធីសាស្រ្តនេះមានភាពជាក់លាក់ល្អជាង និងភាពប្រែប្រួលខ្ពស់។ SundstrÖm et al ។ បើប្រៀបធៀប PCR ជាក់លាក់នៃអាឡែរហ្សី និង pyrosequencing នៅក្នុងកម្មវិធីព្យាបាល ហើយបានរកឃើញថានៅក្នុង 314 ករណីនៃការផ្លាស់ប្តូរ KRAS ចំពោះអ្នកជំងឺមហារីកពោះវៀនធំ ភាពជាក់លាក់នៃ pyrosequencing គឺប្រសើរជាង alleles ។ PCR និងមានភាពប្រែប្រួលល្អចំពោះជាលិកាដែលមានមាតិកាកោសិកាដុំសាច់ទាប។ រំលាយសមាមាត្រនៃកោសិកាដុំសាច់ទៅ 1.25% ទៅ 2.5% ។ Pyrosequencing នៅតែអាចរកឃើញសញ្ញានៃការផ្លាស់ប្តូរ។ នៅពេលដែលមាតិកាអប្បបរមានៃ alleles mutant នៅក្នុងគំរូត្រូវការឈានដល់ 20% ដើម្បីត្រូវបានរកឃើញដោយ Sanger sequencing វាអាចត្រូវបានរកឃើញដោយវិធីសាស្ត្រ HRM នៅពេលដែលវាឈានដល់ 10% ហើយសម្រាប់ pyrosequencing មានតែការផ្លាស់ប្តូរអាចត្រូវបានរកឃើញដោយ 5% ប៉ុណ្ណោះ។ អាឡែស។ យើងបានប្រើ pyrosequencing ដើម្បីរកមើលការផ្លាស់ប្តូរ KRAS នៅក្នុងអ្នកជំងឺ 717 នាក់ដែលមានជំងឺមហារីកពោះវៀនធំ ហើយបានរកឃើញថាភាពញឹកញាប់នៃការផ្លាស់ប្តូរ KRAS គឺ 40.9% ។ អត្រាផ្លាស់ប្តូរនៃ codon 12 គឺ 30.1% អត្រាផ្លាស់ប្តូរនៃ codon 13 គឺ 9.8% ហើយអត្រានៃការផ្លាស់ប្តូរ codon 61 គឺ 1.0%។ យើងបានពង្រឹងជាលិកាជាមួយនឹងមាតិកាដុំសាច់កាន់តែខ្ពស់ដោយការកាត់មីក្រូវ៉េវដោយដៃមុនពេលធ្វើតេស្ត ដែលធ្វើឱ្យលទ្ធផលកាន់តែគួរឱ្យទុកចិត្ត។ វិធីសាស្រ្តមានភាពរសើប និងភាពជាក់លាក់ល្អ ហើយងាយស្រួលក្នុងការអភិវឌ្ឍក្នុងការអនុវត្តគ្លីនិក។ គុណវិបត្តិនៃ pyrosequencing គឺការចំណាយខ្ពស់នៃការរាវរក ហើយដំណើរការនៃការរៀបចំ DNA ខ្សែតែមួយសម្រាប់ sequencing សំណាកគឺពិបាក។ នៅពេលអនាគត ការធ្វើ pyrosequencing អាចត្រូវបានឧទ្ទិសដល់ការអភិវឌ្ឍន៍បច្ចេកវិទ្យាសម្រាប់ការរកឃើញដោយផ្ទាល់នៃផលិតផល PCR ដែលមានខ្សែទ្វេដែលនឹងធ្វើឱ្យប្រតិបត្តិការកាន់តែងាយស្រួល។ និងកាត់បន្ថយការចំណាយតាមលំដាប់លំដោយប្រកបដោយប្រសិទ្ធភាព ដើម្បីសម្រេចបាននូវការផ្សព្វផ្សាយទូលំទូលាយនៃការធ្វើតេស្តព្យាបាល។

3. វិធីសាស្ត្រ ARMS៖

បច្ចេកវិទ្យានេះប្រើ primers ដើម្បីបែងចែករវាងប្រភេទសត្វព្រៃ និងហ្សែន mutant, wh
ich ត្រូវបានរាយការណ៍នៅដើមទសវត្សរ៍ឆ្នាំ 1980 ។ អត្ថប្រយោជន៍ដ៏ធំបំផុតនៃវិធីសាស្រ្តនេះគឺថាវាមានភាពរសើបដល់ទៅ 1.0% ហើយអាចរកឃើញហ្សែនដែលផ្លាស់ប្តូរនៅក្នុងគំរូទាបរហូតដល់ 1.0%។ នៅក្នុងការរចនា ប្រវែងនៃផលិតផលគោលដៅអាចត្រូវបានខ្លីដល់កម្រិតធំបំផុត ហើយបញ្ហាដែលលទ្ធផលរកឃើញត្រឹមត្រូវមិនអាចទទួលបានដោយសារតែ DNA ភាគច្រើនដែលស្រង់ចេញពីគំរូជាលិកាដែលបង្កប់ដោយប៉ារ៉ាហ្វីនត្រូវបានបំបែកជាបំណែក។ បច្ចេកវិទ្យានេះរួមបញ្ចូលគ្នានូវវេទិកា PCR ពេលវេលាពិតប្រាកដដើម្បីសម្រេចបាននូវប្រតិបត្តិការបំពង់បិទកំឡុងពេលពង្រីក។ ប្រតិបត្តិការនេះគឺសាមញ្ញហើយមិនតម្រូវឱ្យមានការកែច្នៃផលិតផលក្រោយការកែច្នៃដែលអាចជៀសវាងការចម្លងរោគនៃផលិតផល amplified ដល់កម្រិតដ៏អស្ចារ្យបំផុត។ នាពេលបច្ចុប្បន្ននេះ វិធីសាស្ត្រ Scorpion-ARMS រួមបញ្ចូលគ្នារវាងការស៊ើបអង្កេតរបស់ខ្យាដំរី និងប្រព័ន្ធបំប្លែងបំរែបំរួលនៃប្លុក amplification ត្រូវបានប្រើប្រាស់ជាទូទៅនៅលើពិភពលោក។ ការរួមបញ្ចូលគ្នានៃបច្ចេកវិទ្យាទាំងពីរអាចបង្កើនភាពប្រែប្រួលនិងភាពជាក់លាក់នៃភាគីទាំងពីរ។ Gao Jie et al ។ បានប្រើវិធីសាស្រ្តនេះដើម្បីរកមើលស្ថានភាពនៃការផ្លាស់ប្តូរហ្សែន KRAS នៅក្នុងអ្នកជំងឺ 167 នាក់ដែលមានជំងឺមហារីកពោះវៀនធំ ដែលបង្ហាញថាវិធីសាស្ត្រនេះអាចទុកចិត្តបាន និងត្រឹមត្រូវ។ Wang Hui et al ។ ក៏បានប្រើ ARMS ដើម្បីរកមើលការផ្លាស់ប្តូររបស់ KRAS នៅក្នុង 151 ករណីនៃជាលិកាដែលបានជួសជុល formaldehyde និង paraffin-embedded ។ នៅសហរដ្ឋអាមេរិក កញ្ចប់ COBAS (Roche) ដែលត្រូវបានអនុម័តដោយ FDA សម្រាប់ការធ្វើតេស្តគ្លីនិកនៃ KRAS និងឧបករណ៍ Therascreen RGQ (Qiagen) ដែលត្រូវបានបញ្ជាក់ដោយសហភាពអឺរ៉ុប In Vitro Diagnostics (CE-IVD) ទាំងអស់ប្រើគោលការណ៍ ARMS ។ ក្នុងចំណោមវិធីសាស្រ្តទូទៅ វិធីសាស្ត្រ ARMS គឺមានភាពរសើបបំផុត ហើយការចំណាយគឺសមហេតុផល។ ដូច្នេះហើយ មួយផ្នែកធំនៃការរកឃើញហ្សែន KRAS ទាំងក្នុងប្រទេស និងក្រៅប្រទេសកំពុងប្រើប្រាស់វិធីសាស្ត្រ ARMS ប៉ុន្តែដោយសារវិធីសាស្ត្រនេះផ្អែកលើបច្ចេកវិទ្យា PCR ចំណុចខ្វះខាតរបស់វាគឺថាវាអាចរកឃើញតែការផ្លាស់ប្តូរគេហទំព័រដែលគេស្គាល់ប៉ុណ្ណោះ។

4. វិធីសាស្ត្រ PCR បរិមាណ fluorescence ពេលវេលាពិត៖

វាគឺជាវិធីសាស្ត្ររកឃើញដែលមានមូលដ្ឋានលើ PCR ដើម្បីកំណត់ការផ្លាស់ប្តូរដោយតម្លៃ Ct ។ វាមានគុណសម្បត្តិនៃភាពជាក់លាក់ខ្លាំង ភាពប្រែប្រួលខ្ពស់ បរិមាណត្រឹមត្រូវ ប្រតិបត្តិការងាយស្រួល និងប្រតិកម្មបិទយ៉ាងពេញលេញ។ ក្រុមពិសោធន៍ជាច្រើនបានទទួលយកវិធីសាស្រ្តនេះសម្រាប់ការរកឃើញនៃការផ្លាស់ប្តូរ KRAS នៅក្នុងជំងឺមហារីកពោះវៀនធំ។ បើប្រៀបធៀបជាមួយនឹងវិធីសាស្ត្របន្តបន្ទាប់គ្នាដោយផ្ទាល់ PCR បរិមាណកាន់កាប់អត្ថប្រយោជន៍កាន់តែច្រើននៅក្នុងភាពប្រែប្រួល។ អ្នកប្រាជ្ញភាគច្រើនដែលប្រៀបធៀបវិធីទាំងពីរនេះជឿថា PCR បរិមាណគឺមានភាពរសើបជាង។ Liu Wei et al ។ បានប្រើវិធីសាស្រ្តពីរដើម្បីធ្វើការវិភាគលម្អិតនៃលទ្ធផលនៃការរកឃើញនៃ 280 ករណីនៃការផ្លាស់ប្តូរហ្សែន KRAS មហារីកពោះវៀនធំ 94 ករណីនៃការផ្លាស់ប្តូរតាមលំដាប់ហ្សែន KRAS អត្រាវិជ្ជមានគឺ 33.57% (94/280) ដែលក្នុងនោះ បរិមាណហ្វ្លុយអូរីសក្នុងពេលវេលាជាក់ស្តែង។ PCR គឺវិជ្ជមាន 91 ករណីមានភាពប្រែប្រួល 96.8% (91/94) ។ ក្នុងចំណោម 186 ករណីតាមលំដាប់ហ្សែនប្រភេទព្រៃ 184 គឺអវិជ្ជមានដោយ PCR បរិមាណតាមពេលវេលាជាក់ស្តែង ជាមួយនឹងភាពជាក់លាក់ 98.9% (184/186) ។ អត្រាចៃដន្យរវាងវិធីសាស្ត្រ PCR បរិមាណ fluorescence ពេលវេលាពិត និងវិធីសាស្ត្របន្តពូជហ្សែនផ្ទាល់គឺ 98.2% ។ នៅក្នុងវិធីនៃការរកឃើញទាំងពីរ អត្រាចៃដន្យវិជ្ជមាន និងអវិជ្ជមាននៃកន្លែងផ្លាស់ប្តូរនីមួយៗមានលើសពី 90% ហើយអត្រាចៃដន្យនៃគេហទំព័រចំនួនបួនឈានដល់ 100% ។ លទ្ធផល​នៃ​ការ​រក​ឃើញ​នៃ​វិធី​ទាំង​ពីរ​នេះ​មាន​ភាព​ស៊ីសង្វាក់​គ្នា​ខ្លាំង​ដែល​បង្ហាញ​ពី​បរិមាណ fluorescent PCR វា​ជា​វិធីសាស្ត្រ​ដែល​អាច​ទុក​ចិត្ត​បាន​ជាង​សម្រាប់​ការ​រក​ឃើញ​ការ​ប្រែប្រួល។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ វិធីសាស្ត្រដែលមានមូលដ្ឋានលើ PCR ត្រូវរចនា primers និង probe ដោយផ្អែកលើប្រភេទការផ្លាស់ប្តូរដែលគេស្គាល់ ដូច្នេះការផ្លាស់ប្តូរដែលអាចកើតមានទាំងអស់មិនអាចត្រូវបានរកឃើញ ហើយមានតែគេហទំព័រជាក់លាក់ប៉ុណ្ណោះដែលអាចត្រូវបានរកឃើញ។ ប្រសិនបើគេហទំព័រជាក់លាក់មួយមិនត្រូវបានរាប់បញ្ចូលក្នុងជួររាវរករបស់ឧបករណ៍នោះទេ ទោះបីជាពិតជាមានការផ្លាស់ប្តូរក៏ដោយ លទ្ធផលនៃកញ្ចប់នៅតែអវិជ្ជមាន។ លើសពីនេះទៀត ទោះបីជាភាពប្រែប្រួលនៃ PCR បរិមាណគឺខ្ពស់ក៏ដោយ ថាតើមានភាពវិជ្ជមានមិនពិត នៅតែត្រូវការការផ្ទៀងផ្ទាត់ដោយបច្ចេកវិទ្យា DNA លំដាប់លំដោយ ឬការពិសោធន៍ព្យាបាលក្រោយ និងអនាគតជាមួយនឹងទំហំគំរូធំ ដើម្បីបញ្ជាក់ពីទំនាក់ទំនងរវាងស្ថានភាពនៃការផ្លាស់ប្តូរ KRAS និងប្រសិទ្ធភាពនៃគោលដៅ។ ថ្នាំ។ ដូច្នេះ ភាពប្រែប្រួលខ្ពស់នៃការរកឃើញការផ្លាស់ប្តូរមិនគួរត្រូវបានបន្តដោយខ្វាក់ភ្នែកទេ ខណៈពេលដែលភាពជាក់លាក់ និងភាពត្រឹមត្រូវនៃការរកឃើញគួរតែត្រូវបានមិនអើពើ។ នៅក្រោមលក្ខខណ្ឌមន្ទីរពិសោធន៍ផ្សេងៗគ្នា វិធីសាស្ត្រល្អបំផុតសម្រាប់ការរកឃើញការផ្លាស់ប្តូរនៅក្នុងសំណាកគំរូក៏អាចខុសគ្នាដែរ។ សម្រាប់សំណាកដែលមានសមាមាត្រនៃការផ្លាស់ប្តូរខ្ពស់ជាង វិធីសាស្ត្រលំដាប់ Sanger មានភាពត្រឹមត្រូវខ្ពស់ក្នុងការរកឃើញការផ្លាស់ប្តូរហ្សែន ខណៈពេលដែលសំណាកដែលមានសមាមាត្រទាបនៃការផ្លាស់ប្តូរ វិធីសាស្ត្រលំដាប់ Sanger ភាពអវិជ្ជមានមិនពិតអាចកើតឡើង ហើយវិធីសាស្ត្ររកឃើញដោយប្រើ fluorescent PCR ជាវេទិកាបច្ចេកទេស។ អាចត្រូវបានកំណត់លក្ខណៈដោយភាពប្រែប្រួលខ្ពស់។

5. វិធីសាស្ត្រ HRM៖

វាគឺជាវិធីសាស្រ្តមួយក្នុងចំនោមវិធីសាស្ត្ររកឃើញហ្សែនដែលប្រើជាទូទៅក្នុងប៉ុន្មានឆ្នាំថ្មីៗនេះ។ វាមានគុណសម្បត្តិនៃសាមញ្ញ រហ័ស រសើប និងបំពង់តែមួយ ដើម្បីជៀសវាងការបំពុល។ ដើម្បីស្វែងយល់ពីលទ្ធភាពនៃការប្រើប្រាស់របស់វាក្នុងការធ្វើតេស្តព្យាបាល លោក Liu Liqin និងអ្នកផ្សេងទៀតបានប្រើវិធីសាស្ត្រ HRM ដើម្បីរកមើលការផ្លាស់ប្តូរហ្សែន KRAS នៅក្នុងអ្នកជំងឺ 64 នាក់ដែលមានជំងឺមហារីកពោះវៀនធំ ហើយបន្ទាប់មកបានប្រើការបន្តផ្ទាល់ដើម្បីផ្ទៀងផ្ទាត់លទ្ធផល។ លទ្ធផលនៃ HRM និងលំដាប់ផ្ទាល់ត្រូវបានរកឃើញថាស្របគ្នា។ បើប្រៀបធៀបជាមួយនឹងការបន្តផ្ទាល់ ការរកឃើញនៃការផ្លាស់ប្តូរហ្សែន KRAS ដោយ HRM គឺសាមញ្ញ និងត្រឹមត្រូវ ដែលបង្ហាញថាវាជាវិធីសាស្ត្រដែលអាចទុកចិត្តបានដែលសមរម្យសម្រាប់ការធ្វើតេស្តព្យាបាល។ Chen Zhihong et al ។ បានប្រើវិធីសាស្រ្ត HRM ដើម្បីសាកល្បងស៊េរីនៃសំណាកចម្រុះដែលមានសមាមាត្រផ្សេងគ្នានៃ KRAS mutant plasmids ដើម្បីវាយតម្លៃភាពប្រែប្រួលរបស់វា។ វាត្រូវបានគេរកឃើញថាសមាមាត្រនៃការផ្លាស់ប្តូរប្លាស្មានៅក្នុងសំណាកចម្រុះគឺ 10% ហើយភាពប្រែប្រួលឈានដល់ 10% ។ ក្រោយមក វិធីសាស្ត្រនេះត្រូវបានគេប្រើដើម្បីរកមើលការផ្លាស់ប្តូរហ្សែន KRAS នៅក្នុងគំរូជាលិកាមហារីកពោះវៀនធំចំនួន 60 ។ បើប្រៀបធៀបជាមួយវិធីសាស្ត្របន្តផ្ទាល់ ភាពប្រែប្រួលនៃវិធីសាស្ត្រ HRM គឺ 100% ហើយភាពជាក់លាក់គឺ 96% (43/45) ។ គុណវិបត្តិនៃវិធីសាស្ត្រ HRM គឺថាវាមិនអាចទៅរួចទេក្នុងការផ្តល់នូវប្រភេទបំរែបំរួលជាក់លាក់ និង codon ណាមួយត្រូវបានផ្លាស់ប្តូរ។ ប្រសិនបើភាពមិនប្រក្រតីមួយត្រូវបានរកឃើញនៅលើខ្សែកោងរលាយនោះ វិធីសាស្ត្របន្តបន្ទាប់គឺត្រូវការជាចាំបាច់ដើម្បីកំណត់ប្រភេទនៃការផ្លាស់ប្តូរ។ ក្រុមស្រាវជ្រាវ Harlé បានប្រើ 156 ករណីនៃជាលិកាមហារីកពោះវៀនធំដើម្បីប្រៀបធៀបវិធីសាស្ត្រ fluorescent PCR, ARMS និង HRM ។ លទ្ធផលបានបង្ហាញថា ទោះបីជាវិធីសាស្រ្តទាំងបីគឺសមរម្យសម្រាប់ការធ្វើតេស្តគ្លីនិកក៏ដោយ ភាពជឿជាក់នៃ HRM គឺមិនល្អដូចវិធីសាស្ត្រពីរផ្សេងទៀតនោះទេ។

6. វិធីសាស្រ្តផ្សេងទៀត៖

បន្ថែមពីលើវិធីសាស្រ្តដែលបានរៀបរាប់ខាងលើ វិធីសាស្ត្ររាវរកផ្សេងទៀតមានគុណសម្បត្តិ និងគុណវិបត្តិផ្ទាល់របស់ពួកគេក្នុងកម្មវិធីដូចជា PCR-SSCP, high performance liquid chromatography, fluorescent PCR-optimized oligonucleotide probe method, Method of nested PCR and ARMS combination, COLD-PCR វិធីសាស្រ្ដ។ល។ ដំណើរការខ្ពស់នៃវត្ថុរាវ chromatography មានភាពជាក់លាក់ខ្លាំង ប៉ុន្តែតម្រូវការសម្រាប់គំរូមានទំហំធំ។ PCR-SSCP មានតម្លៃទាប និងសន្សំសំចៃ ប៉ុន្តែប្រតិបត្តិការមានភាពស្មុគស្មាញ។ បច្ចេកវិជ្ជារកឃើញការផ្លាស់ប្តូរដោយផ្អែកលើ fluorescent PCR មានភាពជាក់លាក់ខ្លាំង ភាពប្រែប្រួលខ្ពស់ និងបរិមាណត្រឹមត្រូវ ប្រតិបត្តិការងាយស្រួល ប្រតិកម្មទប់ស្កាត់យ៉ាងពេញលេញ និងគុណសម្បត្តិផ្សេងទៀត ប៉ុន្តែទាំងអស់ត្រូវរចនា primers និង probes ទៅតាមប្រភេទការផ្លាស់ប្តូរដែលគេស្គាល់ ដូច្នេះមានតែកន្លែងជាក់លាក់ប៉ុណ្ណោះដែលអាចមាន ត្រូវបានរកឃើញ ហើយការផ្លាស់ប្តូរដែលអាចកើតមានទាំងអស់មិនអាចត្រូវបានរកឃើញបានទេ។

3 ។ សេចក្តីសង្ខេប

សរុបមក ដោយសារកន្លែងផ្លាស់ប្តូរ និងវិធីសាស្ត្ររកឃើញនៅក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ផ្សេងៗគ្នាមិនស្មើគ្នា ទំហំនៃដុំសាច់ដែលបានវិភាគ ហើយគុណភាពនៃការទាញយក DNA ក៏មិនស្មើគ្នា ដែលនាំឱ្យកើតមានលទ្ធផលពិសោធន៍ធំ ឬតូចរវាងមន្ទីរពិសោធន៍ ភាពខុសគ្នា ស្តង់ដារ ការរកឃើញការផ្លាស់ប្តូរហ្សែន KRAS បានក្លាយជាបញ្ហានៃការរកឃើញគ្លីនិកដែលគួរឱ្យព្រួយបារម្ភនៅក្នុងប្រទេសផ្សេងៗ។ នាពេលបច្ចុប្បន្ន មានវិធីសាស្រ្តជាច្រើនក្នុងការរកឃើញការផ្លាស់ប្តូរនៅក្នុងហ្សែន KRAS ។ ភាពរសើបពីខ្ពស់ទៅទាបគឺ ARMS, pyrosequencing, HRM, PCR បរិមាណពេលវេលាពិត និងលំដាប់ផ្ទាល់។ តាមការពិតគ្លីនិក ភាពប្រែប្រួលទាបមិនអំណោយផលដល់ការព្យាបាលតាមគ្លីនិកទេ ប៉ុន្តែវិធីសាស្ត្ររសើបខ្លាំងពេកនឹងធ្វើឱ្យភាពជាក់លាក់នៃការរកឃើញធ្លាក់ចុះ ហើយលទ្ធផលវិជ្ជមានមិនពិតដែលមិនចាំបាច់អាចកើតឡើង និងប៉ះពាល់ដល់របបប្រើថ្នាំជាបន្តបន្ទាប់របស់អ្នកជំងឺ។ ដោយពិចារណាលើទិដ្ឋភាពខាងលើរួមផ្សំជាមួយនឹងវិធីសាស្ត្រដែលត្រូវបានអនុម័តដោយ FDA វិធីសាស្ត្រ ARMS ត្រូវបានណែនាំ។ ជាការពិតណាស់ តាមទស្សនៈទីផ្សារ ការវិនិច្ឆ័យម៉ូលេគុលមិនគួរសង្កត់ធ្ងន់លើខ្ញុំទេ។
thods ប៉ុន្តែផ្តោតលើលទ្ធផលត្រឹមត្រូវចុងក្រោយ។ មន្ទីរពិសោធន៍ផ្សេងៗគ្នាអាចទទួលយកវិធីសាស្រ្តធ្វើតេស្តសមស្របទៅតាមស្ថានភាពជាក់ស្តែង ប៉ុន្តែលុះត្រាតែពួកគេមានលក្ខណៈសម្បត្តិប្រតិបត្តិករល្អ និងប្រព័ន្ធត្រួតពិនិត្យគុណភាពផ្ទៃក្នុង។ នៅក្រោមលក្ខខណ្ឌបរិស្ថាននៃមន្ទីរពិសោធន៍ក្នុងស្រុកបច្ចុប្បន្ន ចាំបាច់ត្រូវអនុវត្តការធ្វើតេស្តនៅក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ PCR ដែលមានស្តង់ដារ និងចូលរួមក្នុងសកម្មភាពត្រួតពិនិត្យគុណភាពអន្តរបន្ទប់ក្នុងស្រុក និងអន្តរជាតិ ដើម្បីធានាបាននូវគុណភាពនៃការធ្វើតេស្តមន្ទីរពិសោធន៍ដែលអាចជឿទុកចិត្តបាន។ ការគ្រប់គ្រងស្តង់ដារគឺជាលក្ខខណ្ឌចាំបាច់ដើម្បីធានាបាននូវលទ្ធផលថេរ។ នៅក្នុងប្រទេសចិន មានតម្រូវការបន្ទាន់ក្នុងការបង្រួបបង្រួម និងកំណត់ស្តង់ដារនៃការធ្វើតេស្តគ្លីនីកនៃហ្សែន KRAS និងដើម្បីបង្កើតកម្មវិធីធ្វើតេស្តស្តង់ដារ និងស្តង់ដារស្របតាមតម្រូវការផ្សេងៗគ្នា ហើយកម្មវិធីនេះអាចត្រូវបានពង្រីកដល់ការរកឃើញ BRAF, PIK23450_3CA, EGFR និង ហ្សែនផ្សេងទៀតដើម្បីលើកកម្ពស់ការធ្វើតេស្តរោគវិទ្យាម៉ូលេគុលគ្លីនិក។